1、 Numro de rfrence ISO 20079:2005(F) ISO 2005NORME INTERNATIONALE ISO 20079 Premire dition 2005-11-01Qualit de leau Dtermination de leffet toxique des constituants de leau et des eaux rsiduaires vis-vis des lentilles deau (Lemna minor) Essai dinhibition de la croissance des lentilles deau Water quali
2、ty Determination of the toxic effect of water constituents and waste water on duckweed (Lemna minor) Duckweed growth inhibition test ISO 20079:2005(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, c
3、e fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit d
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5、que General Info du fichier; les paramtres de cration PDF ont t optimiss pour limpression. Toutes les mesures ont t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat cen
6、tral ladresse donne ci-dessous. ISO 2005 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccor
7、d crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Publi en Suisse ii ISO 2005 Tous droits rservsISO 20079:2005(F) ISO 2005
8、Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv Introduction v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Termes et dfinitions 1 4 Principe 4 5 Interfrences . 4 6 Appareillage 4 7 Ractifs 5 8 Organismes dessai 7 9 Cultures mres et prcultures. 7 10 Mode opratoire 8 11 Critres de validit
9、 11 12 Expression des rsultats . 11 13 Estimation des valeurs de CE(r) xpour le nombre de frondes et pour le second paramtre observ 13 14 Report des rsultats . 13 15 Prcision 13 16 Rapport dessai . 14 Annex A (informative) Prparation de milieux nutritifs 15 Annex B (informative) Mesurage de la dilut
10、ion minimale sans effet (DMSE) des eaux rsiduaires valuation simplifie pour lanalyse des eaux rsiduaires . 20 Annex C (informative) Fournisseurs de lespce Lemna . 23 Bibliographie 24 ISO 20079:2005(F) iv ISO 2005 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est
11、une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations inte
12、rnationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux
13、rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requier
14、t lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits
15、 de proprit et averti de leur existence. LISO 20079 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 5, Mthodes biologiques. ISO 20079:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs v Introduction La lentille deau Lemna minor est utilise comme organisme modle reprsentatif des plantes
16、 aquatiques suprieures. Les lentilles deau sont des angiospermes monocotyldones flottantes, autonomes et appartiennent aux Arales dans la sous-classe Aridae. Ce sont des plantes suprieures croissance rapide dont la rpartition stend des tropiques la zone arctique. En tant que producteurs primaires, e
17、lles reprsentent une source de nourriture pour le gibier deau, les poissons et les petits animaux et servent de support physique divers petits invertbrs. Les lentilles deau peuvent tre altres par certains constituants prsents dans les eaux et les effluents (voir Annexe B). Linhibition de la croissan
18、ce rsultante est calcule partir des paramtres observs (nombre de frondes, surface des frondes, chlorophylle et poids sec) par diffrentes mthodes dfinies de calcul. Des valeurs de concentrations effectives (CE) sont dtermines pour permettre une valuation des effets toxiques des constituants prsents d
19、ans les eaux (par exemple produits chimiques, produits phytopharmaceutiques). Lvaluation pour au moins deux des paramtres observs se base sur les taux de croissance moyens spcifiques. Lessai est conu pour mesurer la rponse des substances dissoutes dans les eaux. Ceci comprend la dfinition du niveau
20、de dilution ou de la concentration de lchantillon soumis essai laquelle un paramtre observ (critre deffet) est inhib par rapport un tmoin un pourcentage dfini. NORME INTERNATIONALE ISO 20079:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 1 Qualit de leau Dtermination de leffet toxique des constituants de leau
21、et des eaux rsiduaires vis-vis des lentilles deau (Lemna minor) Essai dinhibition de la croissance des lentilles deau AVERTISSEMENT Il convient que les personnes utilisant la prsente Norme internationale soient familiarises avec les pratiques courantes de laboratoire. La prsente Norme internationale
22、 ne prtend pas couvrir tous les problmes de scurit potentiels lis son utilisation. Il est de la responsabilit de lutilisateur de mettre en place des pratiques dhygine et de scurit appropries et de sassurer de la conformit avec toutes les dispositions rglementaires nationales. IMPORTANT Il est essent
23、iel que les essais raliss conformment la prsente Norme internationale soient excuts par du personnel form. 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie une mthode permettant la dtermination de linhibition de la croissance des lentilles deau (Lemna minor) provoque par des substances
24、 et des prparations contenues dans les eaux, les eaux rsiduaires urbaines aprs traitement et les effluents industriels. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rf
25、rences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 5667-16, Qualit de leau chantillonnage Partie 16: Lignes directrices pour les essais biologiques des chantillons ISO 10260, Qualit de leau Mesurage des paramtres biochimiques Dosage spectro
26、mtrique de la chlorophylle a 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 cultures axniques cultures monospcifiques dorganismes, sans champignons, algues ou autres espces de macrophytes 3.2 paramtres de calcul paramtres, drivs des dif
27、frents critres observs, permettant dvaluer la toxicit par diffrentes mthodes de calcul EXEMPLE En loccurrence, les taux de croissance drivs du nombre de frondes, de la surface des frondes, de la chlorophylle et du poids sec reprsentent des paramtres de calcul dans la prsente Norme internationale. IS
28、O 20079:2005(F) 2 ISO 2005 Tous droits rservs3.3 chlorose dpigmentation (jaunissement des tissus des frondes) 3.4 colonie ensemble de frondes mres et filles, relies entre elles, parfois dsign comme une plante 3.5 lot tmoin milieu tmoin, incluant les organismes utiliss pour lessai 3.6 milieu tmoin co
29、mbinaison de leau de dilution et/ou du milieu nutritif utilise pour lessai 3.7 eau de dilution eau ajoute lchantillon soumis essai afin de prparer une srie dfinie de dilutions 3.8 temps de doublement quotient du logarithme nprien de 2 (ln 2) divis par le taux de croissance moyen spcifique 3.9 concen
30、tration efficace concentration de lchantillon soumis essai (CE x ) laquelle un effet de x % est mesur par rapport au tmoin NOTE Afin dindiquer sans ambigut une valeur de CE drive du taux de croissance, il est propos dutiliser le symbole CE(r), suivi du paramtre observ utilis, par exemple CE(r) (nomb
31、re de frondes). 3.10 fronde structure individuelle sous forme de feuille dans une colonie de lentilles deau; la plus petite unit (individuelle) capable de se reproduire 3.11 surface des frondes surface totale de toutes les frondes directement visibles du dessus ( la verticale du rcipient) 3.12 nombr
32、e de frondes toutes les frondes issues dune fronde mre, directement visibles du dessus, sans grossissement 3.13 croissance augmentation de la biomasse au cours du temps rsultant de la production de nouveaux tissus NOTE Dans cet essai, elle fait rfrence lun des paramtres observs. 3.14 taux de croissa
33、nce paramtre de calcul dfini comme le quotient de la diffrence des logarithmes npriens dun des paramtres observs et de la priode de temps respective NOTE Si la priode correspond la dure totale de lessai, le terme est dsign sous le nom de taux de croissance moyen spcifique. Si elle correspond la prio
34、de entre deux mesurages au cours de lessai, le terme est dsign sous le nom de taux de croissance squentiel (voir 12.1.2). ISO 20079:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 3 3.15 inoculum nombre de frondes (colonies) ajoutes au lot dessai au dbut de lessai 3.16 ncrose mort localise des tissus des fronde
35、s (cest-dire apparition dune coloration marron ou blanche) 3.17 milieu nutritif solution aqueuse contenant les nutriments et les micronutriments essentiels pour la croissance des lentilles deau 3.18 paramtres observs paramtres observs ou mesurs permettant de quantifier la biomasse, tels que le nombr
36、e de frondes, la surface des frondes, la chlorophylle, le poids sec, mesurs ou dnombrs une ou plusieurs fois NOTE Ces paramtres (tels que le nombre de frondes, la surface des frondes ou la teneur en chlorophylle et le poids sec) sont pertinents pour lvaluation de la croissance et de la vitalit des o
37、rganismes dessai. 3.19 prculture culture de lentilles deau utilise pour lacclimatation des plantes aux conditions dessai et pour la croissance des plants qui seront utiliss dans linoculum 3.20 racine partie de la plante Lemna qui prsente une structure radiculaire 3.21 culture mre culture monospcifiq
38、ue de lentille deau, dans le but de conserver en laboratoire lespce dfinie Lemna dorigine et de fournir linoculum pour la prculture NOTE Il est indispensable dutiliser des souches dfinies et contrles, en raison des incertitudes lies la taxonomie des espces. La liste des adresses des fournisseurs est
39、 donne lAnnexe C. 3.22 lot dessai milieu dessai incluant les organismes utiliss pour lessai 3.23 milieu dessai combinaison de lchantillon soumis essai, de leau de dilution et/ou du milieu nutritif, utilise pour lessai 3.24 chantillon pour essai portion discrte dun chantillon (par exemple, eau prleve
40、 partir du milieu rcepteur, eaux uses, substances chimiques dissoutes ou prparations, produits et composs) ayant subi un prtraitement en fonction des besoins de cet essai (dissolution, filtrage, neutralisation, par exemple) ISO 20079:2005(F) 4 ISO 2005 Tous droits rservs4 Principe Les plantes de les
41、pce Lemna minor sont cultives en culture monospcifique diffrentes concentrations de la substance soumise essai pendant une priode de sept jours. Lobjectif de lessai est de quantifier les effets des substances sur la croissance vgtative pendant cette priode par lvaluation du nombre de frondes et de l
42、a biomasse (surface totale des frondes, poids sec ou chlorophylle). Afin de quantifier les effets des substances, le taux de croissance des solutions dessai est compar celui des tmoins et la concentration provoquant une inhibition de x % du taux de croissance est dtermine et exprime en tant que CE(r
43、) x . 5 Interfrences Les substances non solubles, faiblement solubles ou volatiles, les substances bio- ou photodgradables, les substances ragissant avec leau de dilution ou avec le milieu nutritif ou dont ltat volue au cours de lessai peuvent fausser ou rduire la reproductibilit des rsultats (voir
44、lISO 5667-16).Il est ncessaire de prter une attention particulire en cas daccumulation de substances la surface de leau, tant donn que ce phnomne peut augmenter les effets sur les lentilles deau. 6 Appareillage Le dispositif exprimental dtermine les besoins en matriel de laboratoire. 6.1 Rcipients c
45、ylindriques, (bchers en verre, cristallisoirs, botes de Petri). Volume minimal de 150 ml (pour 2/3 du volume total, cest-dire 100 ml de solution dessai). 6.2 Couvercles en verre uniformes. Il est possible de prvoir des couvercles pour minimiser lvaporation et la contamination accidentelle. 6.3 Insta
46、llations temprature et clairage constants, chambre ou bain-marie temprature contrle, incubateur ou chambre climatique. 6.4 Spectromtre pour surveiller la chlorophylle, 665 nm et 750 nm. 6.5 Luminomtre, utiliser pour mesurer lintensit lumineuse. 6.6 pH-mtre. 6.7 Pinces. 6.8 Verrerie, pour la prparati
47、on des diffrentes gammes de concentrations et du milieu nutritif (flacons volumtriques, cylindres gradus, pipettes, botes de Petri). 6.9 Analyseur dimages, pour mesurer le nombre et la surface des frondes. 6.10 Autoclave. 6.11 Appareil de filtration, pour la filtration strile. ISO 20079:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 5 7 Ractifs Nutiliser que des ractifs de qualit analytique reconnue. 7.1 Eau de dilution, eau distille ou dionise ou eau de puret quivalente avec une conductivit u 10 S
