1、 Numros de rfrence ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) ISO et FIL 2007NORME INTERNATIONALE ISO 22662 FIL 198 Premire dition 2007-09-15 Lait et produits laitiers Dtermination de la teneur en lactose par chromatographie liquide haute performance (Mthode de rfrence) Milk and milk products Determination o
2、f lactose content by high- performance liquid chromatography (Reference method) ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis
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6、ariat central de lISO ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO et FIL 2007 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y
7、 compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit soit de lISO soit de la FIL, lune ou lautre des adresses ci-aprs. ISO copyright office Fdration Internationale de Laiterie Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Diamant Building Boulevard Auguste Reyers 80 B-1030 Bruxelles Tel. + 41 22 749 01 1
8、1 Tel. + 32 2 733 98 88 Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13 E-mail copyrightiso.org E-mail infofil-idf.org Web www.iso.org Web www.fil-idf.org Publi en Suisse ii ISO et FIL 2007 Tous droits rservsISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv
9、Avant-propos v 1 Domaine dapplication 1 2 Rfrences normatives 1 3 Termes et dfinitions 1 4 Principe 1 5 Ractifs 2 6 Appareillage 2 7 chantillonnage 3 8 Prparation de lchantillon pour essai 4 9 Mode opratoire 4 9.1 Prparation des solutions talons 4 9.2 Prparation de la prise dessai 4 9.3 Prparation d
10、u filtrat. 5 9.4 Dtermination CLHP. 5 10 Calcul et expression des rsultats 7 10.1 Calcul . 7 10.2 Expression des rsultats . 7 11 Fidlit . 7 11.1 Essai interlaboratoires . 7 11.2 Rptabilit 7 11.3 Reproductibilit. 8 12 Rapport dessai . 8 Annexe A (informative) Rsultats des essais interlaboratoires 9 B
11、ibliographie 11 ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) iv ISO 2007 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux c
12、omits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commiss
13、ion lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de No
14、rmes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire
15、lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 22662 FIL 198 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait e
16、t produits laitiers, et la Fdration internationale de laiterie (FIL). Elle est publie conjointement par lISO et la FIL. ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs v Avant-propos La FIL (Fdration internationale de laiterie) est une fdration mondiale du secteur laitier avec un Comit
17、 National dans chacun de ses pays membres. Chaque Comit National a le droit de faire partie des Comits permanents de la FIL auxquels sont confis les travaux techniques. La FIL collabore avec lISO pour llaboration de mthodes normalises danalyse et dchantillonnage pour le lait et les produits laitiers
18、. Les projets de Normes internationales adopts par les quipes dAction et les Comits permanents sont soumis aux Comits Nationaux pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 50 % au moins des Comits Nationaux de la FIL votants. Lattention est appele sur le fait qu
19、e certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO 22662 FIL 198 a t labore par la Fdration interna
20、tionale de laiterie (FIL) et le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publie conjointement par la FIL et lISO. Lensemble des travaux a t confi lquipe dAction mixte ISO-FIL Dtermination du lactose et du lactate du comit permanent Princi
21、paux composants du lait, sous la conduite de son chef de projet, Monsieur R. Kouaouci (CA). NORME INTERNATIONALE ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 1 Lait et produits laitiers Dtermination de la teneur en lactose par chromatographie liquide haute performance (Mthode de rfr
22、ence) 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale spcifie la mthode de rfrence permettant de dterminer la teneur en lactose du lait cru, des laits traits thermiquement, du lait sec ainsi que de la crme crue et pasteurise. Cette mthode ne sapplique pas aux laits ferments, ni aux laits auxq
23、uels des oligosaccharides ont t ajouts. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris
24、les ventuels amendements). ISO 648, Verrerie de laboratoire Pipettes un trait ISO 3696, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes dessai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 teneur en lactose fraction massi
25、que de substance dtermine selon la mthode spcifie dans la prsente Norme internationale NOTE La fraction massique peut tre exprime en pourcentage. 4 Principe Un talon interne D(+)-mlzitose est ajout un volume pes de lait et des talons de lactose. Un ractif chimique (solution de Biggs-Szijarto) est aj
26、out pour prcipiter les fractions de composants gras et protiques du lait. Lchantillon est filtr deux fois avant linjection, dabord laide dun filtre en papier, puis laide dun filtre en nylon de porosit 0,45 m. Le lactose et ltalon interne sont spars par une colonne changeuse de cations remplie sous f
27、orme de plomb et dtects par un rfractomtre diffrentiel ou tout autre dtecteur adapt. De leau, de qualit CLHP, est utilise comme phase mobile. ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) 2 ISO 2007 Tous droits rservs5 Ractifs Sauf spcification contraire, utiliser uniquement des ractifs de qualit analytique rec
28、onnue. 5.1 Eau de qualit CLHP. laide de lunit de filtration du solvant (6.10), filtrer de leau conforme aux exigences de lISO 3696, Qualit 1, obtenue partir de lunit de purification de leau (6.9). Pour amliorer la performance de la pompe et pour obtenir une ligne de base stable, dgazer la phase mobi
29、le quotidiennement laide de lune des techniques disponibles comme le barbotage par lhlium, les ultrasons ou laide dun systme de dgazage vide ou en ligne. 5.2 Solution de D(+)-mlzitose hydrate, c(C 18 H 32 O 16 ,H 2 O) = 50 mg/ml. Dissoudre une quantit quivalente de D(+)-mlzitose hydrate dans de leau
30、 (5.1) pour obtenir une concentration finale de 50 mg/ml de la forme anhydre. La solution de D(+)-mlzitose peut tre conserve 4 C pendant une semaine tout au plus. 5.3 -Lactose monohydrate, C 12 H 22 O 11 ,H 2 O. Avant utilisation, scher l -lactose monohydrate 70 C pendant 4 h. Le laisser refroidir t
31、emprature ambiante dans un dessiccateur. NOTE Aprs schage, le lactose demeure sous sa forme monohydrate. 5.4 Solution Biggs-Szijarto. Dans une fiole jauge un trait de 200 ml, dissoudre 25 g dactate de zinc dihydrate, Zn(CH 3 COO) 2 ,2H 2 O et 12,5 g dacide phosphotungstique monohydrate (W 12 O 36 ,H
32、 3 PO 4 ,H 2 O) dans environ 100 ml deau de qualit CLHP (5.1). Ajouter 20 ml dacide actique glacial (CH 3 COOH). Complter 200 ml avec de leau de qualit CLHP (5.1), puis mlanger. Aprs utilisation, la solution peut tre conserve 4 C pendant une semaine tout au plus. PRCAUTIONS DE SCURIT Suivre les reco
33、mmandations du fabricant en matire de sant et de scurit quant la conservation et la manipulation de ces produits chimiques. 6 Appareillage Matriel courant de laboratoire et, en particulier, ce qui suit. 6.1 Colonne CLHP avec rsine changeuse dions, de 300 mm de long et de 7,8 mm de diamtre interne, a
34、vec 8 % de copolymre rticul, base de rsine changeuse de cations en polystyrne- divinylbenzne, remplissage de la colonne sous forme plomb. 6.2 Colonne de garde. Pour prolonger la vie de la colonne, remplacer la colonne de garde toutes les 200 injections. 6.3 Support de colonne de garde. 6.4 Four colo
35、nne, capable de maintenir une temprature constante de 85 C 1 C. 6.5 Pompe CLHP, pouvant assurer un dbit compris entre 0 ml/min et 10 ml/min. 6.6 chantillonneur automatique CLHP. ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) ISO 2007 Tous droits rservs 3 NOTE Une injection manuelle est possible. 6.7 Rfractomtre
36、diffrentiel, haute sensibilit. NOTE Dautres dtecteurs peuvent tre utiliss, par exemple un dtecteur dispersion de la lumire par vaporation. 6.8 Logiciel, pouvant automatiser les injections, mais aussi collecter les donnes, traiter et grer toutes les informations chromatographiques. 6.9 Unit de purifi
37、cation de leau, pouvant procurer de leau conforme aux exigences du type 1 de lISO 3696, dont la rsistivit est comprise entre 10 M cm et 18 M cm. 6.10 Unit de filtration du solvant, comprenant une source vide avec une membrane filtrante de porosit 0,45 m et de 47 mm de diamtre. 6.11 Balance analytiqu
38、e, dune prcision de 1 mg et dune lisibilit de 0,1 mg. 6.12 Bain-marie, capable de maintenir une temprature comprise entre 38 C et 40 C. 6.13 Pipette distributrice prcise, pipette automatique prcise ou pipettes jauges un trait, conforme aux exigences de lISO 648, classe A et dune capacit de 2 ml. 6.1
39、4 Entonnoir filtrant, de 75 mm de diamtre. 6.15 Papier-filtre, de 110 mm de diamtre, No 1 Whatman 1 )ou quivalent. 6.16 Filtre seringue en nylon, de porosit 0,45 m. NOTE Un filtre en ligne de mme porosit peut tre utilis. 6.17 Seringue, type Luer verrouillage, dune capacit de 5 ml. 6.18 Flacons CLHP,
40、 avec bouchons. 6.19 Fioles jauges un trait, dune capacit de 10 ml 0,02 ml. NOTE Des fioles dune capacit suprieure 10 ml peuvent aussi tre utilises, condition de tenir compte du facteur de concentration. 7 chantillonnage Il convient quun chantillon reprsentatif ait t envoy au laboratoire et quil nai
41、t pas t dtrior ou modifi pendant le transport ou la conservation. Lchantillonnage ne fait pas partie de la mthode spcifie dans la prsente Norme internationale. Une mthode dchantillonnage recommande est indique dans lISO 707|FIL 50. 1) Whatman est un exemple de produit appropri disponible sur le marc
42、h. Cette information est donne lintention des utilisateurs de la prsente Norme internationale et ne signifie nullement que lISO ou la FIL approuve ou recommande lemploi exclusif du produit ainsi dsign. ISO 22662:2007(F) FIL 198:2007(F) 4 ISO 2007 Tous droits rservs8 Prparation de lchantillon pour es
43、sai Concernant le lait et la crme liquides, chauffer lchantillon pour essai dans le bain-marie (6.12) jusqu ce quil ait atteint une temprature comprise entre 38 C et 40 C. Mlanger doucement lchantillon pour essai en retournant la bouteille de faon rpte. Refroidir rapidement lchantillon jusqu 20 C 1
44、C tout en le mlangeant doucement avant de peser la prise dessai (9.2). 9 Mode opratoire 9.1 Prparation des solutions talons 9.1.1 Dans une fiole jauge un trait de 10 ml (6.19), peser, 1 mg prs, la quantit approprie d -lactose monohydrate (5.3) pour obtenir lquivalent dune solution 20 mg/ml d -lactos
45、e anhydre. NOTE Il convient dexprimer la concentration obtenue sous forme de lactose anhydre. 9.1.2 Dissoudre l -lactose monohydrate (9.1.1) dans environ 5 ml deau de qualit CLHP (5.1). Ajouter 2 ml de solution de D(+)-mlzitose (5.2), utilis comme talon interne, dans la fiole. Diluer avec de leau de
46、 qualit CLHP (5.1) jusquau repre et mlanger en retournant la fiole. Exprimer la concentration finale d - lactose en milligrammes de la forme anhydre par millilitre. 9.1.3 Filtrer la solution talon travers un papier-filtre pliss (6.15) laide dun entonnoir filtrant (6.14). Aspirer le filtrat dans une
47、seringue (6.17). Visser le filtre seringue en nylon (6.16) la seringue, puis transfrer chaque filtrat dans un flacon CLHP (6.18). Injecter chaque solution talon deux fois, conformment aux exigences mentionnes en 9.4.2. La solution talon ainsi prpare peut fournir trois jeux de solutions dtalonnage. Utiliser chaque jeu une seule fois pour talonner la colonne CLHP. Conserver les jeux de solution talon de lactose non utiliss 4 C pendant une semaine to
