1、Norme internationale INTERNATIONAL ORGANIZATION FOR STANDARDIZATIONMEXI(AYHAPOAHAFI OPrAHM3AUMR Il0 CTAHAPTM3AMMORGANlSATlON INTERNATIONALE DE NORMALISATION Aliments des animaux - Dosage du gossypol libre et du gossypol total Animal feeding stuffs - Determination of free and total goss ypol Premire
2、dition - 1985-11-15 CDU 636.085.19: 543.8 Rf. no : ISO 68664985 (F) Descripteurs : produit agricole, produit dalimentation animale, analyse chimique, dosage, gossypol. Prix bas sur 3 pages Avant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationau
3、x de normalisation (comits membres de IISO). Llaboration des Normes internationales est confie aux comits techniques de IISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouverne- ment
4、ales, en liaison avec IISO participent galement aux travaux. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour approbation, avant leur acceptation comme Normes inter- nationales par le Conseil de IISO. Les Normes internationales sont approuves
5、 confor- mment aux procdures de IISO qui requirent lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. La Norme internationale ISO 6866 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits agricoles alimentaires. Lattention des utilisateurs est attire sur le fait que toutes les Normes interna
6、tionales sont de temps en temps soumises rvision et que toute rfrence faite une autre Norme internationale dans le prsent document implique quil sagit, sauf indication contraire, de la dernire dition. 0 Organisation internationale de normalisation, 1985 l Imprim en Suisse NORME INTERNATIONALE ISO 68
7、66-1985 (FI Aliments des animaux - Dosage du gossypol libre et du gossypol total 1 Objet La prsente Norme internationale spcifie une mthode de dosage du gossypol libre et du gossypol total, et des substan- ces chimiquement apparentes, dans les aliments des animaux. 2 Domaine dapplication La mthode e
8、st applicable aux graines, farines et tourteaux de coton ainsi quaux aliments composs qui en contiennent. La limite de dtection pour le gossypol libre est de 20 mg/ kg et celle pour le gossypol total de 50 mg/ kg. 3 Rfrences ISO 6497, Aliments des animaux - chantllonnage. 1) ISO 6498, Aliments des a
9、nimaux - Prparation des chantil- lons pour essai. 4 Principe Extraction du gossypol, en prsence damino- propanol, soit par un mlange de propanol-2 et dhexane pour le dosage du gossypol libre, soit par la dimthylformamide pour le dosage du gossypol total. Transformation du gossypol au moyen daniline
10、en gossypol-dianiline. Mesure de Iabsorbance la longueur donde du maximum dabsorbance (entre 435 et 445 nm). 5 Ractifs Tous les ractifs doivent tre de qualit analytique reconnue. Leau utilise doit tre de leau distille ou de leau de puret au moins quivalente. 5.1 Propanok2/hexane, mlange 60 + 40 en v
11、olume. 5.2 Solvant A. Dans une fiole jauge de 1 000 ml, verser environ 500 ml du mlange propanol-2/hexane (5.11, 2 ml damino- propanol, 8 ml dacide actique cristallisable et 50 ml deau. Complter au trait repre avec le mlange propanol.-2/hexane. Ce ractif est stable durant une semaine seulement. 5.3
12、Solvant 8. Dans une fiole jauge de 100 ml, verser 2 ml damino- propanol et 10 ml dacide actique cristallisable. Refroidir la tem- prature ambiante et complter au trait repre avec du N,IV-dimthylformamide. Ce ractif est stable durant une semaine seulement. 5.4 Aniline. Si Iabsorbance de lessai blanc
13、excde 0,022, distiller Ianiline sur poudre de zinc en liminant les premire et dernire frac- tions de 10 % du distillat. Stocker ce ractif en flacon bouch de verre brun et au rfrigrateur (0 4 OC). Le ractif est stable durant plusieurs mois. 6 Appareillage Matriel courant de laboratoire, et notamment
14、6.1 Agitateur-culbuteur, ayant une frquence de rotation denviron 35 min - 1, ou autre systme agitateur. 6.2 Spectromtre, permettant deffectuer les mesures des longueurs donde comprises entre 435 et 445 nm, quip de cuves de 10 mm dpaisseur. 6.3 Fioles jauges, de 25 et 50 ml de capacit. 6.4 Fioles con
15、iques, de 50, 100 et 250 ml de capacit. 7 chantillonnage Prlever lchantillon pour laboratoire conformment IISO 6497. 1) Actuellement au stade de projet. ISO 68664985 (F) 8 Mode opratoire 8.3.1.8 Mesurer laide du spectromtre (6.21, la longueur donde du maximum dabsorbance (entre 435 et 445 nm), 8.1 P
16、rparation de lchantillon pour essai Prparer lchantillon pour essai conformment IISO 6498. Iabsorbance de la solution de lessai blanc (fiole F; 8.3.1.7) par rapport la solution de rfrence (fiole E; 8.3.1.5) et Iabsorbance de la solution dessai (fiole D; 8.3.1.7) par rapport la solution de rfrence (fi
17、ole C; 8.3.1.3). 8.2 Prise dessai La masse de la prise dessai dpend de la teneur prsume en gossypol. Pour le dosage du gossypol libre dans les graines, les farines et les tourteaux de coton, la masse de la prise dessai ne doit pas excder 1 g; pour les aliments composs elle pourra atteindre 5 g. Pour
18、 le dosage du gossypol total, la masse de la 8.3.1.9 Soustraire Iabsorbance de la solution de lessai blanc de celle de la solution dessai pour obtenir Iabsorbance corrige. 8.3.2 Dtermination du gossypol total prise dessai pourra varier de 0,5 5 g. NOTE - La masse de la prise dessai doit permettre do
19、btenir, dans la partie aliquote du filtrat, la quantit de gossypol libre indique en 8.3.1.2 ou la quantit de gossypol total indique en 8.3.2.4. 8.3.2.1 Introduire la prise dessai (8.2) dans une fiole jauge de 50 ml et ajouter 10 ml de solvant B (5.3). 8.3 DAtermination 8.3.2.2 Introduire 10 ml de so
20、lvant B (5.3) dans une autre fiole jauge de 50 ml. 8.3.1 Dtermination du gossypol libre 8.3.1.1 Introduire la prise dessai (8.2) dans une fiole conique de 250 ml, dont le fond est recouvert de billes de verre. Ajouter, la pipette, 50 ml du solvant A (5.21, boucher la fiole et mlan- ger durant 1 h da
21、ns lagitateur-culbuteur (6.1). Filtrer sur un papier filtre sec et recueillir le filtrat dans une fiole conique de 100 ml. Au cours de la filtration, recouvrir lentonnoir dun verre de montre. 8.3.2.3 Chauffer les deux fioles (8.3.2.1 et 8.3.2.2) pendant 30 min dans un bain deau bouillante. Refroidir
22、 temprature ambiante et complter au trait repre avec le mlange propanol-2/ hexane (5.1). Mlanger et laisser reposer pendant 10 15 min, puis filtrer et recueillir les filtrats dans des fioles coniques de 50 ml (6.4). 8.3.1.2 Introduire, la pipette, respectivement dans deux fio- les jauges de 25 ml (C
23、 et D), des parties aliquotes identiques de filtrat contenant de 50 100 1-19 de gossypol. Complter ventuellement le volume 10 ml laide du solvant A (5.2). 8.3.2.4 Introduire, la pipette, 2 ml du filtrat obtenu partir de la prise dessai et contenant de 40 200 pg de gossypol, res- pectivement dans deu
24、x fioles jauges de 25 ml, et 2 ml du filtrat de la seconde fiole dans deux autres fioles jauges de 25 ml. 8.3.1.3 Amener au trait repre le contenu de la fiole C avec le mlange propanol-2/ hexane (5.1) et mlanger. Amener au trait repre les contenus de lune des fioles conte- nant la solution dessai et
25、 de lune des fioles pour lessai blanc, avec le mlange propanol-2/ hexane (5.1). Cette solution sera utilise comme solution de rfrence pour la mesure de la solution dessai. Ces solutions seront utilises comme solutions de rfrence. 8.3.1.4 Introduire, la pipette, 10 ml du solvant A (5.21, res- pective
26、ment dans deux autres fioles jauges de 25 ml (E et FI. 8.3.1.5 Amener au trait repre le contenu de la fiole E avec le mlange propanol-2/hexane (5.1) et mlanger. 8.3.2.5 Ajouter 2,0 ml daniline (5.4) la solution dessai et la solution de lessai blanc restantes. Chauffer pendant 30 min dans un bain dea
27、u bouillante pour dvelopper la coloration. Refroidir temprature ambiante, complter au trait repre avec le mlange propanol-2/hexane (5.11, mlanger et laisser reposer pendant 1 h. Cette solution sera utilise comme solution de rfrence pour la mesure de la solution de lessai blanc. 8.3.2.6 Mesurer les a
28、bsorbantes des solutions comme dcrit 8.3.1.6 Ajouter 2,0 ml daniline (5.41, respectivement dans les fioles D et F. Chauffer pendant 30 min sur un bain deau bouil- lante pour dvelopper la coloration. 8.3.1.7 Refroidir temprature ambiante, complter au trait repre avec le mlange propanol-2/hexane (5.11
29、, mlanger et laisser reposer pendant 1 h. en 8.3.1.8 et calculer Iabsorbance corrige comme dcrit en 8.3.1.9. 8.4 Nombre de dterminations Effectuer deux dterminations sur le mme chantillon pour essai. 2 ISO 68664985 (F) 9 Expression des rsultats 9.1 Mode de calcul et formule La teneur en gossypol lib
30、re ou en gossypol total, exprime en milligrammes par kilogramme du produit tel quel, est gale A x 1250 x 1000 A x 1,25 = x 106 axmxV amV A est Iabsorbance corrige (8.3.1.9 ou 8.3.2.6) ; m est la masse, en grammes, de la prise dessai (8.2); V est le volume, en millilitres, de la partie aliquote du fi
31、ltrat prleve en 8.3.1.2 ou 8.3.2.4; a est le coefficient spcifique dabsorbance massique (62,5 cm - 1. g -1. I dans le cas du gossypol libre; 60,O cm - 1. g - 1. I dans le cas du gossypol total). Prendre comme rsultat la moyenne arithmtique des deux dterminations (voir 8.4) si la condition de rptabil
32、it (voir 9.2) est remplie. 9.2 Rptabilit La diffrence entre les rsultats de deux dterminations, effec- tues simultanment ou rapidement lune aprs lautre sur le mme chantillon, ne doit pas dpasser 15 % (en valeur relative) de la valeur moyenne teneurs en gossypol infrieures 500 mg/kg; pour des 75 mg/k
33、g (en valeur absolue) pour des teneurs en gossypol comprises entre 500 et 750 mg/kg ; 10 % (en valeur relative) de la valeur moyenne teneurs en gossypol suprieures a750 mglkg. pour des 10 Procs-verbal dessai Le pro&-verbal dessai doit indiquer la mthode utilisee et le rsultat obtenu. II doit, en out
34、re, mentionner tous les dtails opratoires non prvus dans la prsente Norme internationale, ou facultatifs, ainsi que les incidents ventuels susceptibles davoir agi sur le rsultat. Le pro&-verbal dessai doi t donner tous les renseignemen ncessaires lidentification complte de 1 chantillon. Page blanche Page blanche Page blanche
