1、 Numro de rfrence ISO 8199:2005(F) ISO 2005NORME INTERNATIONALE ISO 8199 Deuxime dition 2005-06-15Qualit de leau Lignes directrices gnrales pour le dnombrement des micro-organismes sur milieu de culture Water quality General guidance on the enumeration of micro-organisms by culture ISO 8199:2005(F)
2、PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune licence autorisant lutilisati
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5、de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2005 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cett
6、e publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copyright office Case postale 56
7、 CH-1211 Geneva 20 Tel. + 41 22 749 01 11 Fax. + 41 22 749 09 47 E-mail copyrightiso.org Web www.iso.org Version franaise parue en 2007 Publi en Suisse ii ISO 2005 Tous droits rservsISO 8199:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs iii Sommaire Page Avant-propos. iv Introduction . vi 1 Domaine dapplicati
8、on 1 2 Rfrences normatives 1 3 Principe 1 4 Gnralits 2 5 Diluants et milieux de culture 2 6 Strilisation des appareils et de la verrerie . 5 7 chantillons. 5 8 Dnombrement aprs ensemencement des prises dessai de lchantillon sur (ou dans) un milieu solide. 6 9 Dnombrement par ensemencement en milieu
9、liquide 16 Annexe A (informative) Critres de choix dune technique de dnombrement. 24 Annexe B (informative) Tables NPP . 29 Bibliographie 37 ISO 8199:2005(F) iv ISO 2005 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux
10、 de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouver
11、nementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, P
12、artie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits
13、membres votants. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LI
14、SO 8199 a t labore par le comit technique ISO/TC 147, Qualit de leau, sous-comit SC 4, Mthodes microbiologiques. Cette deuxime dition annule et remplace la premire dition (ISO 8199:1988) qui a fait lobjet dune rvision technique. Cette version corrige de lISO 8199:2005 intgre les principales modifica
15、tions suivantes: 5.2.5 point b), 4 ealina dplacement de la deuxime phrase Si la solution lalina Prparation; 8.4.2 (Exemple 1) remplacement de et si V sest 1 ml par et si V sest gal 1 ml; 8.4.2 (Exemple 2) remplacement de et si V sest 1 ml par et si V sest gal 100 ml; 8.4.3 (exemple) remplacement de
16、et si V sest 1 ml par et si V sest gal 1 ml et Bibliographie correction des Rfrences 14, 16, 17 et 19. ISO 8199:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs v Les quations en 8.4.2 et en 9.5.2.1 ont t numrotes, ce qui conduit aux modifications suivantes: 8.4.2 (quations non numrotes) numrotation en quation (
17、3) et quation (4); 8.4.3 (quation) renumrotation en quation (5); 8.4.4.1 (quation) renumrotation en quation (6); 9.5.2.1 (quation non numrote) numrotation en quation (7); 9.5.2.2 (quation) renumrotation en quation (8); 9.6.2 (quation) renumrotation en quation (9); et 9.6.3 (quation) renumrotation en
18、 quation (10). Plusieurs corrections mineures ont t apportes, notamment: 8.2.3.2 (alina 3) remplacement de fondu par maintenu en surfusion; 8.4.2 sous lquation (2) dans lexplication des symboles d 1 , d 2 , ., d i , suppression du mot prise dessai; 9.3.3 (dernier alina, 7 eligne) ajout du mot puits
19、aprs 12 5 ml et 24 3 ml; 9.5.3.2 (exemple) dans lquation la fin de lexemple, remplacement de 1,61/(5 ml) 100 ml par (1,61/5 ml) 100 ml; 9.5.3.3 (alina 2, 5 eligne) ajout de parenthses 3 ou 5 et A.2.3.1 remplacement de une valeur de rfrence accepte par la valeur de rfrence accepte. ISO 8199:2005(F) v
20、i ISO 2005 Tous droits rservsIntroduction Les techniques disolement et de dnombrement des micro-organismes, bases sur la capacit de ces derniers se multiplier sur des milieux de culture spcifiques, sont un moyen important et largement utilis pour valuer la qualit microbiologique de leau. Le but du p
21、rsent guide est de runir en un seul document les informations communes aux diverses techniques de dnombrement pour viter la rptition des dtails techniques dans chaque norme et pour faciliter le choix de la technique la plus approprie un problme donn. NORME INTERNATIONALE ISO 8199:2005(F) ISO 2005 To
22、us droits rservs 1 Qualit de leau Lignes directrices gnrales pour le dnombrement des micro-organismes sur milieu de culture AVERTISSEMENT Il convient que lutilisateur de la prsente Norme internationale connaisse bien les pratiques courantes de laboratoire. La prsente norme na pas pour but de traiter
23、 tous les problmes de scurit qui sont, le cas chant, lis son utilisation. Il incombe lutilisateur de la prsente norme dtablir des pratiques appropries en matire dhygine et de scurit, et de sassurer de la conformit la rglementation nationale en vigueur. IMPORTANT Il est absolument indispensable que l
24、es essais mens conformment la prsente Norme Internationale le soient par du personnel dment form. 1 Domaine dapplication La prsente Norme internationale prsente des lignes directrices concernant des manipulations communes chaque technique dexamen microbiologique de leau, en particulier la prparation
25、 des chantillons, les milieux de culture et lappareillage. Elle dcrit galement les diverses techniques de dnombrement possibles et les critres de choix dune technique particulire. La prsente Norme internationale concerne principalement les bactries, les levures et les champignons. Certains aspects p
26、euvent aussi sappliquer aux virus et aux parasites. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence (y compri
27、s les ventuels amendements) sapplique. ISO 3696:1987, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes dessai ISO 19458, Qualit de leau chantillonnage pour analyse microbiologique 3 Principe Le principe gnral de ces techniques consiste ensemencer un volume connu dchantillon deau sur ou
28、dans un milieu de culture (solide ou liquide). Il est suppos quau cours de lincubation, chaque micro-organisme prsent se multiplie pour donner soit une colonie visible directement sur milieu solide, soit des changements daspect dans un milieu liquide. Le choix de telle ou telle mthode ne dpend pas s
29、eulement de la nature des micro-organismes recherchs, mais galement de la nature de leau et des raisons lorigine de lexamen. ISO 8199:2005(F) 2 ISO 2005 Tous droits rservs4 Gnralits Uniformit des tempratures et des dures (dincubation): Les amplitudes acceptes de temprature et de dure suivantes sont
30、appliques pendant lincubation et la conservation, dans la mesure o elles conviennent lorganisme cible prvu et sauf autre indication dans la norme spcifique. Tempratures de conservation: ( 70 10) C, ( 20 5) C, (5 3) C; Tempratures dincubation: (22 2) C, (36 2) C; Tempratures de strilisation: (115 3)
31、C, (121 3) C, (170 10) C; Dures dincubation: (21 3) h, (44 4) h, (68 4) h. Le cas chant, dautres dures et dautres tempratures peuvent tre spcifies pour des mthodes donnes. Les limites suprieures de la temprature dincubation sont trs strictes (elles peuvent avoir une grande influence sur la croissanc
32、e). Les limites infrieures de temprature peuvent tre dpasses pendant de courtes priodes, par exemple lors de louverture de la porte de lincubateur, mais elles doivent rapidement tre rtablies. Tolrances sur les volumes et les masses: Sauf indication contraire, lamplitude de toute valeur mesure est de
33、: valeur cite 5 %. 5 Diluants et milieux de culture 5.1 Gnralits 5.1.1 Exigences de qualit Les composants entrant dans la prparation des milieux de culture doivent tre de qualit constante et les produits chimiques de qualit analytique reconnue. Des produits chimiques de qualit diffrente peuvent tre
34、utiliss condition de pouvoir prouver quils donnent les mmes rsultats. Il est galement possible dutiliser des milieux complets ou des diluants dshydrats. Les instructions du fabricant doivent tre suivies scrupuleusement. Leau utilise doit tre de leau distille sur verre ou dminralise, exempte de subst
35、ances susceptibles dinhiber la croissance de micro-organismes dans les conditions de lessai. Elle doit tre conforme aux spcifications de lISO 3696:1987, qualit 3. Sauf indication contraire, les ingrdients sont ajouts au volume deau au lieu de venir complter un certain volume, conformment la pratique
36、 en microbiologie pour la prparation des milieux de culture. Vrifier la qualit des milieux de culture, des diluants et des filtres avant utilisation, par exemple en suivant le mode opratoire dcrit dans lISO 7704, lISO/TS 11133-1 ou lISO/TS 11133-2. 5.1.2 Strilisation Les diluants et les milieux de c
37、ulture doivent tre rpartis dans des rcipients supportant la strilisation en autoclave. Dans la plupart des cas, une temprature de (121 3) C durant 15 min est approprie. Toutefois, une dure et une temprature diffrentes peuvent parfois savrer ncessaires et les indications sont alors donnes dans chaque
38、 norme. La strilisation par filtration est galement possible pour les substances thermolabiles, avec un filtre de diamtre moyen de pores de 0,2 m, spcifi comme adapt la strilisation par le fabricant. ISO 8199:2005(F) ISO 2005 Tous droits rservs 3 5.2 Diluants Les diluants indiqus dans ce paragraphe
39、sont dusage courant en microbiologie de leau. Toutefois, la liste nest pas exhaustive et il est possible dutiliser dautres diluants adapts. Aprs la prparation, rpartir chaque solution dans les bouteilles et striliser, par exemple, en autoclave (121 3) C durant 15 min. Il est aussi possible de rparti
40、r le diluant en observant la meilleure asepsie aprs sa strilisation. Conserver temprature ambiante ou au rfrigrateur (5 3) C durant 6 mois au plus. Si le diluant prend un aspect anormal, le mettre au rebut. 5.2.1 Solution saline Composition Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g Eau (voir 5.1.1) 1 000 ml P
41、rparation Dissoudre les composants dans leau, en chauffant si ncessaire. Ajuster le pH en ajoutant une solution dhydroxyde de sodium c(NaOH) = 1 mol/l ou une solution dacide chlorhydrique c(HCI) = 1 mol/l de sorte quaprs strilisation (voir 5.1.2) le pH soit de 7,0 0,5 25 C. 5.2.2 Eau peptone Composi
42、tion Hydrolysat enzymatique de casine (peptone) 1,0 g Eau (voir 5.1.1) 1 000 ml Prparation Dissoudre les composants dans leau, en chauffant si ncessaire. Ajuster le pH en ajoutant une solution dhydroxyde de sodium c(NaOH) = 1 mol/l ou une solution dacide chlorhydrique c(HCI) = 1 mol/l de sorte quapr
43、s strilisation (voir 5.1.2) le pH soit de 7,0 0,5 25 C. 5.2.3 Solution peptone saline Composition Hydrolysat enzymatique de casine (peptone) 1,0 g Chlorure de sodium (NaCl) 8,5 g Eau (voir 5.1.1) 1 000 ml Prparation Dissoudre les composants dans leau, en chauffant si ncessaire. Ajuster le pH en ajou
44、tant une solution dhydroxyde de sodium c(NaOH) = 1 mol/l ou une solution dacide chlorhydrique c(HCI) = 1 mol/l de sorte quaprs strilisation (voir 5.1.2) le pH soit de 7,0 0,5 25 C. ISO 8199:2005(F) 4 ISO 2005 Tous droits rservs5.2.4 Solution de Ringer, quart de concentration Composition Chlorure de
45、sodium (NaCl) 2,25 g Chlorure de potassium (KCl) 0,105 g Chlorure de calcium (anhydre) (CaCl 2 ) 0,12 g Hydrognocarbonate de sodium (NaHCO 3 ) 0,05 g Eau (voir 5.1.1) 1 000 ml Prparation Dissoudre les composants dans leau, en chauffant si ncessaire. Ajuster le pH en ajoutant une solution dhydroxyde
46、de sodium c(NaOH) = 1 mol/l ou une solution dacide chlorhydrique c(HCI) = 1 mol/l de sorte quaprs strilisation (voir 5.1.2) le pH soit de 7,0 0,2 25 C. 5.2.5 Solution tampon de phosphate a) Solution de phosphate Composition Dihydrogno-orthophosphate de potassium (KH 2 PO 4 ) 34 g Eau (voir 5.1.1) (q
47、.s.p.) 1 000 ml Prparation Dissoudre le dihydrogno-orthophosphate de potassium dans 500 ml deau. Ajuster le pH 7,2 0,2 avec une solution dhydroxyde de sodium c(NaOH) = 1 mol/l ou une solution dacide chlorhydrique c(HCI) = 1 mol/l. Complter avec de leau 1 000 ml. Si la solution doit tre conserve, la striliser (voir 5.1.2) auparavant. b) Soluti
