1、 Numros de rfrence ISO/TS 11059:2009(F) FIL/MR 225:2009(F) ISO et FIL 2009SPCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 11059 FIL/MR 225 Premire dition 2009-08-01Lait et produits laitiers Mthode de dnombrement des Pseudomonas spp. Milk and milk products Method for the enumeration of Pseudomonas spp. ISO/TS 11059:20
2、09(F) FIL/MR 225:2009(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune lice
3、nce autorisant lutilisation de ces polices et que celles-ci y soient installes. Lors du tlchargement de ce fichier, les parties concernes acceptent de fait la responsabilit de ne pas enfreindre les conditions de licence dAdobe. Le Secrtariat central de lISO et la FIL dclinent toute responsabilit en
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5、t prises pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO et les comits nationaux de la FIL. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central de lISO ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO et FIL
6、2009 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diffrente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit soit de lISO soit de la FIL,
7、lune ou lautre des adresses ci-aprs. ISO copyright office Fdration Internationale de Laiterie Case postale 56 CH-1211 Geneva 20 Diamant Building Boulevard Auguste Reyers 80 B-1030 Bruxelles Tel. + 41 22 749 01 11 Tel. + 32 2 733 98 88 Fax + 41 22 749 09 47 Fax + 32 2 733 04 13 E-mail copyrightiso.or
8、g E-mail infofil-idf.org Web www.iso.org Web www.fil-idf.org Publi en Suisse ii ISO et FIL 2009 Tous droits rservsISO/TS 11059:2009(F) FIL/MR 225:2009(F) ISO et FIL 2009 Tous droits rservs iiiAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes natio
9、naux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits techniques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non go
10、uvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectrotechnique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CE
11、I, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes internationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des com
12、its membres votants. Dans dautres circonstances, en particulier lorsquil existe une demande urgente du march, un comit technique peut dcider de publier dautres types de documents: une Spcification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) reprsente un accord entre les experts dans un groupe de travail I
13、SO et est accepte pour publication si elle est approuve par plus de 50 % des membres votants du comit dont relve le groupe de travail; une Spcification technique ISO (ISO/TS) reprsente un accord entre les membres dun comit technique et est accepte pour publication si elle est approuve par 2/3 des me
14、mbres votants du comit. Une ISO/PAS ou ISO/TS fait lobjet dun examen aprs trois ans afin de dcider si elle est confirme pour trois nouvelles annes, rvise pour devenir une Norme internationale, ou annule. Lorsquune ISO/PAS ou ISO/TS a t confirme, elle fait lobjet dun nouvel examen aprs trois ans qui
15、dcidera soit de sa transformation en Norme internationale soit de son annulation. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir i
16、dentifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO/TS 11059 FIL/MR 225 a t labore par le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous- comit SC 5, Lait et produits laitiers, et la Fdration Internationale de laiterie (FIL). Elle est publie conjointement par lISO et la FIL.
17、ISO/TS 11059:2009(F) FIL/MR 225:2009(F) iv ISO et FIL 2009 Tous droits rservsAvant-propos La FIL (Fdration Internationale de Laiterie) est une organisation sans but lucratif reprsentant le secteur laitier mondial. Les membres de la FIL se composent des Comits Nationaux dans chaque pays membre et des
18、 associations laitires rgionales avec lesquelles la FIL a sign des accords de coopration. Tout membre de la FIL a le droit de faire partie des Comits permanents de la FIL auxquels sont confis les travaux techniques. La FIL collabore avec lISO pour llaboration de mthodes normalises danalyse et dchant
19、illonnage pour le lait et les produits laitiers. La tche principale des comits techniques est de prparer les Normes internationales. Les Normes internationales provisoires adoptes par les groupes de travail et le Comits Permanents sont circuls aux Comits nationaux pour approbation. La publication en
20、 tant que Norme internationale requiert lapprobation dau moins 50 % des Comit Nationaux de la FIL participant au vote. Dans dautres circonstances, particulirement quand une demande urgente du march survient pour de tels documents, un Comit permanent peut dcider de publier un autre type de document v
21、aleur de norme que la FIL appelle Mthode rvise. Une telle mthode illustre un consensus entre les membres dun Comit permanent et est accepte pour publication si elle est approuve par au moins 50 % des Comits Nationaux mettant un vote. Une Mthode rvise est quivalente une ISO/PAS ou une ISO/TS et sera
22、donc aussi publie conjointement selon les conditions ISO. Lattention est appele sur le fait que certains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. La FIL ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits
23、 de proprit et averti de leur existence. LISO/TS 11059 FIL/MR 225 t labore par la Fdration internationale de laiterie (FIL) et le comit technique ISO/TC 34, Produits alimentaires, sous-comit SC 5, Lait et produits laitiers. Elle est publie conjointement par lISO et la FIL. Lensemble des travaux a t
24、confi lquipe dAction mixte ISO/FIL, Harmonisation microbiologique, du Comit permanent, Mthodes microbiologiques danalyse, sous la conduite de son chef de projet, Mme P. Rollier (FR). SPCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 11059:2009(F) FIL/MR 225:2009(F) ISO et FIL 2009 Tous droits rservs 1 Lait et produits
25、laitiers Mthode de dnombrement des Pseudomonas spp. 1 Domaine dapplication La prsente Spcification technique dcrit une mthode de dnombrement des Pseudomonas spp. dans le lait et les produits laitiers. Cette mthode permet disoler tous les Pseudomonas spp. psychrophiles pigments et non pigments. La pr
26、sente Spcification technique sapplique galement des chantillons denvironnement du secteur laitier. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Pour les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la
27、dernire dition de la publication laquelle il est fait rfrence (y compris tous les amendements) sapplique. ISO 6887-5, Microbiologie des aliments Prparation des chantillons, de la suspension mre et des dilutions dcimales en vue de lexamen microbiologique Partie 5: Rgles spcifiques pour la prparation
28、de produits laitiers ISO 7218, Microbiologie des aliments Exigences gnrales et recommendations ISO/TS 11133-1, Microbiologie des aliments Lignes directrices pour la prparation et la production des milieux de culture Partie 1: Lignes directrices gnrales dassurance qualit pour la prparation des milieu
29、x de culture en laboratoire ISO/TS 11133-2, Microbiologie des aliments Guide pour la prparation et la production des milieux de culture Partie 2: Guide gnral pour les essais de performance des milieux de culture 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions sui
30、vants sappliquent. 3.1 Pseudomonas spp. bactrie du genre Pseudomonas qui forme des colonies sur glose la pnicilline et la pimaricine (PPA) 25 C en prsentant les caractristiques biochimiques dcrites, lorsquelle est soumise essai comme dcrit dans la prsente Spcification technique ISO/TS 11059:2009(F)
31、FIL/MR 225:2009(F) 2 ISO et FIL 2009 Tous droits rservs4 Principe La surface dun milieu de culture slectif solide est inocul avec une quantit spcifie de lchantillon pour essai si le produit est liquide, ou avec une quantit spcifie de la suspension mre dans le cas des autres produits. Linoculation es
32、t effectue dans les mmes conditions, en utilisant des dilutions dcimales de lchantillon pour essai ou de la suspension mre. Les botes sont incubes en arobiose 25 C pendant 48 h. Le nombre de Pseudomonas est calcul par millilitre ou par gramme dchantillon, partir du nombre de colonies obtenu sur les
33、botes des niveaux de dilution choisis permettant dobtenir un rsultat significatif, et aprs confirmation des colonies slectionnes par le test oxydase et le test de fermentation du glucose. 5 Diluant, milieux de culture et ractif 5.1 Gnralits Pour les pratiques courantes de laboratoire, voir lISO/TS 1
34、1133-1 et lISO/TS 11133-2. 5.2 Diluant Voir lISO 6887-5. 5.3 Glose la pnicilline et la pimaricine (PPA) 5.3.1 Milieu de base 5.3.1.1 Composition Composant Quantit Digestat enzymatique de glatine 16,0 g Digestat enzymatique de casine 10,0 g Sulfate de potassium (K 2 SO 4 ) 10,0 g Chlorure de magnsium
35、 (MgCl 2 ) 1,4 g Agar-agar 12,0 g 18,0 g aEau 1 000 ml aEn fonction du pouvoir glifiant de lagar-agar. 5.3.1.2 Prparation Dissoudre les composants ou le milieu complet dshydrat dans leau en portant bullition. Si ncessaire, ajuster le pH de manire quil soit de 7,2 0,2 25 C aprs strilisation. Rpartir
36、le milieu de base dans des fioles ou des flacons de capacit approprie. Striliser le milieu lautoclave (6.1) 121 C pendant 15 min. ISO/TS 11059:2009(F) FIL/MR 225:2009(F) ISO et FIL 2009 Tous droits rservs 3 5.3.2 Solutions dinhibiteurs 5.3.2.1 Solution de pnicilline 5.3.2.1.1 Composition Composant Q
37、uantit Pnicilline G potassique 10 6UI Eau 10 ml 5.3.2.1.2 Prparation Dissoudre la pnicilline dans leau et striliser la solution par filtration. La solution de pnicilline peut tre conserve (5 3) C pendant une semaine ou congele en parties aliquotes 20 C pendant 6 mois. 5.3.2.2 Solution de pimaricine
38、5.3.2.2.1 Composition Composant Quantit Pimaricine (natamycine) 0,1 g Eau 10 ml 5.3.2.2.2 Prparation Dissoudre la pimaricine dans leau. Striliser la solution lautoclave (6.1) 110 C pendant 20 min. La pimaricine en solution nest pas stable et doit tre protge de la lumire. Par consquent, utiliser la p
39、imaricine en solution le jour de sa prparation. La solution peut galement tre conserve congele en parties aliquotes 20 C pendant 6 mois. 5.3.3 Milieu complet 5.3.3.1 Composition Volume Concentration finale Milieu de base: 100 ml Solution de pnicilline 0,1 ml 100 000 UI/l Solution de pimaricine 0,1 m
40、l 0,01 g/l 5.3.3.2 Prparation En conditions aseptiques, ajouter les solutions dinhibiteurs au milieu de base, en surfusion et maintenues une temprature comprise entre 44 C et 47 C. Homogniser soigneusement le milieu complet ainsi prpar. ISO/TS 11059:2009(F) FIL/MR 225:2009(F) 4 ISO et FIL 2009 Tous
41、droits rservs5.3.4 Prparation des botes de glose PPA Pour la prparation et le schage des botes, voir lISO/TS 11133-1. Si les botes de glose sont prpares lavance, elles peuvent tre conserves dans lobscurit (5 3) C pendant 1 jour au maximum. 5.3.5 Essais de performance pour le contrle qualit 5.3.5.1 P
42、roductivit Incubation: (25 1) C pendant (48 2) h Souche: Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 ou Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 Milieu de rfrence: Glose trypticase soja (TSA) Mthode de contrle: Quantitative Critres: Rapport de productivit P R 0,5 et colonies non caractristiques 5.3.5.2 Slectivit In
43、cubation: (25 1) C pendant (48 2) h Souche: Escherichia coli ATCC 25922 ou Staphylococcus aureus ATCC 25923 Mthode de contrle: Qualitative Critres: Inhibition totale 5.4 Glose nutritive 5.4.1 Composition Composant Quantit Extrait de viande 3,0 g Digestat enzymatique de tissus animaux 5,0 g Agar-agar
44、 12,0 g 18,0 gaEau 1 000 ml aEn fonction du pouvoir glifiant de lagar-agar. 5.4.2 Prparation Dissoudre les composants dshydrats ou le milieu complet dshydrat dans leau en portant bullition. Si ncessaire, ajuster le pH de manire quil soit de 7,0 0,2 25 C aprs strilisation. Rpartir le milieu de cultur
45、e dans des tubes ou des flacons de capacit approprie. Striliser la glose nutritive lautoclave (6.1) 121 C pendant 15 min. 5.4.3 Prparation des botes de glose nutritive Pour la prparation, le schage et la conservation des botes, voir lISO/TS 11133-1. ISO/TS 11059:2009(F) FIL/MR 225:2009(F) ISO et FIL
46、 2009 Tous droits rservs 5 5.4.4 Essais de performance pour le contrle qualit Des prcisions relatives la productivit sont donnes ci-aprs. Incubation: (25 1) C pendant (24 2) h Souche: Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 ou Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853, Escherichia coli ATCC 25922 ou Staphylococc
47、us aureus ATCC 25923 Milieu de rfrence: Glose trypticase soja (TSA) Mthode de contrle: Quantitative Critres: Rapport de productivit P R 0,7 et colonies non caractristiques 5.5 Glose glucose 5.5.1 Composition Composant Quantit Digestat enzymatique de casine 10,0 g Extrait de levure 1,5 g Chlorure de sodium 5,0 g Glucose 10,0 g Pourpre de bromocrsol 0,015 g Agar-agar 12,0 g 18,0 gaEau 1 000 ml aEn fonction du pouvoir glifiant de lagar-agar. 5.5.2 Prparation Dissoudre
