1、 Numro de rfrence ISO/TS 22304:2008(F) ISO 2008SPCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 22304 Premire dition 2008-07-15Tabac Dosage des nitrosamines spcifiques au tabac Mthode dextraction au dichloromthane alcalin Tobacco Determination of tobacco specific nitrosamines Method using alkaline dichloromethane extr
2、action ISO/TS 22304:2008(F) PDF Exonration de responsabilit Le prsent fichier PDF peut contenir des polices de caractres intgres. Conformment aux conditions de licence dAdobe, ce fichier peut tre imprim ou visualis, mais ne doit pas tre modifi moins que lordinateur employ cet effet ne bnficie dune l
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5、pour garantir lexploitation de ce fichier par les comits membres de lISO. Dans le cas peu probable o surviendrait un problme dutilisation, veuillez en informer le Secrtariat central ladresse donne ci-dessous. DOCUMENT PROTG PAR COPYRIGHT ISO 2008 Droits de reproduction rservs. Sauf prescription diff
6、rente, aucune partie de cette publication ne peut tre reproduite ni utilise sous quelque forme que ce soit et par aucun procd, lectronique ou mcanique, y compris la photocopie et les microfilms, sans laccord crit de lISO ladresse ci-aprs ou du comit membre de lISO dans le pays du demandeur. ISO copy
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8、 2 Rfrences normatives 1 3 Termes et dfinitions 1 4 Principe 1 5 Ractifs 2 6 Appareillage 2 7 Prparation des solutions et des talons. 3 7.1 Prparation dune solution dhydroxyde de sodium; w = 10 % (fraction massique) . 3 7.2 Prparation dtalon interne 3 7.3 Prparation des talons . 3 7.4 Montage du chr
9、omatographe en phase gazeuse et du dtecteur . 4 7.5 Extraction du tabac et isolation des TSNA 5 7.6 Extraction de lchantillon . 6 8 Analyse des donnes et calcul des rsultats 7 9 Rptabilit et reproductibilit 7 10 Rapport dessai . 8 Annexe A (informative) Chromatogrammes types et courbes dtalonnage .
10、9 Bibliographie 11 ISO/TS 22304:2008(F) iv ISO 2008 Tous droits rservsAvant-propos LISO (Organisation internationale de normalisation) est une fdration mondiale dorganismes nationaux de normalisation (comits membres de lISO). Llaboration des Normes internationales est en gnral confie aux comits tech
11、niques de lISO. Chaque comit membre intress par une tude a le droit de faire partie du comit technique cr cet effet. Les organisations internationales, gouvernementales et non gouvernementales, en liaison avec lISO participent galement aux travaux. LISO collabore troitement avec la Commission lectro
12、technique internationale (CEI) en ce qui concerne la normalisation lectrotechnique. Les Normes internationales sont rdiges conformment aux rgles donnes dans les Directives ISO/CEI, Partie 2. La tche principale des comits techniques est dlaborer les Normes internationales. Les projets de Normes inter
13、nationales adopts par les comits techniques sont soumis aux comits membres pour vote. Leur publication comme Normes internationales requiert lapprobation de 75 % au moins des comits membres votants. Dans dautres circonstances, en particulier lorsquil existe une demande urgente du march, un comit tec
14、hnique peut dcider de publier dautres types de documents: une Spcification publiquement disponible ISO (ISO/PAS) reprsente un accord entre les experts dans un groupe de travail ISO et est accepte pour publication si elle est approuve par plus de 50 % des membres votants du comit dont relve le groupe
15、 de travail; une Spcification technique ISO (ISO/TS) reprsente un accord entre les membres dun comit technique et est accepte pour publication si elle est approuve par 2/3 des membres votants du comit. Une ISO/PAS ou ISO/TS fait lobjet dun examen aprs trois ans afin de dcider si elle est confirme po
16、ur trois nouvelles annes, rvise pour devenir une Norme internationale, ou annule. Lorsquune ISO/PAS ou ISO/TS a t confirme, elle fait lobjet dun nouvel examen aprs trois ans qui dcidera soit de sa transformation en Norme internationale soit de son annulation. Lattention est appele sur le fait que ce
17、rtains des lments du prsent document peuvent faire lobjet de droits de proprit intellectuelle ou de droits analogues. LISO ne saurait tre tenue pour responsable de ne pas avoir identifi de tels droits de proprit et averti de leur existence. LISO/TS 22304 a t labore par le comit technique ISO/TC 126,
18、 Tabac et produits du tabac. ISO/TS 22304:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs vIntroduction Au cours de llaboration de la prsente Spcification technique, des essais entre laboratoires ont t mens en appliquant deux mthodes diffrentes de dosage des nitrosamines spcifiques au tabac: la mthode dextracti
19、on au dichloromthane alcalin, traite dans la prsente Spcification Technique, et la mthode dextraction au tampon (voir Rfrences 2, 3). Ces essais ont dmontr que les rsultats obtenus par les deux mthodes diffrentes ont donn des rsultats identiques (voir Rfrence 4). La mthode dcrite dans la prsente Spc
20、ification technique peut tre prfrable pour les personnes qui prfrent une analyse plus rapide et utilisant moins de solvant. La mthode dextraction au tampon est dcrite dans lISO 22303, (voir Rfrence 1). SPCIFICATION TECHNIQUE ISO/TS 22304:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 1Tabac Dosage des nitrosam
21、ines spcifiques au tabac Mthode dextraction au dichloromthane alcalin 1 Domaine dapplication La prsente Spcification technique spcifie le mode opratoire de dosage des nitrosamines spcifiques au tabac (TSNA): N-nitrosonornicotine (NNN), N-nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) et 4-mthylnit
22、rosamino-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNK) dans le tabac en feuilles broy, le tabac manufactur et les produits du tabac. La dtermination est effectue par chromatographie en phase gazeuse. 2 Rfrences normatives Les documents de rfrence suivants sont indispensables pour lapplication du prsent document. Po
23、ur les rfrences dates, seule ldition cite sapplique. Pour les rfrences non dates, la dernire dition du document de rfrence sapplique (y compris les ventuels amendements). ISO 1042, Verrerie de laboratoire Fioles jauges un trait ISO 3696, Eau pour laboratoire usage analytique Spcification et mthodes
24、dessai 3 Termes et dfinitions Pour les besoins du prsent document, les termes et dfinitions suivants sappliquent. 3.1 nitrosamines spcifiques au tabac TSNA les quatre principales nitrosamines prsentes dans le tabac sont N-nitrosonornicotine (NNN), N-nitrosoanatabine (NAT), N-nitrosoanabasine (NAB) e
25、t 4-mthylnitrosamino-1-(3-pyridyl)-1-butanol (NNK) 4 Principe Les TSNA sont extraites dchantillons de tabac en poudre laide de dichloromthane contenant de lhydroxyde de sodium. Lextrait est ensuite lu travers un lit compos dun mlange de sulfate de magnsium et de sulfate de sodium en utilisant du dic
26、hloromthane, vapor quasiment jusqu siccit et repris par du chloroforme. Les nitrosamines individuelles sont alors spares et quantifies par chromatographie en phase gazeuse avec dtection par chimiluminescence. La quantification est effectue selon une technique normalise interne. ISO/TS 22304:2008(F)
27、2 ISO 2008 Tous droits rservs5 Ractifs Nutiliser que des ractifs de qualit analytique. PRCAUTIONS DE SCURIT Les nitrosamines sont potentiellement carcinognes; il convient donc de prendre les prcautions de scurit appropries lors de la prparation des talons. Porter toujours des gants de laboratoire lo
28、rs de la manipulation de solutions talons et de la prparation de dilutions. 5.1 N-nitrosonornicotine (NNN, CAS 1) : 53759-22-1), w W 98 % (fraction massique). 5.2 N-nitrosoanatabine (NAT, CAS: 71267-22-6), w W 98 %. 5.3 N-nitrosoanabasine (NAB, CAS: 1133-64-8), w W 98 %. 5.4 4-(mthylnitrosamino)-1-(
29、3-pyridyl)-1-butanol (NNK, CAS: 64091-91-4), w W 98 %. 5.5 N-nitrosodi-n-hexylamine (NDHA, CAS: 6949-28-6) (talon interne), w W 98 %. 5.6 Sulfate de magnsium (MgSO 4 ), anhydre (CAS: 7487-88-9), (poudre), w W 98,0 %. 5.7 Sulfate de sodium (Na 2 SO 4 ), anhydre (CAS: 7757-82-6), (granuleux), w W 99,0
30、 %, 2 mm (10 mesh) 0,25 mm (60 mesh). 5.8 Hydroxyde de sodium (NaOH), pastilles (CAS: 1310-73-2), w W 97,0 %. 5.9 Dichloromthane (CAS: 75-09-02), w W 99,9 %. 5.10 Chloroforme (CAS: 67-66-3), w W 99,9 %. 5.11 Nicotine (CAS: 54-11-5), w W 99,0 %. 5.12 Eau (CAS: 7732-18-5), rpondant au moins au grade 2
31、 de lISO 3696. 5.13 Azote (CAS: 7727-37-9), pour lvaporateur de solvant, w W 99,995 %. 5.14 Hlium (CAS: 7440-59-7), pour le gaz vecteur, w W 99,995 %. 5.15 Oxygne (CAS: 7782-44-7), pour la production dozone dans le dtecteur, w W 99,6 %. 6 Appareillage Appareillage courant de laboratoire et en partic
32、ulier ce qui suit: 6.1 Chromatographe en phase gazeuse (CG), quip dun dtecteur chimiluminescence et dun auto-chantillonneur (facultatif). 6.2 vaporateur de solvant, pour la concentration de lextrait dchantillon. 6.3 Agitateur, de type vortex, pour lextraction et lhomognisation de lchantillon. 1) CAS
33、: Chemical Abstract Service. ISO/TS 22304:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 36.4 Colonne de chromatographie en phase gazeuse, colonne capillaire en silice fondue dune longueur de 30 m et dun diamtre interne de 0,53 mm, revtue dun film de 1,5 m compos de 5 % de phnylmthylpolysiloxane. NOTE Dautres
34、colonnes peuvent tre utilises condition dobtenir une sparation satisfaisante. 6.5 Systme dacquisition des donnes chromatographiques, afin de mesurer lectroniquement les aires de pic. 6.6 Fioles jauges un trait, conformes la classe A de lISO 1042. 6.7 Pipettes de transfert en verre usage unique, dune
35、 longueur de 229 mm. 6.8 Distributeurs rptitifs en verre inclins, volume constant, dun volume de 10 ml. 6.9 Tubes essai dextraction en verre, 20 mm DI 150 mm. 6.10 Couvercles des tubes essai dextraction en verre, de filetage 18 filetage 415. 6.11 Tubes essai de concentration en verre, 16 mm DI 100 m
36、m. 6.12 Colonne dextraction blanc, capacit du rservoir 14 ml. 6.13 Verres fritts pour la colonne dextraction blanc, diamtre externe 1,4 cm, porosit 20 m. 6.14 Rcipients dchantillonnage, fioles dauto-chantillonnage en verre borosilicat, dune capacit de 2 ml, quips de fermetures avec des bouchons vis
37、septum revtus de PTFE. 6.15 Unit frigorifique, pour stocker les talons 20 C. 7 Prparation des solutions et des talons 7.1 Prparation dune solution dhydroxyde de sodium; w = 10 % (fraction massique) Peser environ 10 g de pastilles de NaOH (5.8) dans un bcher de 100 ml. Ajouter de leau pour atteindre
38、une masse totale de 100 g et agiter jusqu dissolution. 7.2 Prparation dtalon interne Prparer la solution mre dtalon interne en dissolvant la NDHA (5.5) dans du dichloromthane (5.9) pour obtenir une concentration denviron 200 g ml 1de NDHA. Continuer diluer cette solution mre pour obtenir une concent
39、ration de NDHA de 0,40 g ml 1 . Cette solution dilue dans du dichloromthane est utilise dans le ractif dextraction (voir Tableau 1). En dehors de leur utilisation, conserver toutes les solutions dtalon interne environ 20 C. 7.3 Prparation des talons Le Tableau 1 numre les concentrations typiques des
40、 talons utiliser pour lanalyse du tabac. En dehors de leur utilisation, conserver les solutions talons environ 20 C. Pour ltalonnage, il convient dutiliser au moins quatre niveaux de TSNA. ISO/TS 22304:2008(F) 4 ISO 2008 Tous droits rservsTableau 1 Concentrations des talons dans le chloroforme (g ml
41、 1 ) Niveau NDHA NNN NAT NAB NNK 1 5,00 0,05 0,05 0,05 0,05 2 5,00 0,30 0,30 0,15 0,15 3 5,00 1,50 1,50 0,30 2,88 4 5,00 5,00 5,00 0,50 5,00 5 5,00 8,50 9,00 0,75 7,20 NOTE En fonction du volume final dtalon, il convient dajouter 600 l de nicotine par 10 ml de chloroforme; par exemple, il convient q
42、uun talon de 50 ml contienne 3 ml de nicotine. 7.4 Montage du chromatographe en phase gazeuse et du dtecteur Le chromatographe en phase gazeuse (6.1) permet des injections sans division (splitless); il est aussi configur pour fonctionner avec un dtecteur chimiluminescence. Un tuyau ayant un diamtre
43、interne de 4 mm avec un insert de division en laine de verre est utilis pour linjecteur de type avec/sans division (split/splitless). La colonne de chromatographie en phase gazeuse est connecte au tube du pyrolyseur en cramique du dtecteur chimiluminescence. Environ 13 cm de la colonne capillaire du
44、 chromatographe en phase gazeuse sont insrs dans le pyrolyseur. Le Tableau 2 numre les tempratures types et les vitesses daugmentation utilises pour sparer les TSNA. Le Tableau 3 indique les montages prconiss pour lanalyse. Ces conditions peuvent varier la discrtion de lanalyste afin dobtenir une me
45、illeure rsolution, une dure dexcution moindre ou une meilleure limite de dtection. Il convient de changer le revtement et le septum de la colonne dinjection aprs chaque cycle dauto-chantillonnage (environ 100 injections), suivis de deux cycles dinjection de solvant (chloroforme). La Figure A.1 reprs
46、ente un chromatogramme dtalon analys dans les conditions donnes dans les Tableaux 2 et 3. Tableau 2 Programme du four pour la chromatographie en phase gazeuse Temprature initiale du four de la colonne (C) 100 Temps initial du four de la colonne (min) 1,00 Vitesse du programme du four de la colonne (
47、C min 1 ) 6 Temprature finale du four de la colonne (C) 240 Temps final du four de la colonne (min) 3,00 Dure totale de lopration (min) 23,33 NOTE Ces conditions peuvent tre modifies pour amliorer la rsolution des pics ou le temps dlution. ISO/TS 22304:2008(F) ISO 2008 Tous droits rservs 5Tableau 3 Paramtres du systme Temprature de linterface du dtecteur (C) a250 Temprature du pyrolyseur du dtecteur (C) 550 Dbit dozone dans le dtecteur (ml min 1 ) 5,1 Mode de linjection Sans division
