1、细胞生物学-2 及答案解析(总分：100.00，做题时间：90 分钟)一、填空题(总题数：10，分数：10.00)1.单克隆抗体技术制备的过程中，利用 1 和 2 条件下进行融合，从而通过筛选大量制备单克隆抗体。 （分数：1.00）2.在对细胞中的某些成分进行定性和定位研究时，可根据化学反应的原理，采用 1 方法加以显示。 （分数：1.00）3.“超级小鼠”(supennouse)的诞生是细胞工程 1 技术最成功的例子。 （分数：1.00）4.原代细胞培养中，通常将动物组织进行 1 或 2，进行最初的 3 培养。 （分数：1.00）5.在动物细胞培养过程中，贴壁生长的正常二倍体细胞表面相互接触
2、时分裂随之停止，这种现象称为细胞的 1。 （分数：1.00）6.流式细胞仪可以定量测定细胞中的 1、 2 或某一种特异蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞数量。 （分数：1.00）7.用柱层析方法可对细胞提取液中的蛋白质进行 1。 （分数：1.00）8.体外培养动物细胞生长特点是 1、 2。 （分数：1.00）9.动物细胞离体培养方式主要有 3 种 1、 2、 3。 （分数：1.00）10.细胞拆合的方法有 1 和 2 两种。 （分数：1.00）二、选择题(总题数：13，分数：13.00)11.能特意显示核酸分布的显示剂是_。（分数：1.00）A.希夫试剂B.中性红试剂C.詹姆斯绿
3、D.苏丹黑试剂12.正常细胞培养中除培养基外常需加入血清，主要是因为血清中含有_。（分数：1.00）A.大量氨基酸B.核酸C.生长因子D.维生素13.体外培养细胞加血清的主要原因是_。（分数：1.00）A.血清含有多种营养物质B.血清含有多种生长因子C.血清含有补体、抗体等免疫活性物质，可以抗污染D.作用不明14.不必用超薄切片、不经染色而能观察较厚标本内部结构的电镜是_。（分数：1.00）A.一般透射电子显微镜B.扫描透射电镜C.扫描电镜D.超高压透射电子显微镜15.在动物细胞培养过程中，要用_来观察细胞分裂状况。（分数：1.00）A.电子显微镜B.暗视野显微镜C.倒置显微镜D.普通顺置光学
4、显微镜16.在电镜下直接观察 rRNA 基因转录的形态学过程所应用的技术是_。（分数：1.00）A.超薄切片技术B.细胞原位杂交技术C.染色质铺展技术D.放射自显影技术17.关于光镜的使用，下列哪项有误_。（分数：1.00）A.观察标本时，应双眼同时睁开，双手并用B.按照从低倍镜到高倍镜到油镜的顺序进行操作C.使用油镜时，需在标本上滴香柏油，将聚光器降至最低，光圈关至最小D.使用油镜时，不可一边在目镜中观察，一边下降镜筒或上升载物台18.把重组 DNA 导入细菌并生产激素或蛋白质的过程可称为_。（分数：1.00）A.基因工程B.细胞工程C.酶工程D.微生物工程19.人胚胎细胞去核得到的胞质体(
5、cytoplast)与老年个体完整细胞相融合，所得到的杂种细胞进行培养时_。（分数：1.00）A.只能分裂很少几次B.迅速发生凋亡C.其分裂能力与胚胎细胞大致相同D.其分裂能力稍低于胚胎细胞20.限制性内切酶是指_。（分数：1.00）A.切割 DNA 或 RNA 的酶B.专门切割 RNA 的酶C.专门切割核酸的酶D.专门切割 DNA 特定碱基顺序的酶21.重组 DNA 分子引入受体细胞的过程称为_。（分数：1.00）A.转移B.转化C.转染D.转录22.用 3H-唾液酸对培养细胞进行脉冲标记，电镜放射自显影结果显示其标记物集中在哪一部位_。（分数：1.00）A.内质网B.高尔基体顺面膜囊C.高
6、尔基体反面管网结构中D.溶酶体23.制备单克隆抗体是通过下列_技术构建的。（分数：1.00）A.细胞融合B.核移植C.病毒转化D.基因转移三、判断题(总题数：6，分数：5.00)24.淋巴细胞在体外培养时是以贴壁的方式进行生长。 （分数：0.50）A.正确B.错误25.经流式细胞仪分离出的细胞可继续培养。 （分数：0.50）A.正确B.错误26.同位素 、 （分数：1.00）A.正确B.错误27.northern blotting 可用以检测特定 RNA 位置。 （分数：1.00）A.正确B.错误28.体外培养的细胞，一般保持体内原有的细胞形态。 （分数：1.00）A.正确B.错误29.相差显
7、微镜可以研究细胞核、线粒体的活体动态。 （分数：1.00）A.正确B.错误四、问答题(总题数：17，分数：72.00)30.细胞生物学研究的常用技术有哪些? （分数：4.00）_31.实验设计：为了研究某种特异蛋白在细胞中的定位，可以借助免疫荧光技术或免疫电镜技术。请比较免疫荧光技术和免疫电镜技术各自的优点与不足?并说明免疫电镜技术详细实验步骤(以辣根过氧化物为标记物)。 （分数：4.00）_32.什么是免疫荧光技术?举例说明其应用。 （分数：4.00）_33.为何绿色荧光蛋白的发现者会获得 2008 年诺贝尔奖? （分数：4.00）_34.绿色荧光蛋白(GFP)的发现及研究者获得了 2008
8、 年诺贝尔化学奖，他们的具体贡献是什么?该成果在细胞生物学有关领域研究中有何应用?简述应用的原理与主要步骤。 （分数：4.00）_35.如何用 GFP 显示活细胞内蛋白质的运动? （分数：4.00）_36.如何将动物或植物组织或细胞制备成可在透射电镜下观察的超薄切片标本? （分数：4.00）_37.试述单克隆抗体的应用。 （分数：4.00）_38.模式生物在细胞生物学的研究中具有重要作用，请列举三种不同的模式生物分别在细胞生物学重要问题研究中的贡献。 （分数：4.00）_39.相差显微镜、扫描电子显微镜、透射电子显微镜在细胞生物学的研究中各有什么用途以及其特点? （分数：4.00）_40.在进
9、行原位杂交定位的分析制样时，为什么要常用冰冻切片的方法，而不用石蜡切片? （分数：4.00）_41.细胞工程中，哪些方法可以诱导细胞融合，各有什么特点? （分数：4.00）_42.举 12 例说明电子显微镜技术与细胞分子生物学技术的结合在现代细胞生物学研究中的应用。 （分数：4.00）_43.光学显微镜技术有哪些新发展?它们各有哪些突出优点?为什么电子显微镜不能完全代替光学显微镜? （分数：6.00）_44.为什么说细胞培养是细胞生物学研究的最基本技术之一? （分数：6.00）_45.细胞组分的分离与分析有哪些基本的实验技术?哪些技术可用于大分子在细胞内的定性与定位研究? （分数：4.00）_
10、46.什么是模式生物?举例说明模式生物的使用在细胞生物学研究中的应用。 （分数：4.00）_细胞生物学-2 答案解析(总分：100.00，做题时间：90 分钟)一、填空题(总题数：10，分数：10.00)1.单克隆抗体技术制备的过程中，利用 1 和 2 条件下进行融合，从而通过筛选大量制备单克隆抗体。 （分数：1.00）解析：癌细胞；脾淋巴细胞2.在对细胞中的某些成分进行定性和定位研究时，可根据化学反应的原理，采用 1 方法加以显示。 （分数：1.00）解析：染色3.“超级小鼠”(supennouse)的诞生是细胞工程 1 技术最成功的例子。 （分数：1.00）解析：基因导入或转基因动物技术4
11、.原代细胞培养中，通常将动物组织进行 1 或 2，进行最初的 3 培养。 （分数：1.00）解析：切割组织；碎块贴壁；细胞离散(细胞悬液)5.在动物细胞培养过程中，贴壁生长的正常二倍体细胞表面相互接触时分裂随之停止，这种现象称为细胞的 1。 （分数：1.00）解析：接触抑制6.流式细胞仪可以定量测定细胞中的 1、 2 或某一种特异蛋白的含量，以及细胞群体中上述成分含量不同的细胞数量。 （分数：1.00）解析：DNA；RNA7.用柱层析方法可对细胞提取液中的蛋白质进行 1。 （分数：1.00）解析：纯化(分离)8.体外培养动物细胞生长特点是 1、 2。 （分数：1.00）解析：单层贴壁生长；接触
12、抑制9.动物细胞离体培养方式主要有 3 种 1、 2、 3。 （分数：1.00）解析：群体培养；克隆培养；转鼓培养10.细胞拆合的方法有 1 和 2 两种。 （分数：1.00）解析：物理法；化学法二、选择题(总题数：13，分数：13.00)11.能特意显示核酸分布的显示剂是_。（分数：1.00）A.希夫试剂 B.中性红试剂C.詹姆斯绿D.苏丹黑试剂解析：12.正常细胞培养中除培养基外常需加入血清，主要是因为血清中含有_。（分数：1.00）A.大量氨基酸B.核酸C.生长因子 D.维生素解析：13.体外培养细胞加血清的主要原因是_。（分数：1.00）A.血清含有多种营养物质B.血清含有多种生长因子
13、 C.血清含有补体、抗体等免疫活性物质，可以抗污染D.作用不明解析：14.不必用超薄切片、不经染色而能观察较厚标本内部结构的电镜是_。（分数：1.00）A.一般透射电子显微镜B.扫描透射电镜C.扫描电镜D.超高压透射电子显微镜 解析：15.在动物细胞培养过程中，要用_来观察细胞分裂状况。（分数：1.00）A.电子显微镜B.暗视野显微镜C.倒置显微镜 D.普通顺置光学显微镜解析：16.在电镜下直接观察 rRNA 基因转录的形态学过程所应用的技术是_。（分数：1.00）A.超薄切片技术B.细胞原位杂交技术C.染色质铺展技术 D.放射自显影技术解析：17.关于光镜的使用，下列哪项有误_。（分数：1.
14、00）A.观察标本时，应双眼同时睁开，双手并用B.按照从低倍镜到高倍镜到油镜的顺序进行操作C.使用油镜时，需在标本上滴香柏油，将聚光器降至最低，光圈关至最小 D.使用油镜时，不可一边在目镜中观察，一边下降镜筒或上升载物台解析：18.把重组 DNA 导入细菌并生产激素或蛋白质的过程可称为_。（分数：1.00）A.基因工程 B.细胞工程C.酶工程D.微生物工程解析：19.人胚胎细胞去核得到的胞质体(cytoplast)与老年个体完整细胞相融合，所得到的杂种细胞进行培养时_。（分数：1.00）A.只能分裂很少几次 B.迅速发生凋亡C.其分裂能力与胚胎细胞大致相同D.其分裂能力稍低于胚胎细胞解析：20
15、.限制性内切酶是指_。（分数：1.00）A.切割 DNA 或 RNA 的酶B.专门切割 RNA 的酶C.专门切割核酸的酶D.专门切割 DNA 特定碱基顺序的酶 解析：21.重组 DNA 分子引入受体细胞的过程称为_。（分数：1.00）A.转移 B.转化C.转染D.转录解析：22.用 3H-唾液酸对培养细胞进行脉冲标记，电镜放射自显影结果显示其标记物集中在哪一部位_。（分数：1.00）A.内质网B.高尔基体顺面膜囊C.高尔基体反面管网结构中 D.溶酶体解析：23.制备单克隆抗体是通过下列_技术构建的。（分数：1.00）A.细胞融合 B.核移植C.病毒转化D.基因转移解析：三、判断题(总题数：6，
16、分数：5.00)24.淋巴细胞在体外培养时是以贴壁的方式进行生长。 （分数：0.50）A.正确B.错误 解析：25.经流式细胞仪分离出的细胞可继续培养。 （分数：0.50）A.正确 B.错误解析：26.同位素 、 （分数：1.00）A.正确 B.错误解析：27.northern blotting 可用以检测特定 RNA 位置。 （分数：1.00）A.正确B.错误 解析：28.体外培养的细胞，一般保持体内原有的细胞形态。 （分数：1.00）A.正确B.错误 解析：29.相差显微镜可以研究细胞核、线粒体的活体动态。 （分数：1.00）A.正确B.错误 解析：四、问答题(总题数：17，分数：72.0
17、0)30.细胞生物学研究的常用技术有哪些? （分数：4.00）_正确答案：()解析：目前细胞生物学研究的常用技术有：光学显微镜技术：用于观察细胞显微结构；电子显微镜技术：探索细胞超微结构；X-衍射技术：研究蛋白质和核酸等生物大分子结构；细胞融合或杂交技术：用于培养具有新性状的细胞；离心技术：用于分离细胞内不同形态、大小的细胞器；细胞培养：用于培养能在体外长期生长的机体细胞；流式细胞术：可对不同类型细胞进行分类并测其体积、DNA 含量等；放射自显影：利用放射性同位素对细胞中的 DNA、RNA 或蛋白质进行定位；核酸分子杂交：可探测基因的缺失、结构、表达等状况；层析和电泳：可分离、纯化细胞中大分子
18、物质。31.实验设计：为了研究某种特异蛋白在细胞中的定位，可以借助免疫荧光技术或免疫电镜技术。请比较免疫荧光技术和免疫电镜技术各自的优点与不足?并说明免疫电镜技术详细实验步骤(以辣根过氧化物为标记物)。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：优点与不足： 免疫荧光技术：制样简单快捷，灵敏，有特异性，但分辨率不足。 免疫电镜技术：分辨率高，可同时观察细胞超微结构和蛋白质定位。但制样步骤复杂，抗原易失活。 免疫电镜技术详细实验步骤：取样固定脱水环氧树脂包埋超薄切片。 特异蛋白的抗体准备辣根过氧化物标记抗体超薄切片在孵育液中孵育(孵育液含 DAB，酶标记抗体等)四氧化锇后固定电子染色电镜观察。32
19、.什么是免疫荧光技术?举例说明其应用。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：免疫荧光技术是将免疫学方法(抗原-抗体特异结合)与荧光标记技术相结合，用于研究特异蛋白抗原在细胞内分布的方法，又称荧光抗体技术，是标记免疫技术中发展最早的一种。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术的基础上建立起来的一项技术。很早以来就有一些学者试图将抗体分子与一些示踪物质结合，利用抗原抗体反应进行组织或细胞内抗原物质的定位。Coons 等于 1941 年首次采用荧光素进行标记而获得成功。 用荧光抗体示踪或检查相应抗原的方法称荧光抗体法；用已知的荧光抗原标记物示踪或检查相应抗体的方法称荧光抗原法，这两种方法总称免疫荧光
20、技术。因为荧光色素不但能与抗体球蛋白结合，用于检测或定位各种抗原，也可以与其他蛋白质结合，用于检测或定位抗体，但是在实际工作中荧光抗原技术很少应用，所以人们习惯称为荧光抗体技术，或称为免疫荧光技术。以荧光抗体方法较常用。用免疫荧光技术显示和检查细胞或组织内抗原或半抗原物质等的方法称为免疫荧光细胞(或组织)化学技术。 该技术的主要特点是：特异性强、敏感性高、速度快。主要缺点是：非特异性染色问题尚未完全解决，结果判定的客观性不足，技术程序比较复杂。 举例：如要对细胞微管蛋白进行亚细胞定位，先用低聚甲醛固定细胞，NP-40 穿孔，选择抗微管蛋白的抗体作为一抗，孵育后洗脱去背景，加入偶联荧光素的二抗孵
21、育后洗脱去背景，这样荧光素就偶联到待观察的目标蛋白上，最后就是在荧光显微镜上进行观察。33.为何绿色荧光蛋白的发现者会获得 2008 年诺贝尔奖? （分数：4.00）_正确答案：()解析：目前人们对绿色荧光蛋白的认识主要是基于它能够示踪蛋白质，人们基于它与成像技术的结合，能够以高的时间、空间分辨率，记录、分析一些活的生物系统、生命过程中非常微量蛋白质的行为、作用等，而且在无光的情况下也能进行，而过去即使在有光的情况下，也是很难实现的。过去，“生物”学研究常常研究的是“死物”，有了这个 GFP 示踪后，就可以研究实实在在的活的生命过程，这就好比研究熊猫、海豚等野生动物，为它们戴上不影响生存以及活
22、动的发射信号装置，这将彻底改变医学研究，所以从方法学上来讲，是一个革命，而在过去这也是难以实现的。此外 GFP 不仅对于细胞生物学和神经生物学影响很大，它在生命科学的每个领域几乎都有很广泛的应用，如分子生物学、肿瘤生物学、免疫学、内分泌学、肝病学等。34.绿色荧光蛋白(GFP)的发现及研究者获得了 2008 年诺贝尔化学奖，他们的具体贡献是什么?该成果在细胞生物学有关领域研究中有何应用?简述应用的原理与主要步骤。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：日本科学家下村修、美国科学家马丁沙尔菲和美籍华裔科学家钱永健获得 2008 年的诺贝尔化学奖。这三位科学家因在发现和研究绿色荧光蛋白方面作出贡
23、献而获奖。 下村修于 1962 年在水母中发现了绿色荧光蛋白。沙尔菲在利用绿色荧光蛋白做生物示踪分子方面作出了贡献。华裔科学家钱永健走出的可以说是绿色荧光蛋白开发历程的“最后一步”，在下村修与沙尔菲研究的基础上进一步搞清楚了绿色荧光蛋白特性。他改造绿色荧光蛋白，通过改变其氨基酸排序，造出能吸收、发出不同颜色光的荧光蛋白，其中包括蓝色、青色和黄色，并让它们发光更久、更强烈。 绿色荧光蛋白(GFP)是从一种生活在北太平洋寒冷水域的水母体内发现的。这种水母体内含有一种生物发光蛋白质aequorin，它本身发蓝光。GFP 能把这种光转变成绿色，也就是当水母容光焕发的时候我们实际看到的颜色。GFP 的纯
24、溶液在典型的室光下呈黄色，但是当被拿到户外的阳光下时，它会发出鲜绿的颜色。这种蛋白质从阳光中吸收紫外光，然后以能量较低的绿光形式发射出来。 GFP 在科学研究上有着惊人的用途，因为它能够使我们直接看到细胞内部的运动情况。在任何指定的时间我们都可以轻易地找出 GFP 在哪儿：只需要用紫外光去照射，这时所有的 GFP 都将发出鲜艳的绿色。如果把 GFP 连接到有兴趣观察的任何对象上，比如，可以把它连接到一种病毒上。然后，随着病毒在宿主体内不断扩散，就可以通过跟踪发出的绿光来观察病毒的扩散途径；或者把它接合到一种蛋白质上并通过显微镜观察它在细胞内部的移动。GFP 是一种现成的荧光蛋白质，因此它特别容
25、易使用。由于 GFP 可以形成自己的发色团，它非常适合于基因工程。根本不必担心操作任何奇怪的发色团，只需要利用遗传学的方法操纵细胞合成 GFP 蛋白质，GFP 就会自动折叠并开始发光。GFP 的用途已经扩展到艺术和商务领域，艺术家Eduardo Kac 通过把 GFP 插入兔子细胞内创造出了一只荧光的绿色兔子。育种工作者正在探索利用 GFP 来创造特殊的荧光植物和各种鱼类，GFP 已经被移植到大鼠、老鼠、青蛙、有翅昆虫、蠕虫以及不计其数的其他生物体内。当然这些转基因植物和动物还存在一些争议，并且已经引发了关于基因工程安全性和伦理性的重要对话。在研究活细胞方面，GFP 也有惊人的作用，并且科学家
26、们正在努力使它变得更有用，科学家正在改进 GFP 分子以使其发出不同颜色的荧光。科学家们目前可以制造蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和大量其他颜色的荧光蛋白质。方法是使发色团产生能改变其稳定性的小的变异。科学家们还利用 GFP 来发明生理传感器：一种感应离子或酸碱度水平，然后通过发出特征性的荧光来报告结果的分子机器。35.如何用 GFP 显示活细胞内蛋白质的运动? （分数：4.00）_正确答案：()解析：可以有两种方法。第一种方法是先找到该蛋白的抗体，以此蛋白为抗原，将该蛋白的抗体用绿色荧光蛋白标记，然后注入细胞中，根据抗体一抗原之间的反应，绿色荧光蛋白可以与待测蛋白相结合，通过在荧光显微镜下观察绿
27、色荧光蛋白的活动就可以观察待测蛋白的运动。第二种方法更为可信，即将 GFP 与该蛋白基因融合构建质粒，然后将质粒转化入细胞质中，融合蛋白表达后在荧光显微镜下观察绿色荧光的运动，就可以间接观察到蛋白质的运动。36.如何将动物或植物组织或细胞制备成可在透射电镜下观察的超薄切片标本? （分数：4.00）_正确答案：()解析：透射电镜所用的标本一般要切成 50100nm 厚的薄片，即一个细胞要切成 100200 片。独特的技术环节：固定脱水渗透包埋聚合超薄切片置于铜质的载网(相当于载玻片)上一染色透射电镜中观察。37.试述单克隆抗体的应用。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：单克隆抗体是高度特异
28、性针对单一抗原决定簇的均质抗体。基于单克隆抗体的高度特异性，它在生物医学研究及临床医学的应用中显示了其重要的意义和价值。单克隆抗体在临床诊断中的应用：单克隆抗体的最广泛的应用在于体内外诊断试剂的制造。目前利用单克隆抗体制成的免疫诊断试剂已成功地应用于传染病及肿瘤的诊断上；也应用于类风湿因子及其他自身免疫性疾病，如激素、维生素、免疫球蛋白异常的临床诊断。用同位素标记的单克隆抗体作定位显像是包括肿瘤、心血管疾病等体内诊断的有效手段之一，使用特异性单抗对肿瘤进行鉴定、诊断和定位，是临床提高诊断正确率和设计治疗方案中的重要辅助手段。单克隆抗体在治疗中的应用：特异性单克隆抗体和肿瘤细胞表面相应抗原的结合
29、，可能诱发抗体依赖性细胞毒而杀死肿瘤细胞；因此，抗肿瘤单克隆抗体也是肿瘤治疗的有效手段之一。单克隆抗体与药物、核素和毒素蛋白结合的分子才称为免疫毒素，其已被广泛应用于抗肿瘤、抗感染、抗多种病变的治疗研究。38.模式生物在细胞生物学的研究中具有重要作用，请列举三种不同的模式生物分别在细胞生物学重要问题研究中的贡献。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：酵母：对细胞周期调控的研究和细胞周期蛋白的发现。非洲爪蟾：其卵很大，常用来进行细胞分裂和胚胎早期发育的研究，MPF 的研究工作和纯化均以其为模式生物。线虫：具有身体透明、细胞易于追踪的优点，通过它发现了细胞程序性死亡的很多机制。39.相差显微镜
30、、扫描电子显微镜、透射电子显微镜在细胞生物学的研究中各有什么用途以及其特点? （分数：4.00）_正确答案：()解析：相差显微镜的用途：观察活细胞，甚至研究细胞核和线粒体等细胞器的形态。特点：无需染色。 扫描电子显微镜：观察样品表面的形貌特征。特点：分辨率高，景深长，立体感强。 透射电子显微镜：观察细胞精细结构。特点：要求高度真空的工作系统，样品需要很薄。40.在进行原位杂交定位的分析制样时，为什么要常用冰冻切片的方法，而不用石蜡切片? （分数：4.00）_正确答案：()解析：以石蜡包埋切片，样品表面会被石蜡包埋，进行杂交时就会影响结合，从而影响结果的真实性，故应用冰冻切片方法。41.细胞工程
31、中，哪些方法可以诱导细胞融合，各有什么特点? （分数：4.00）_正确答案：()解析：灭活仙台病毒：温和高效；聚乙二醇：方便快速；高 pH 高钙：适合植物细胞融合；电脉冲细胞融合技术：高效，但对细胞有损伤。42.举 12 例说明电子显微镜技术与细胞分子生物学技术的结合在现代细胞生物学研究中的应用。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：现代细胞生物学发展是靠形态观察结合生物化学和分子生物学研究来推动的，没有这些相关学科的发展也就没有现代细胞生物学。电子显微镜的发明对细胞生物学的发展作出了很大的贡献，是人类迄今为止进行显微镜结构观察中最有力的工具。根据其成像特点、观察部位的不同可分为扫描电子显
32、微镜、透射电子显微镜和高压电子显微镜。 细胞分子生物学技术是通过对细胞组分的成分分析，从分子水平研究细胞的结构与功能。 目前，电子显微镜的形态观察与细胞分子生物学技术的结合是现代细胞生物学研究中常采用的实验方法。它为揭示生物大分子在细胞内的构建相互关系及细胞内的功能方面提供了有力的工具。 例一，DNA 及 DNA 结合蛋白质的电子显微术：DNA 是分子生物学的核心，相对来说能抵御由于电子束造成的损伤。通过电镜下检查核酸/蛋白质复合物，已经取得了很多重要发现。 例二，电镜的细胞化学染色及酶检测方法：用细胞染色方法定位 DNA、核糖体核蛋白、核仁组织区及胞外糖等，另外还可以利用组织特异性荧光染料的
33、光氧化性质来对细胞内细胞器进行定位。利用电镜组织化学法定位重要的酶，选择性染色不易分辨的结构，鉴定超薄切片和细胞片段的残余细胞器，用电镜方法可以鉴定出已知 1000 多种中的 30 多种。43.光学显微镜技术有哪些新发展?它们各有哪些突出优点?为什么电子显微镜不能完全代替光学显微镜? （分数：6.00）_正确答案：()解析：光学显微镜是光学显微技术的主要工具，自问世以来被广泛应用于细胞形态与结构的研究。光学显微镜是利用光线照明，使微小物体形成放大影像的仪器。其组成主要分为光学放大系统、照明系统、机械及支架系统。要提高分辨率必须从这三个系统上改进。先后出现了荧光显微镜、激光共焦点扫描显微镜、相差
34、显微镜、微分干涉显微镜、暗视野显微镜、倒置显微镜及录像增差显微镜技术。各自的主要特点和突出优点见下表： 各光学显微镜的主要特点和突出优点 光学显微镜技术 主要特点 突出优点 荧光显微镜 样品进行荧光标记 只有激发荧光可以成像 激光共焦点扫描显微镜 光通过一个小孔或裂缝后成像，只有 焦平面的完成像 图像异常清晰，分辨率提高 1.41.7 倍 相差显微镜 增加一块“相差板”夸大样品密度相 位差 不需染色，可观察活体 微分干涉显微镜 棱镜折射，增加样品密度的明暗区别 增加了反差，更具立体感 暗视野显微镜 黑暗背景下，利用散射光观察 细胞及细胞器边缘轮廓清晰 倒置显微镜 照明系统与物镜颠倒位置 增加集
35、光器与载物台的距离，可放置 增养容器观察 录像增差显微镜 计算机辅助微分干涉显微镜 提高分辨率，可观察颗粒的运动 电子显微镜用电子代替了光束，大大提高了分辨率。从观察性能方面看，电子显微镜相对光学显微镜是个飞跃，但两种显微镜工作原理不同：电子显微镜样品制作更加复杂，成本更高且只能观察“死”的样品，不能观察活的细胞，而光学显微镜是细胞生物学研究的一个层次(显微水平或细胞水平)，光学显微镜样品易制备，操作简单，对环境和设备的要求没有电子显微镜高。故电子显微镜不能完全代替光学显微镜，而且光学显微镜也发挥着重要的作用。44.为什么说细胞培养是细胞生物学研究的最基本技术之一? （分数：6.00）_正确答
36、案：()解析：在体外模拟体内的生理环境，培养从机体中取出的细胞，并使之生存和生长的技术称为细胞培养技术。 细胞培养是细胞生物学研究中最基本的实验技术之一，在理论上如细胞全能性的揭示，细胞周期及其调控，癌机制与细胞衰老，基因表达与调控，细胞融合以及一些细胞工程技术的建立都是与细胞培养技术分不开的。在实验方面，植物细胞培养为植物育种开辟了新途径。动物细胞培养为疫苗生产、药物研制与肿瘤防治等医学实验提供了全新的手段。 细胞培养是细胞生物学研究中最有价值的技术。通过细胞培养可获得大量的细胞，也可以通过细胞培养研究细胞的运动、细胞的信号转导、细胞的合成代谢等。突出的特点是在离体条件下观察和研究细胞生命活
37、动的规律。培养中的细胞不受体内复杂环境的影响，可以人为改变培养条件。 高等生物是由细胞构成的整体，在整体条件下要研究单个细胞或某一细胞在体内的功能活动是十分困难的。显然，如果把活细胞拿到体外进行培养来观察和研究，则要方便得多。细胞培养往往是进行细胞生物学研究的前提和基础，许多后期实验均建立在细胞培养的基础之上。细胞培养包括原核生物细胞、植物细胞、动物细胞以及与此密切相关的病毒的培养。活细胞离体后要在一定生理条件下才能存活和进行生理活动，特别是高等动植物细胞要求的生存条件极其严格，稍有不适就会死亡。故细胞培养必须注意三个环节：物质营养、生存环境与废物的排除。45.细胞组分的分离与分析有哪些基本的
38、实验技术?哪些技术可用于大分子在细胞内的定性与定位研究? （分数：4.00）_正确答案：()解析：细胞组分的分离方法：差速离心、密度梯度离心、速度沉降、等密度沉降以及利用流式细胞仪对细胞进行精确分选。 细胞组分的分析方法：细胞组分的定性研究方法有组织化学、细胞化学、免疫荧光、免疫电镜技术等。细胞组分的定量研究方法主要有分光光度计和流式细胞仪分析方法。 生物大分子在细胞内的定性与定位研究方法：免疫荧光、免疫电镜技术和原位杂交技术等。46.什么是模式生物?举例说明模式生物的使用在细胞生物学研究中的应用。 （分数：4.00）_正确答案：()解析：病毒：结构简单，基因组小，繁殖快，适合遗传操作。病毒主
39、要用于基因表达调控、生物大分子相互作用、生命物质自组装以及肿瘤的发生与防治等方面的研究。细菌：基因结构简单，培养方便，生长快，突变株的诱导、分离、鉴定技术成熟，转基因技术成熟，进行基因定位简便易行。是基因表达调控的研究材料。酵母：是单细胞真核生物的代表，生长迅速并且易于遗传操作。在细胞周期调控、蛋白质的相互作用、膜泡运输、细胞分化与衰老等研究中被运用。线虫：秀丽隐杆线虫基因组测序已经完成。其生命周期 3 天，繁殖快，在显微镜下通体透明，共有 959 个细胞。在发育生物学、遗传学、衰老和基因组学研究方面应用广泛。拟南芥：十字花科。二年生草本，高 740cm。拟南芥的优点是植株小(1cm 2 可种植好几棵)、每代时间短(从发芽到开花不超过 6 周)、结子多(每株植物可产很多粒种子)、生活力强(用普通培养基就可作人工培养)。拟南芥的基因组是目前已知
