1、ICS 11. 040 C 30 号国中华人民共和国国家标准GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 代替GB/T16886. 10-2000 医疗器械生物学评价第10部分:刺激与迟发型超敏反应试验Biological evaluation of medical devices-Part 10: Tests for irritation and delayed-type hypersensitivity (lSO 10993-10: 2002 , IDT) . . |) 川睛malt-。HHHHHHH4l mmmmm刷刷刷nOHHHHHHHHHAU l-EE
2、tno 川川川川川川同4配配配配EmmnHU叶-Ill-nu配EEU川URJV山MMMMM山n. | 2005-03-23发布2005-12-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局也舍中国国家标准化管理委员会保叩GB/T 16886. 10一2005/ISO10993-10:2002 目次前言.田引言.v l 范围-2 规范性引用文件-3 术语和定义4 总则与评价程序. 3 5 试验前的考虑.3 6 剌激试验.4 7 迟发型超敏反应试验8 解释试验结果的关键因素.16 附录A(规范性附录)剌激和致敏试验用材料的制备.17 A.1 总则A.2 直接接触材料A.3 试验材料浸提液. 17
3、A. 4 溶剂A. 5 无菌试验材料附录B(资料性附录)其他剌激试验. 18 B.1 总则 18 B. 2 皮内反应试验. 18 B.3 眼剌激试验. . . . . . . . . . . . . . . . 20 B. 4 口腔剌激试验. 23 B.5 阴茎剌激试验B. 6 直肠剌激试验B. 7 阴道剌激试验. . . 29 附录c(资料性附录)背景信息.31 C.1 剌激试验背景信息C.2 致敏试验在迟发型超敏反应方面的背景信息参考文献.34I GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993斗0:2002前言GB/T 16886的本部分等同采用国际标准ISO10993-10:
4、 2002(医疗器械生物学评价第10部分z剌激与迟发型超敏反应试验。本部分经技术修订取代GB/T16886.10-2000，主要修订内容如下:一一-修改了总则与评价程序;一一增加了试验前的考虑;一一增加了人体皮肤剌激试验气一一修改了迟发型超敏反应试验z一一将皮内反应试验和眼剌激试验由原标准正文中改为放在附录B中，作为特定部位应用医疗器械的适用刺激试验;一一将原标准中附录A和附录B的内容进行了综合修改，标题为剌激和致敏试验用材料的制备;一一修改了背景信息;一一一取消了原标准附录C。GB/T 16886的总题目是医疗器械生物学评价，由下列部分组成:-第1部分z评价与试验;一一第2部分:动物保护要求
5、;第3部分:遗传毒性、致癌性和生殖毒性试验;第4部分:与血液相互作用试验选择;一一第5部分:体外细胞毒性试验;第6部分:植入后局部反应试验;一一第7部分:环氧乙皖灭菌残留量;第8部分:生物学试验参照材料的选择与定量指南;一一第9部分:潜在降解产物的定性与定量框架;一一第10部分:刺激与迟发型超敏反应试验;一一第11部分:全身毒性试验;一一-第12部分:样品制备与参照样品;一一第13部分:聚合物医疗器械的降解产物的定性与定量;一一第14部分:陶瓷降解产物的定性与定量;一一第15部分:金属与合金降解产物的定性与定量;一一第16部分:降解产物和可榕出物的毒代动力学研究设计;一一第17部分z可溶出物允
6、许限量的确立;一一第18部分z材料化学表征。有关其他方面的生物学试验将有其他部分的标准。本部分是诸多标准和准则的协调产物，其中包括BS5736、OECD准则、美国药典和欧洲药典。本部分为试验选择和实施的基本指南文献，以对医疗器械和材料安全性有关的剌激和皮肤致敏反应做出评价。附录A为规范性附录，附录B和附录C为资料性附录。m山GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993斗0:2002N 本部分由国家食品药品监督管理局提出。本部分由全国医疗器械生物学评价标准化技术委员会归口。本部分起草单位:国家食品药品监督管理局济南医疗器械质量监督检验中心。本部分主要起草人:由少华、钱承玉、朱雪涛、
7、黄经春、王昕、王科错。GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 百|本部分用于评价从医疗器械中释放出的化学物质可能引起的接触性危害，包括导致皮肤与蒙古膜剌激、眼剌激和迟发型接触超敏反应。医疗器械中所含有的某些材料已进行过试验，其潜在的皮肤、秸膜剌激或致敏作用已被确认。其他一些未做过试验的材料及其化学成分在与生物组织接触时可能会产生不良作用。制造商有责任在投放市场前评价器械的潜在不良作用。传统上，人体试验之前要先进行小动物试验，以有助于预测人体反应。最近，还增加了可供选择的体外试验以及人体试验。尽管在这方面己做了很大努力并取得了一些进展，但结果显示目前所设计的
8、体外试验尚不能令人满意，因此还不能够取消体内试验。本部分鼓励在适当的时机将体外预试方法作为动物试验前的筛选试验。为了减少所用动物数量，本部分提出循序渐进的方法，在每一阶段都对试验结果进行分析和评价。人体试验之前一般要求先进行动物试验。进行这些研究时应遵循实验室质量管理规范并遵守与动物保护有关的规则。建议对数据进行统计学分析，而且在适宜的情况下予以引用。GB/T 16886的本部分所包括的试验是安全产品开发的重要工具，由受过培训的人员进行试验并解释试验结果。V GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 医疗器械生物学评价第10部分:刺激与迟发型超敏反应试验1
9、范围GB/T 16886的本部分描述了医疗器械及其组成材料潜在剌激和迟发型超敏反应的评价步骤。GB/T 16886的本部分包括:a) 试验前的考虑;b) 试验步骤，以及c) 结果解释的关键因素。附录A给出了与上述试验有关的特定材料制备说明。附录B给出的补充试验明确要求适用于皮内注射的器械，以及在眼、口腔、直肠、阴茎、阴道部位使用的器械。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过GB/T16886本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文
10、件，其最新版本适用于本部分。GB/T 16886. 1 医疗器械生物学评价第1部分z评价与试验(GB/T16886. 1-2001, idt ISO 10993-1 :1 997) GB/T 16886. 2 医疗器械生物学评价第2部分z动物保护要求(GB/T16886. 2-2000 , idt ISO 10993-2: 1992) GB/T 16886. 9 医疗器械生物学评价第9部分:潜在降解产物的定性和定量框架CGB/T 16886.9一2001,idt ISO 10993-9: 1999) GB/T 16886. 12 医疗器械生物学评价第12部分:样品制备与参照样品(GB/T168
11、86. 12 2004 , idt ISO 10993-12: 2002) GB/T 16886. 13 医疗器械生物学评价第13部分:聚合物医疗器械的降解产物的定性与定量(GB/T 16886.13一2001，idtISO 10993-13 :1 998) GB/T 16886. 14 医疗器械生物学评价第14部分:陶瓷降解产物的定性与定量(GB/T 16886. 14一2003，idtISO 10993-14:2001) GB/T 16886.15 医疗器械生物学评价第15部分:金属与合金降解产物的定性与定量(GB/T 16886. 15-2003,idt ISO 10993-15:200
12、0) ISO 10993-18 医疗器械生物学评价一一第18部分:材料化学表征ISO 14155-1: 2002 用于人体的医疗器械的临床试验一一第1部分:通用要求ISO 14155-2 :2003 用于人体的医疗器械的临床试验一一第2部分:临床试验方案3 术语和定义GB/T 16886.1确立的以及下列术语和定义适用于GB/T16886的本部分。1 GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 3.1 3. 2 3. 3 3. 4 变应原allergen 致敏原sensitizer 能引起特异性超敏反应的物质/材料，当再次接触同一种物质(材料)时产生变态反应。
13、空白遭blank Iiquid 制备试验样品的同一种潜剂，不加试验材料以相同的方式处理，用于测定溶剂的背景反应。激发challenge/ elicitation 腐蚀corrosion 型超敏反应。3. 6 剂量dose 对试验系统的3. 7 红斑皮肤或蒙古膜发3.8 焦而eschar 皮肤3. 9 诱导induction 个体3.10 剌激物irritant 引起剌激的物质。3. 11 刺激irritation 一次、多次或持续与一种物质(材料)接触所引起的局部非特异性炎症反应。3. 12 坏死necrosis 单细胞或多细胞死亡、组织或器官的一部分死亡所导致的不可逆损伤。3. 13 阴性对
14、照negative control 当按规定步骤试验时，在试验系统中出现可再现的适当的阴性、无反应或背景反应，证明试验步骤适宜性的材料或物质。2 GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10:2002 3. 14 水肿oedema 液体向组织内异常渗透引起的肿胀。3.15 阳性对照positive control 当按规定步骤试验时，在试验系统中出现可再现的适当的阳性或反应性应答，证明试验步骤适宜性的材料或物质。3. 16 溶于Jsolvent 用于湿化、稀释、悬浮、浸提或溶解、示例:化学制剂、介质、培养基等。3.17 溃痛ulceratio 表浅组织缺损3. 19 用于检
15、验剌激他类型的不良作用。本部分规定了安般不预示其a) 、，FSD 目前体外试验尚未得到d) 体内动物试验;注:对在a)或b)阶段没有被确定为强刺激的材料可再反复接触后做出进一步识实验室应至少每6个月进行一次皮肤致敏阳性对照物质试验汀，以确认试验系统并证实阳性反应。e) 无创性人体试验(临床试验)。如材料经证实对动物无剌激、无致敏或无毒性，可考虑进行人体皮肤剌激研究。5 试验前的考虑5.1 总则需要强调的是试验前的考虑是非常重要的，其结果可能是无需进行剌激和(或)致敏试验。GB/ T 16886. 1-2001第5章中给出的和下列条款的要求是适用的。3 GB/T 16886. 10-2005/I
16、SO 10993-10: 2002 5.2 材料类型5.2. 1 基本考虑应考虑在医疗器械制造和装配期间可能用做加工助剂(如润滑剂或脱模剂)的其他化学成分。原材料的新增化学成分和制造加工助剂、装配粘合剂/溶剂残留物以及灭菌残留物或灭菌过程所致的反应性产物可能存在于成品中，这些成分是否产生健康危害(风险)取决于成品的渗漏或降解性能。5.2.2 陶瓷、金属和合金这些材料在化学成分数量方面一般比聚合物和生物衍生材料简单。5.2.3 聚合物这类材料在化学成分方面比5.2.1所列物一般要复杂一些，可能有若干添加剂，而且整个聚合反应可能会有变化。5.2.4 生物衍生材料这类材料在其成分方面特别复杂，也常含
17、有加工残留物，如交联剂和抗生素。生物材料样品之间的成分可能是不一致的。本部分中的方法不是设计为检验生物衍生材料，因此不适用于该类材料，例如本部分中的试验未考虑交叉致敏作用。5.3 化学成分方面的信息5.3.1 总则应确立材料化学成分方面的完整的定性数据，也应获取与生物安全性相关的信息及定量数据。如没有定量数据，应用文件形式说明并确认。5.3.2 已有的数据资料可能的情况下应从原材料供应商处索取化学成分方面的定性与定量信息。聚合物常要求专利信息的使用权，应签署转让和使用这种机密信息的条款。还应从产品制造的系列制造厂(包括半成品和零件制造厂)索取其他一些生产过程中的添加剂(如脱模剂)的定性信息。在
18、没有任何化学成分数据的情况下建议研究文献，以确定原材料和添加剂的大概特性，这样有助于选择相关材料最适宜的分析方法。注:陶瓷、金属和合金成分可依据国际标准或美国试验材料协会(ASTM)标准，和(或)依据用户的规定，但为了获取完整的成分定性与定量资料，可能还需要要求原材料供应商或制造厂以及零件制造厂提供这些信息，以保证能鉴别加工助剂。能够获取这些数据的另一来源是主管部门掌控的材料文件。5.4 材料鉴别在产品制造过程中，如没有详细的成分信息、或仅有定性信息、或可能是正待开发的新材料或未知物，在这种情况下可能需要进行材料分析。应在研究的基础上采用适合于材料的分析方法，全部分析技术应经过论证、确认并报告
19、。如不知材料(化学溶液)的pH值，可能的情况下在体内或体外试验前应进行测定。浸提液的化学分析(定性和定量)可给出有用的信息，在这里仍要强调的是浸提液的化学分析得出的结论可能是无需再进行剌激和致敏试验，因为漫提液中化学成分的潜在剌激与致敏作用信息也许是己知的。6 剌激试验6. 1 体外剌激试验有两个体外试验，即大鼠皮肤经皮电阻抗(TER)试验和EPISKIN试验，已被国际间认可用于评价化学物皮肤腐蚀性的替代试验，但是尚无认可的评价皮肤刺激性的体外方法。各国际和国家组织一直在进行皮肤剌激体外试验的建立和确认工作并研究替代方法，也有些团体正在研究试验方法中动物和人反应的量化指标，以能够应用无创技术更
20、好地限定终点(见C.l)。4 GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 6.2 体内试验设计和选择中应考虑的因素医疗器械的剌激试验可用成品和(或)其漫提液进行。影响剌激试验结果的因素包括:a) 器械用于斑贴试验时的特性pb) 试验材料的剂量;c) 试验材料的应用方法;d) 封闭的程度;e) 接触部位;f) 接触时间和接触天数;g) 评价试验所采用的技术。附录C提供了其他背景信息。尽管增加了灵活性使研究者能提高试验的敏感性，可以适应各种使用和人群接触条件，但试验步骤的一致性是确保不同材料试验结果和不同实验室试验结果具有可比性的基本保证。评价多次和(或)长期接触
21、的器械和材料的要求已包括在试验步骤中，试验设计应高于预期的实际临床接触条件时间和(或)浓度J，在解释试验结果时应注意到该因素。试验材料的pH值如小于等于2或大于等于11.5，应认为是一种剌激物，不必进一步试验。但同时试验结果也显示，试验材料的酸碱度并非是导致严重损伤的惟一因素，试验材料的浓度、接触时间及其他理化性能等也都是至关重要的因素。注:预期广泛应用于正常和损伤皮肤的产品一般不允许对皮肤有实质性危害;然而对有些产品，由于其使用所带来的受益或其预期的生物学活性，则无论有无潜在的刺激作用，也是可以接受的。6.3 动物皮肤剌激试验6.3.1 目的采用相关动物模型对材料在试验条件下产生皮肤剌激反应
22、的潜在性做出评价。家兔为首选试验动物。6.3.2 试验材料固体或液体试验材料应按附录A规定进行制备。为了证实试验的敏感性，每只动物最好设有阴性对照和阳性对照。每只动物体上分别有两个试验材料区域和两个对照材料区域，试验材料和对照材料的试验剂量和所用的浸提介质应相同。6.3.3 动物与管理应使用健康、初成年的白化兔，雌雄不限，同一品系，体重不低于2kgo 应使动物适应环境，并按GB/T16886.2的规定饲养。如预期有剌激反应，初试应考虑使用1只动物。如没有出现明显的阳性反应红斑或水肿记分大于2(见表l)J时，应至少再使用2只动物进行试验。如预期无反应，初试可使用3只动物。在使用了至少3只动物后，
23、如仍为疑似反应或不明确，应考虑进行复试。6.3.4 试验步骤6.3.4. 1 动物准备动物的皮肤状况是试验的关键因素，只能使用皮肤健康无损伤的动物。一般在试验前4h 24 h 将动物背部脊柱两侧被毛除去(约10cmX 15 cm区域)，作为试验和观察部位。为了便于观察和(或)再次试验，可能需反复除毛。如果脱毛剂经确认使用简便，可由专业人员使用脱毛剂除毛。如需反复接触，按照下列6.3.4.2、6.3.4.3或6.3.4.4步骤进行，时间最长为21d。6.3.4.2 粉荆或渡体样晶的应用将0.5g或0.5mL的试验材料直接置于图1所示皮肤部位。固体和疏水性材料无需湿化处理，粉剂使用前宜用水或其他适
24、宜的溶剂稍加湿化(见附录A)。5 GB/T 16886. 10一2005/ISO10993-10: 2002 用2.5cm X 2. 5 cm透气性好的敷料(如吸收性纱布块)覆盖接触部位，然后用绷带(半封闭性或封闭性)固定敷贴片至少4h。接触期结束后取下敷贴片，用持久性墨水对接触部位进行标记，并用适当的方法除去残留试验材料，如用温水或其他适宜的无刺激性溶剂清洗并拭干。6.3.4.3 漫提谊和漫提介质的应用将相应的浸提液滴到2.5cm X 2. 5 cm大小的吸收性纱布块上，浸提液的用量以能浸透纱布块为宜，一般每块纱布滴0.5mL，按图1所示部位敷贴于动物背部两侧。按图1所示将滴有浸提介质的纱布
25、块敷贴在对照接触部位。用绷带(半封闭性或封闭性)固定敷贴片至少4h。接触期结束后取下敷贴片，用持久性墨水对接触部位进行标记，并用适当的方法除去主主可血岳飞温水或其他适宜的无刺激性溶剂清洗并拭干。1一一头部;2一一试验3 对照4一一去毛5-一对照6一一试验7一一尾部。应用。检测固体物时肤良好的接触性(见附录E与J验材料所致的皮肤反应相每在位部触接每述描统系分口h14 出给表按应反肤皮察观水下、t温光明用灯恒unH挝E-fH头二寸，电h光川川山川险。应FM沙射时机川口，22试光ah粉刊片:察tum成溶如贴即观则费U研用1敷却物总在图何收2.报除动1荐按刊如。用河法5E推川口牛。别性方11UA区闭的
26、66位，然后用绷带(半封闭性或封墨水对接触部位进行标记，并用适当规定时间内皮肤红斑和水肿反应情况并评分，记录结果以出具试验报告。注:在某些情况下，采用组织学或无创性方法可能有助于对皮肤反应的评价。6.3.5.2 单次接触试验单次接触试验时，在除去敷贴片后1h、24h、48h和72h记录各接触部位情况。如存在持久性损伤有必要延长观察时间，以评价这种损伤的可逆性或不可逆性，但延长期不必超过14d。GB/T 16886. 10一2005/18010993-10: 2002 6. 3. 5.3 多次接触试验多次接触试验应仅在急性单次接触试验完成后进行(至少在观察72h后)。多次接触试验时，每次在除去敷
27、贴片后1h以及再次接触前记录接触部位情况。接触次数可不限。末次接触后，除去敷贴片后1h、24h、48h和72h记录各接触部位情况。如有持久性损伤可能需要延长观察时间，以评价这种损伤的可逆性或不可逆性，但不必超过14d。6.3.6 结果评价单次接触试验按下列规定确定原发性剌激指数(PIl)。仅使用24h、48h和72h的观察数据进行计算。试验之前或72h后的恢复观察数据不用于计算。将每只动物在每一规定时间试验挝剔哼情雪雨雪贺电略业的原发性剌激记分相加后再除以观察总数出对照原发性剌激记分，将发性剌激指数。记分。注:累积刺性刺激记录每只时间。清晰红斑、-i、飞回f，豁出可也z中度红斑飞、度脏阿阿红姐
28、驯斑脏(紫扭红姐色崩形成f1J.，飞丁、._水肿形成无水肿极轻微水肿(勉强可见清晰水肿(肿起，不超出区域边缘)中度水肿(肿起约1mm) 重度水肿(肿起超过1mm，并超出接触区剌激最高记分注:记录并报告皮肤部位的其他异常情况。体试验中得出的原发时间和最长反应同剂量的浸提液试-f , 2 气/3 4 。2 3 4 8 7 GB/T 16886. 10-2005/150 10993-10: 2002 裴2兔剌激反应类型平均记分o 0.4 O. 5 1. 9 2 4.9 5 8 6.3.7 试验报告试验报告应包括:a) 试验材料或器械的描述;b) 试验材料或器械的预期用途/应用;c) 制备试验样品或试
29、验材料所用方法的详细描述pd) 试验动物的描述;e) 试验部位接触方法和绷带材料类型(半封闭或封闭式); f) 试验部位标记方式和读数;g) 观察记录;h) 接触量和接触周期，多次接触时每次均记录;i) 结果评价。6.4 人体皮肤剌激试验6.4. 1 简介反应类型极轻微轻度中度重度迄今为止主要依赖用试验动物(见附录。来推测人体皮肤剌激，以鉴别造成的危害。然而，由动物外推至人存在许多问题。对人体接触程度高的化学物(例如化妆品和洗涤剂)进行风险性评价时通常采用人体皮肤斑贴试验。人体研究能达到以下几种目的:a) 通过在人体而非实验动物检验化学物可直接鉴别出对人体的危害;b) 为人体接触程度高的化学物
30、提供风险性评价;c) 便于用先前已获取的实验动物研究数据推测人体应用。GB/T 16886的本部分允许直接从人体获取皮肤剌激数据，以鉴别产生的危害。本部分的目的是，确定在急性接触某种材料后是否存在明显的皮肤剌激危害。临床试验应按ISO14155-1和ISO14155-2规定进行。注:C.l给出了更多的刺激试验信息。6.4.2 初步考虑应获取关于材料毒性方面和材料化学组分(与毒性相关的)的充分信息，包括经由皮肤吸收数据，以能预示人体研究不存在明显健康风险。8 在下列情况下不应将材料试碰于人体za) 在体外或体内预测时，材料己显示出有刺激性pb) 在体外或体内预测时，材料巳显示出有腐蚀性;c) 根
31、据结构活性关系和(或)物理化学特性(如强酸或强碱余量)，可预测出材料对人体皮肤的潜在腐蚀性;d) 材料具有引起皮肤或呼吸道致敏反应的风险;e) 在试验条件下材料可产生急性毒性危害;和(或)f) 材料可产生遗传毒性、生殖毒性或致癌性危害。志愿者选择指南见6.4.5.1和第C.1章。GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 6.4.3 原理将供试材料单次剂量贴敷于志愿者皮肤上封闭。试验材料短期接触皮肤以使剌激反应保持在最低限度，但在某些情况下，较长的接触期可能也适用。本试验通过测定志愿者中出现皮肤剌激反应的比例来进行评价，这些反应与阳性对照材料引起的反应具有相关
32、性。6.4.4 试验方法描述6.4.4. 1 志愿者选择本试验设计用于健康的志愿者。选择的志愿者应至少18岁，无孕并不在哺乳期。此外不应选择已知对试验材料过敏或有皮炎症状的人员作为志愿者。选择志愿者的过程应由皮肤病专家或其他有资格的人员进行监督。6.4.4.2 剂量制备液体试验材料通常使用时不稀释。检验固体材料时，可用少量水(通常0.2mL)或在必要时用其他适宜的介质湿润试验材料，以保证试验材料与皮肤良好的接触性。应考虑固体材料的结构并应证实所用试验材料制备方法的合理性。使用湿润过的样品时应注意保证每一受试者接受试验材料的剂量相同。试验中每一受试者湿润用水量应相同并记录用水量。使用介质时，应考
33、虑到介质对试验材料引起的皮肤剌激反应的影响。当使用除水之外的介质作为固体材料的湿润剂时，应考虑给每一受试者设置空白液体(介质对照)贴敷。6.4.4.3 步骤6.4.4.3. 1 志愿者人数本试验应至少由30名志愿者组成，其中，男性或女性所占比例不能少于三分之一。6.4.4.3.2 试验材料应用将试验材料贴敷于人体皮肤的适宜位置，如上臂外侧，然后用带有纱布块的封闭性包扎带固定。志愿者的应用部位应相同并应记录。敷贴片直径一般应至少为1.8 cm，最好是2.5cm。采用适宜的无剌激性敷料及胶带固定敷贴片，使其在试验期间能与皮肤接触。敷贴片应能向皮肤单位面积内施加足够的试验材料剂量，一般认为约50mg
34、/cm2100 mg/cm2为宜。在应用液体试验材料时，通常向纱布片上滴加O.2 mLO. 4 mL，直至其湿润。试验固体材料时则将0.2g试验材料湿润后加到纱布块上，或者将纱布块湿润使试验材料覆盖整个试验部位。6.4.4.3.3 接触时间为了避免不可接受的强烈反应，应采用谨慎的方法进行试验。连续贴敷过程会产生阳性反应，但并非严重的剌激反应。可逐渐增加敷贴片接触时间，从15min和30min开始，直至1h , 2 h , 3 h和4h。如有足够的迹象表明接触1h不会引起强烈反应，则可省略15min和(或)30min的接触时间段。在短期接触未产生皮肤刺激反应(至少评价至试验后48灿的情况下，可在
35、另外一个新的皮肤部位进行长期贴敷，包括24h在内的封闭性贴敷，以保证能充分评价迟发型刺激反应。长期接触试验时要将试验材料贴敷在未试验过的皮肤部位。接触期结束后应除去残余的试验材料，可采用水或其他不改变表皮当前反应或整体状况的适宜溶剂。6.4.4.3.4 短期接触除了按6.4.4.3.3的描述逐渐增加应用时间外，如怀疑材料可能会导致严重的剌激反应，应减少接触时间，可在小规模志愿者组试验。根据得出的数据确定试验进程，随后再敷贴时应在48h、72h读数后进行。6.4.4.3.5 临床观察和皮肤反应等组检查敷贴部位是否有剌激反应迹象。除去敷贴片后立即对反应分级，并分别在1h2人24h、48h 和72h
36、时对反应分级。必要时要测定反应的可逆性，观察期可超过72h。此外，应准确描述试验前后GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 皮肤的状况(如色素沉着和水合程度)。按照表3对皮肤剌激反应分级并记录。可使用无创性生物工程方法(见附录c)。表3人体皮肤剌激试验分级反应描述无反应微弱阳性反应(轻微红斑和(或)接触区域大面积干燥)中度阳性反应(明显的红斑或干燥，可能超出接触区重度阳性反应(重度及扩散性红斑伴水肿和(或)焦癫形成)6.4.4.3.6 阳性对5由于人体对刺其他对照物经确认可用常规阳性激，只是取决于剂应与已知的化学刺48 h和72h时每个志6. 4.5.2
37、数据评价(解本试验的目的是测定反应的比率。同时还要结合试验材料的-方面的差异。6.4.5.3 试验报告10 试验报告应包括下列信息:a) 伦理方面的考虑和志愿者自愿的确认;b) 试验材料:物理性质和相关的理化特性;一一鉴别数据;c) 介质:等级。2 3 旧第C.l章)。危害Z因此，如果材料在受肤剌激物。另一方面，一一一鉴别并论证湿润固定试验材料时选用的介质;d) 志愿者:一一应用试验材料的志愿者的人数;一一志愿者的年龄、性别分布情况;e) 结果:GB/ T 16886. 10-2005/ISO 10993-10 : 2002 一一在Oh，lh，2h、24h、48h和72h时的反应率和在其他时间
38、的反应得分;每一观察时间段内每一志愿者的剌激反应数据列表(在除去敷贴片后24人48h和72h 时剌激反应率的总结); 一-对观察到的所有剌激反应的描述;一一对观察到的其他非剌激反应7. 1 试验选择用于测试迟发CBuehler试验)。最大剂量试验注:附录C给出7. 2 试验样晶浓7.2. 1 总则目前的试验准贝上是由试验剂量所决7. 2. 2 诱导致敏率在很大程度达到的最高浓度，但是不也脑用通用肠外给药溶剂制备7. 3 影响试验结果的其他重要因素试验样品的生化和物理特性可能会影响试验的选择。最大剂量试验需做皮内注射，如试验样品不能皮内注射，则应采用其他替代方法。不同的介质对试验材料的生物利用度
39、会产生影响，任何一种介质不可能适合于所有的材料，因此宜选择溶解度和渗透性均最佳的溶剂。试验材料的浓度在不影响结果解释的前提下应尽可能选择最高浓度。大部分研究者推荐试验样品为溶液，因为分散剂易于形成沉淀，使得精确给药比较困难。用于皮内注射的介质有盐水、丙二醇和植物油。不同实验室得出结果之间的差异可能出于多种原因。下列因素在试验步骤中是很重要的:试验环境条件、动物试验部位、除毛方法(剪、剃)或化学脱毛、敷贴片设计型式、试验材料剂量、封闭性、接触时11 G/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 间和动物读数。动物在遗传因素和管理方面不同，其敏感性也会有差异。要判定阳
40、性试验结果，有必要将激发阶段试验动物出现阳性反应的数量与相应的对照动物进行比较，反应的严重程度有助于结果的判定。激发时如出现临界反应，最好进行再激发予以判定。组织病理学未显示出有助于试验结果的评价。为保证试验步骤的重现性和敏感性，应定期用已知的接触性变应原进行试验，这类变应原有琉基苯并唾瞠(mercaptobenzothiazole)、已基肉桂醒(hexylcinnamic aldehyde)和对氨基苯甲酸乙酶(benzo-cine)。7.4 迟发型超敏反应最大荆量试验7.4. 1 目的采用将单一化学物作用于豚鼠的最大剂量技术，对材料在试验条件下使豚鼠产生皮肤致敏反应的潜在性做出评价。7.4.
41、2 试验样晶制备固体或液体试验材料样品应按附录A的规定进行制备。试验样品的浓度在不影响结果解释的情况下应尽可能的高(见7.4.4.2)。7.4.3 动物与管理应使用健康、初成年的白化豚鼠，雌雄不限，同一远交品系，试验开始时体重为300g-500g。雌鼠应未产并无孕。应使动物适应环境，并按GBjT16886.2的规定饲养。为了确定适宜的试验浓度(见7.4.4.2)，最好用几只动物进行预试验。粉剂或液体试验材料应至少使用10只动物，对照组至少使用5只动物。必要时另取动物用于预试验。测试浸提液时，每种试验样品应至少使用10只动物，对照组至少使用5只动物。必要时另取动物用于预试验。10只试验动物和5只
42、对照动物如全部呈阴性反应，则再进行试验也未必会出现阳性反应。但是，如出现任何疑似反应时，应进行再激发(见7.4.的，如仍有疑似反应，则要重新进行试验，最少采用20只试验动物和10只对照动物。7.4.4 试验步黯7.4.4. 1 准备在试验开始之前除去动物试验部位的被毛。每注射点皮内注射0.1mL。对于局部应用，将适宜的滤纸或吸收性纱布块(4cm2 -8 cm2)在试验样品中浸透，贴敷于除毛皮肤上，再用封闭式包扎带缠绕动物躯干固定。7.4.4.2 预试验预试验是为了确定7.4.4.3主试验中所用试验样品的浓度。用通用榕剂制备的未稀悍的浸提液不需要进行预试验。为了对主试验期间可能发生的皮肤激发状况
43、进行评价并对读数进行解释，应考虑对全部动物进行弗氏完全佐剂(FCA)注射的预处置。将试验样品的系列稀释物局部应用于动物腹侧部位，至少采用3只动物。24h后除去封闭性包扎带和敷贴片，按表4给出的Magnusson和Kligman分级标准评价贴敷部位的红斑与水肿反应程度。12 为主试验的局部诱导阶段所选择的最高浓度可导致轻度红斑，但不对动物产生其他有害作用。为主试验的激发阶段选择的最高浓度不产生红斑。G/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 襄4Magnusson和Kligman分级敷贴试验反应等级无明显改变。散发性或斑点状红斑1 中度融合性红斑2 重度红斑和水肿
44、3 7.4.4.3 主试验7.4.4.3. 1 皮肉诱导阶段按图2所示(A、B和C).在每只动物去毛的肩脚骨内侧部位成对皮内注射0.1mL。部位A:注射弗氏完全佐剂与选定的溶剂以50: 50(体积比)比例混合的稳定性乳化剂。对于水洛性材料，溶剂选用生理盐水(符合中国药典要求)。部位B:注射试验样品(未经稀释的浸提液);对照组动物仅注射相应溶剂。部位C:试验样品(部位B中采用的浓度)以50: 50的体积比例与弗氏完全佐剂和榕剂(50%)配制成的稳定性乳化剂混合后进行皮内注射;对照组注射空白液体与佐剂配制成的乳化剂。7.4.4.3.2 局部诱导阶段皮内诱导阶段后7d(土1d).按7.4.4.3.1
45、部位B中选定的浓度，采用面积约8c旷的敷贴片(滤纸或吸收性纱布块局部贴敷于每只动物的肩肝骨内侧部位，覆盖诱导注射点。如按7.4.4.3.1的最大浓度未产生剌激反应，应在局部敷贴应用前24h土2h.试验区用10%十二烧基硫酸纳进行预处理，按摩导入皮肤。用封闭式包扎带固定敷贴片，并于48h士2h后除去包扎带和敷贴片。最好新鲜制备浸提液，浸提液贮存如超过24h.浸提液在贮存条件下的稳定性宜进行验证。对照组动物使用空白液同法操作。7.4.4.3.3 激发阶段局部诱导阶段后14d(:I:1d) .用试验样品激发全部试验动物和对照动物。按7.4.4.3.1部位C中选定的浓度，将适宜的敷贴片或载样器皿置于试
46、验样品或介质对照中浸透，局部贴敷于诱导阶段未试验部位，如每只动物的上腹部。该浓度的稀释液可同法贴敷于其他未试验部位。用封闭式包扎带固定，并于24h土2h后除去包扎带和敷贴片。2 1一一头部E2一一0.1mL皮内注射点;3 去毛的肩B甲骨内侧部位;4一一一尾部。7.4.5 动物观察A B C 4 A B 固2皮内注射点部位2 除去敷贴片后24h和48h观察试验组和对照组动物激发部位皮肤情况，特别推荐在自然或全光谱光线下观察皮肤反应。按表4给出的Magnusson和Kligman分级标准对每激发部位和每一观察GB/T 16886. 10-2005/ISO 10993-10: 2002 时间皮肤红斑和水肿反应进行描述并分级。为了将结果评价偏差降至最低，特别推荐在不知试验处置信息的情况下进行读数。7.4. 6 结果评价按Magnusson和Kligman分级标准，对照组动物等级小于1，而试验组中等级大于或等于1时一般提示致敏。如对照组动物等级大于或等于1时，试验组动物反应超过对照组中最严重的反应则认为致敏。如为
