1、 ICS 11 020 C 61 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫生 行 业 标 准 WS T 635 2018 尿中砷形态测定 液相色谱 原子荧光法 Determination of urinary arsenic speciation liquid chromatography atomic fluorescence spectrometry 2018 09 17 发布 2019 03 01 实施 中华人民共和国 国家卫生 健康 委员会 发布 WS T 635 2018 I 前 言 本标准按照 GB T 1 1 2009 给出的规则起草 本标准起草单位 北京市疾病预防控制中心 重庆市疾
2、病预防控制中心 广东省疾病预防控制中心 安徽省疾病预防控制中心 北京朝阳医院 山西省疾病预防控制中心 本标准主要起草人 刘丽萍 王小艳 张妮娜 张洁 王晶 韦 莹 李惠玲 郭舒岗 陈绍占 戴 锐 睿 WS T 635 2018 1 尿中砷形态测定 液相色谱 原子荧光法 1 范围 本标准规定了 测定 尿中砷形态 亚砷酸盐 As III 砷酸盐 As V 一甲基砷 MMA 和二 甲基砷 DMA 的液相色谱 原子荧光法 本标准适用于 尿中砷形态 亚砷酸盐 As III 砷酸盐 As V 一甲基砷 MMA 和二甲基 砷 DMA 的测定 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的 凡是注日期
3、的引用文件 仅注日期的版本适用于本文件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改单 适用于本文件 GB T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 尿样按一定比例稀释后 以液相色谱进行分离 分离后的目标化合物在酸性介质下与硼氢化钾 KBH4 反应 生成气态砷化合物 用原子荧光光谱仪进行测定 保留时间定性 以峰高或者峰面积 绘制标准曲线法定量 4 仪器 4 1 玻璃器皿均需以硝酸溶液 1 4 浸泡 24 h 用水反复冲洗 最后用 纯 水冲洗干净 4 2 液相色谱 原子荧光光谱联用仪 4 3 pH 计 精度 0 01 4 4 电子天平 感量 0 1 mg 4 5 超声波清洗器
4、4 6 离心机 转速 8000 r min 4 7 纯水制备仪 5 试剂 WS T 635 2018 2 5 1 实验用水及试剂要求 除非另有说明 本方法所用试剂均为优级纯 纯 水为 GB T 6682 规定 的一级 水 5 2 盐酸 HCl 1 19 g mL 5 3 氢氧化钾 KOH 5 4 硼氢化钾 KBH4 5 5 磷酸氢二铵 NH4 2HPO4 5 6 甲酸 HCOOH 99 5 7 标准物质 亚砷酸根 AsO33 砷酸根 AsO43 一甲基砷 CH4AsO3 二甲基砷 C2H6AsO2 均为有证标准物质 6 试剂 配制 6 1 载流 盐酸溶液 7 93 量取 70 mL 盐酸 用纯
5、水稀释至 1000 mL 6 2 还原剂 20 g L 硼氢化钾 溶液 3 5 g L 氢氧化钾 溶液 称取 3 5 g 氢氧化钾溶解于 900 mL 纯水中混匀 加入 20 g 硼氢化钾 用纯水稀释至 1000 mL 混 匀 6 3 甲酸溶液 10 90 量取 10 mL 甲酸 用纯水稀释至 100 mL 6 4 流动相 15 mmol L 磷酸氢二铵 溶液 称取 1 98 g 的磷酸氢二铵溶解于 1000 mL 纯水中 用 甲酸溶液 10 90 调节 pH 至 6 0 超声脱气 5 min 备用 6 5 砷形态标准溶液配制 6 5 1 砷形 态标准储备溶液 As 10 0 mg L 分别准
6、确称取适量亚砷酸根 砷酸根 一甲基砷 二甲 基砷 四 种砷形态标准物质 用纯水配制成含砷浓度为 10 0 mg L 的砷形态单标标准储备溶液 置于 4 冰箱中保存 6 5 2 砷形态混合标准溶液 As 1 0 mg L 分别准确移取 10 0 mg L 的 四 种砷形态单标标准储备溶液 1 00 mL 置于 10 mL 容量瓶中 用纯水定容至刻度 现用现配 WS T 635 2018 3 6 5 3 砷形态混合标准使用系列溶液 As 0 100 0 g L 分 别准确移取一定量的 1 0 mg L 砷形态混 合标准溶液 用纯水逐级稀释成 0 0 g L 2 0 g L 5 0 g L 10 0
7、 g L 50 0 g L 100 0 g L 四 种 砷形态混合标准系列使用溶液 现用现配 7 样品收集 运输和保存 收集不少于 10 mL 尿液 置于洁净的聚丙烯塑料或玻璃试管中 严密封口以防蒸发 现场收集尿 样后 在 4 下保存运输 样品应该尽快测定 在 4 下可保存 30 d 8 分析步骤 8 1 试样的前处理 取 1mL 均匀的 尿样 用纯水稀释 3 倍 用 0 45 m 水系滤膜过滤后上机测定 如果尿样中有沉淀 先将尿样离心 10 min 8000 r min 取一定量的上清液按以上方法测定 如果样品中 砷 形态浓度超过 标准曲线上限 则将尿样按一定比例 稀释 后测定 8 2 液相
8、色谱参考条件 8 2 1 色谱柱条件 阴离子交换色谱柱 柱长 250 mm 内径 4 1 mm 或等效柱 阴离子交换色谱保 护柱 柱长 25 mm 内径 2 3 mm 或等效柱 8 2 2 流动相组成 15 mmol L 磷酸氢二铵 溶液 pH 6 0 作为流动相 1 0 mL min 流速洗脱 进样体 积为 100 L 8 3 原子荧光检测参考条件 原子荧光检测参考条件如下 光电倍增管负高压 280 V 砷空心阴极灯总电流 90 mA 辅阴极灯电流 40 mA 原子化方式 火焰原子化 原子化器温度 中温 氩载气流量 300 mL min 氩屏蔽气流量 600 mL min 还原剂 20 g
9、L 硼氢化钾 溶液 3 5 g L 氢氧化钾 溶液 WS T 635 2018 4 载流 盐酸溶液 7 93 8 4 标准曲线的测定 分别 吸取 100 L 四种 砷 形态 的 混合标准使用系列溶液 依次注入液相色谱 原子荧光光谱联 用仪进 行分离及检测 得到色谱图 以保留时间定性 以标准系列溶液中 砷 形态 的浓度为横坐标 以色谱峰高 或峰面积为纵坐标 绘制标准曲线 标准溶液色谱图见附录 A 中图 A 1 8 5 试样溶液的测定 吸取 100 L 试样溶液注入液相 色谱 原子荧光光谱联用仪进行分析 得到色谱图 以保留时间定 性 根据标准曲线得到试样溶液中砷形态的含量 试样溶液色谱图见图 A
10、2 9 分析结果的计算 尿样中 砷 形态 As III As V MMA DMA 的 含量 以砷计 按式 1 计算 Xi Ci C0 K 1 式中 Xi 尿样中砷 形态的含量 以砷计 单位为微克 每升 g L Ci 由标准曲线查得的试样溶液中砷 形态 的浓度 以砷计 单位为微克每升 g L C0 由标准曲线查得的现场空白中砷形态的浓度 以砷计 单位为微克每升 g L K 尿样稀释倍数 10 方法特性 10 1 检出限 本方法中亚 砷酸盐 一甲基砷 二甲基砷 检出限均为 0 5 g L 定 量限 为 1 5 g L 砷酸盐检出限 为 0 8 g L 定 量限 为 2 4 g L 10 2 精密度
11、 6个实验室对含 砷形态为 6 0 g L 400 0 g L的尿 样 进行 6次重复测定 相对标准偏差 均 小于 5 0 10 3 准确度 采用 尿中砷形态成分 标准物质及加标回收考察方法准确性 6 个 实验室 测定的 不同浓度的样品加标回 收率在 80 120 之间 WS T 635 2018 5 11 质量保证和质量控制要点 11 1 实验环境 器皿 试剂 采样及运输过程应避免砷污染 11 2 每次样品测定时均应配制和测定标准系列 标准曲线回归方程的相关系数绝对值应 0 998 11 3 推荐采用平行样品 冻干 人尿中砷形态成分 标准 物质 及加标回收 作为质量控制手段 11 4 随 样品采集同时进行空白采集 WS T 635 2018 6 附 录 A 资料性附录 砷形态标准溶液及试 样 溶液 色谱图 A 1 砷形态标准溶液色谱图 10 g L 亚砷酸 As III 二甲基砷 DMA 一甲基砷 MMA 砷酸 As V 标准溶液色谱 图 见图 A 1 图 A 1 砷形态标准溶液 10 g L 色谱图 A 2 试样溶液色谱图 试样溶液色谱图见图 A 2 图 A 2 试样溶液中 砷 形态色谱图
