1、 ICS 11.020 C 61 WS 中 华 人 民 共 和 国 卫生 行 业 标 准 WS/T 635 2018 尿中砷形态测定 液相色谱 -原子荧光法 Determination of urinary arsenic speciation liquid chromatography-atomic fluorescence spectrometry 2018 - 09 - 17 发布 2019 - 03 - 01 实施 中华人民共和国 国家卫生 健康 委员会 发布 WS/T 635 2018 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009 给出的规则起草。 本标准起草单位： 北京市疾病
2、预防控制中心 、重庆市疾病预防控制中心、广东省疾病预防控制中心、 安徽省疾病预防控制中心、北京朝阳医院、山西省疾病预防控制中心 。 本标准主要起草人： 刘丽萍 、 王小艳、张妮娜、 张洁 、王晶、韦 莹 、李惠玲、郭舒岗、陈绍占、 戴 锐 睿 。 WS/T 635 2018 1 尿中砷形态测定 液相色谱 -原子荧光法 1 范围 本标准规定了 测定 尿中砷形态 （ 亚砷酸盐 As（ III） 、砷酸盐 As（ V） 、一甲基砷（ MMA）和二 甲基砷（ DMA） ） 的液相色谱 -原子荧光法 。 本标准适用于 尿中砷形态（亚砷酸盐 As（ III） 、砷酸盐 As（ V） 、一甲基砷（ MMA）
3、和二甲基 砷（ DMA） 的测定。 2 规范性引用文件 下列文件对本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 原理 尿样按一定比例稀释后，以液相色谱进行分离，分离后的目标化合物在酸性介质下与硼氢化钾 （ KBH4）反应，生成气态砷化合物，用原子荧光光谱仪进行测定，保留时间定性，以峰高或者峰面积 绘制标准曲线法定量。 4 仪器 4.1 玻璃器皿均需以硝酸溶液（ 1+4） 浸泡 24 h，用水反复冲洗，最后用 纯 水冲洗干净 。 4.2 液相
4、色谱 原子荧光光谱联用仪。 4.3 pH 计（精度 0.01）。 4.4 电子天平（感量 0.1 mg）。 4.5 超声波清洗器 。 4.6 离心机，转速 8000 r/min。 4.7 纯水制备仪 。 5 试剂 WS/T 635 2018 2 5.1 实验用水及试剂要求 ： 除非另有说明， 本方法所用试剂均为优级纯， 纯 水为 GB/T 6682 规定 的一级 水。 5.2 盐酸（ HCl， =1.19 g/mL）。 5.3 氢氧化钾 （ KOH） 。 5.4 硼氢化钾 （ KBH4） 。 5.5 磷酸氢二铵 (NH4)2HPO4。 5.6 甲酸（ HCOOH， 99 %）。 5.7 标准物
5、质：亚砷酸根 （ AsO33-），砷酸根（ AsO43-），一甲基砷（ CH4AsO3-），二甲基砷（ C2H6AsO2-） 均为有证标准物质。 6 试剂 配制 6.1 载流，盐酸溶液（ 7+93） 量取 70 mL 盐酸 ， 用纯水稀释至 1000 mL。 6.2 还原剂（ 20 g/L 硼氢化钾 溶液 -3.5 g/L 氢氧化钾 溶液 ） 称取 3.5 g 氢氧化钾溶解于 900 mL 纯水中混匀，加入 20 g 硼氢化钾，用纯水稀释至 1000 mL，混 匀。 6.3 甲酸溶液 （ 10+90） 量取 10 mL 甲酸 用纯水稀释至 100 mL。 6.4 流动相（ 15 mmol/L
6、磷酸氢二铵 溶液 ） 称取 1.98 g 的磷酸氢二铵溶解于 1000 mL 纯水中，用 甲酸溶液 （ 10+90） 调节 pH 至 6.0，超声脱气 5 min，备用。 6.5 砷形态标准溶液配制 6.5.1 砷形 态标准储备溶液 (As)=10.0 mg/L：分别准确称取适量亚砷酸根 、 砷酸根 、 一甲基砷 、 二甲 基砷 四 种砷形态标准物质，用纯水配制成含砷浓度为 10.0 mg/L 的砷形态单标标准储备溶液，置于 4 冰箱中保存。 6.5.2 砷形态混合标准溶液 (As)=1.0 mg/L：分别准确移取 10.0 mg/L 的 四 种砷形态单标标准储备溶液 1.00 mL 置于 1
7、0 mL 容量瓶中，用纯水定容至刻度，现用现配。 WS/T 635 2018 3 6.5.3 砷形态混合标准使用系列溶液 (As)=0 100.0 g/L：分 别准确移取一定量的 1.0 mg/L 砷形态混 合标准溶液，用纯水逐级稀释成 0.0 g/L、 2.0 g/L、 5.0 g/L、 10.0 g/L、 50.0 g/L、 100.0 g/L 四 种 砷形态混合标准系列使用溶液，现用现配。 7 样品收集、运输和保存 收集不少于 10 mL 尿液，置于洁净的聚丙烯塑料或玻璃试管中，严密封口以防蒸发。现场收集尿 样后，在 4 下保存运输；样品应该尽快测定，在 4 下可保存 30 d。 8 分
8、析步骤 8.1 试样的前处理 取 1mL 均匀的 尿样 用纯水稀释 3 倍，用 0.45 m 水系滤膜过滤后上机测定。如果尿样中有沉淀， 先将尿样离心 10 min（ 8000 r/min），取一定量的上清液按以上方法测定。如果样品中 砷 形态浓度超过 标准曲线上限，则将尿样按一定比例 稀释 后测定 。 8.2 液相色谱参考条件 8.2.1 色谱柱条件：阴离子交换色谱柱（柱长 250 mm，内径 4.1 mm），或等效柱。阴离子交换色谱保 护柱（柱长 25 mm，内径 2.3 mm），或等效柱。 8.2.2 流动相组成： 15 mmol/L 磷酸氢二铵 溶液 （ pH=6.0） 作为流动相，
9、1.0 mL/min 流速洗脱，进样体 积为 100 L。 8.3 原子荧光检测参考条件 原子荧光检测参考条件如下： 光电倍增管负高压： 280 V； 砷空心阴极灯总电流： 90 mA； 辅阴极灯电流： 40 mA； 原子化方式：火焰原子化； 原子化器温度：中温； 氩载气流量： 300 mL/min； 氩屏蔽气流量： 600 mL/min； 还原剂： 20 g/L 硼氢化钾 溶液 -3.5 g/L 氢氧化钾 溶液； WS/T 635 2018 4 载流：盐酸溶液 （ 7+93） 。 8.4 标准曲线的测定 分别 吸取 100 L 四种 砷 形态 的 混合标准使用系列溶液，依次注入液相色谱 -原
10、子荧光光谱联 用仪进 行分离及检测，得到色谱图，以保留时间定性。以标准系列溶液中 砷 形态 的浓度为横坐标，以色谱峰高 或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。标准溶液色谱图见附录 A 中图 A.1。 8.5 试样溶液的测定 吸取 100 L 试样溶液注入液相 色谱 原子荧光光谱联用仪进行分析，得到色谱图，以保留时间定 性。根据标准曲线得到试样溶液中砷形态的含量。试样溶液色谱图见图 A.2。 9 分析结果的计算 尿样中 砷 形态 As（ III） 、 As(V)、 MMA、 DMA的 含量（ 以砷计 ）按式（ 1）计算 : Xi =（ Ci - C0） K （ 1） 式中： Xi 尿样中砷 形态的含量
11、 （ 以砷计 ） ，单位为微克 每升（ g/L）； Ci 由标准曲线查得的试样溶液中砷 形态 的浓度 （ 以砷计 ） ，单位为微克每升（ g/L）； C0 由标准曲线查得的现场空白中砷形态的浓度（以砷计），单位为微克每升（ g/L）； K 尿样稀释倍数 。 10 方法特性 10.1 检出限 本方法中亚 砷酸盐、一甲基砷、二甲基砷 检出限均为 0.5 g/L， 定 量限 为 1.5 g/L； 砷酸盐检出限 为 0.8 g/L， 定 量限 为 2.4 g/L。 10.2 精密度 6个实验室对含 砷形态为 6.0 g/L 400.0 g/L的尿 样 进行 6次重复测定， 相对标准偏差 均 小于 5.
12、0%。 10.3 准确度 采用 尿中砷形态成分 标准物质及加标回收考察方法准确性， 6 个 实验室 测定的 不同浓度的样品加标回 收率在 80% 120%之间。 WS/T 635 2018 5 11 质量保证和质量控制要点 11.1 实验环境、器皿、试剂、采样及运输过程应避免砷污染。 11.2 每次样品测定时均应配制和测定标准系列，标准曲线回归方程的相关系数绝对值应 0.998。 11.3 推荐采用平行样品、冻干 人尿中砷形态成分 标准 物质 及加标回收 作为质量控制手段。 11.4 随 样品采集同时进行空白采集 。 WS/T 635 2018 6 附 录 A （资料性附录） 砷形态标准溶液及试 样 溶液 色谱图 A.1 砷形态标准溶液色谱图 10 g/L 亚砷酸 As（ III） ，二甲基砷（ DMA），一甲基砷（ MMA），砷酸 As（ V） 标准溶液色谱 图，见图 A.1。 图 A.1 砷形态标准溶液（ 10 g/L）色谱图 A.2 试样溶液色谱图 试样溶液色谱图见图 A.2 图 A.2 试样溶液中 砷 形态色谱图 _
