1、ICS 67.120.30 B 50 道国中华人民共和国国家标准G/T 20361-2006 水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法Determination of malachite green and gentian violet residues in fishery products- High performance liquid chromatography with fluorescence detector 2006-06-21发布2006-09-01实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局也舍中国国家标准化管理委员会&叩061106000277 中华人民
2、共和国国家标准水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效在相色i昔荧光检测法GB/T 20361- 2006 长中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销并开本880X12301/16 印张O.5 字数9千字2006年9月第一版2006年9月第一次印刷9号书号:155066 1-28119定价8.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话，(010)68533533GB/T 20361一2006刚自本标准的附录A为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出
3、。本标准由全国水产标准化技术委员会归口。本标准起草单位:中国水产科学研究院、农业部渔业环境及水产品质量监督检验测试中心(舟山)、国家水产品质量监督检验测试中心、农业部水产品质量监督检验测试中心(上海)。本标准主要起草人:郑斌、赵红潭、冷凯良、刘士忠、于慧娟、耿霞、陈雪昌、蔡友琼、黄冬梅、钟志、冯敬宾。1 范围水产品中孔雀石绿和结晶紫残留量的测定高效液相色谱荧光检测法GB/T 20361-2006 本标准规定了水产品中孔雀石绿(Malachite green , MG)及其代谢物隐色孔雀石绿(Leucomala chite green, LMG)残留总量、结晶紫(Gentianviolet，GV
4、)及其代谢物隐色结晶紫(Leucogentianviolet , LGV)残留总量的高效液相色谱荧光测定方法。本标准适用于水产品可食部分中孔雀石绿和结晶紫残留的测定。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法CGB/T6682 1992 , neq ISO 3696:1987) 3 原理样品中残留的孔雀石绿或结晶紫用棚氢
5、化饵还原为其相应的代谢产物隐色孔雀石绿或隐色结晶紫，乙睛-乙酸锻缓冲混合液提取，二氯甲皖液液萃取，固相萃取柱净化，反相色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。4 试荆除另有规定外，所有试剂均为分析纯，试验用水应符合GB/T6682一级水的标准。4.1 乙睛:色谱纯。4.2 二氯甲:皖。4.3 酸性氧化铝:分析纯，粒度O.071 mmO. 150 mm。4.4 二甘醇。4.5 棚氢化挥。4.6 无水乙酸钱。4. 7 冰乙酸。4.8 氨水。4.9 棚氢化伺梅液0.03mol/曰:称取0.405g棚氢化押于烧杯中，加250mL水溶解，现配现用。4. 10 棚氧化饵溶液0.2mol/曰:称取0.54g
6、棚氢化饵于烧杯中，加50mL水溶解，现配现用。4. 11 20 %盐酸楚胶溶液:溶解12.5g盐酸楚胶在50mL水中。4.12 对甲苯磺酸洛液0.05mol/L:称取O.95 g对-甲苯磺酸，用水稀释至100mL。4. 13 乙酸锻缓冲溶液0.1mol/L:称取7.71g无水乙酸镀榕解于1000mL水中，氨水调pH到10.0。4. 14 乙酸镀缓冲榕液0.125mol/L:称取9.64g无水乙酸镀溶解于1000 mL水中，冰乙酸调pH到4.5。4.15 酸性氧化铝固相萃取柱:500mg , 3 mL。使用前用5mL乙睛活化。4.16 Varian PRS柱或相当者:500mg , 3 mL。使
7、用前用5mL乙腊活化。GB/T 20361-2006 4.17 标准品:孔雀石绿(MG)分子式为(CZ3HZ5 N2) (Cz H04) J zCz HZ04、结晶紫(GV)分子式为CZ5 HZ9 CIN3 ，纯度大于98%。4. 18 标准储备榕液:准确称取适量的孔雀石绿、结晶紫标准品，用乙腊分别配制成100g/mL的标准贮备液。4. 19 混合标准中间液(1g/mL):分别准确吸取1.00 mL孔雀石绿和结晶紫的标准储备溶液至100 mL容量瓶中，用乙睛稀释至刻度，配制成1g/mL的混合标准中间溶液。一180C避光保存。4. 20 混合标准工作溶液:根据需要，临用时准确吸取一定量的氓合标准
8、中间榕液，加入棚氢化梆溶液(4. 9)0. 40 mL，用乙腊准确稀释至2.00mL，配制适当浓度的氓合标准工作液。5 仪器与设备5.1 高效液相色谱仪:配荧光检测5.2 匀浆机。5. 3 5. 4 5. 5 5. 6 6 样晶制备6. 1 取样鱼去鳞、去皮，称取5.00g 氧化铝，振荡2mi 2 mL二甘醇，3m 另取50mL 跚氢化梆恪液(4.1 4 000 r/min离心10i 在50mL离心5. 0 mL乙酸镀缓冲溶导10 m.n，上清液井入125在分液漏斗中加入20茄形瓶中，继续在分液漏斗J离心管，4000 r/min离心10mi 睛溶解残渣。6. 3 净化，加入5g酸性液漏斗中加入
9、n，静置20min , , 4 000 r/min离心将PRS柱安装在固相萃取装置上，上端连接酸性氧化铝固相萃取柱，用5mL乙腊活化，转移提取液到柱上，再用乙睛洗茄形瓶两次，每次2.5mL，依次过柱，弃去酸性氧化铝柱，吹PRS柱近干，在不抽真空的情况下，加入3mL等体积i昆合的乙睛和乙酸锻搭液(4.13)，收集洗脱液，乙腊定容至3mL，过0.45m滤膜，俱液相色谱测定。7 测定7. 1 色谱条件7. 1. 1 色谱柱:ODS-CI8柱，250mm X 4. 6 mm(内径)，粒度5m。2 7.1.2 流动相:乙睛+乙酸镀缓冲恪液(0.125mol/L ,pH4. 5) =80十20。7. 1.
10、 3 流速:1. 3 mL/min。7. 1. 4 柱温:35C。7.1.5 激发波长:265 nm。7. 1. 6 发射波长:360nm。7.1.7 进样量:20L。7.2 色谱分析. GBjT 20361-2006 分别注入20，uL孔雀石绿和结晶紫混合标准工作溶液及样品提取液于液相色谱仪中.按t述色谱条件进行色谱分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性毡围之内。根据标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品包i普图参见附录A。8 结果8. 1 计算样品中孔雀石绿和结晶紫的残留量按式(1)计算。式中:x = A X c, X V A , Xm X一一-样品中待测组分残留量，单位为毫克每千
11、克(mg/kg); C，一一待测组分标准工作液的浓度，单位为微克每毫升(g/mL); A一样品中待测组分的峰面积;人待测组分标准工作液的峰面积;V一-样被最终定容体积，单位为毫升(mL); m一一样品质量，单位为克(g)。8.2 线性范围孔雀石绿和结晶紫混合标准溶液的线性范围:0.1吨/mL600ng/mL, 8.3 检出限本方法孔雀石绿、结晶紫的检出限均为O.5 ，ug/kg。8. 4 回收率在样品中添加O.4g/kg100g/kg孔雀石绿时，回收率为70%110%。在样品中添加O.4g/kglOOg/kg结晶紫时，回收率为70%110%。8.5 重复性本方法的相对标准偏差豆15%。. ( 1 ) OONIt-m旧的ONH阁。GB/T 20361-2006 附录(资料性附录)孔雀石绿CMG)和结晶紫CGV)混合标准的液相色谱固A .CHV。由由0.。同OFt15 10 5 E 。一2tlmm 12.5 10.0 7.5 5.0 2.5 侵权必究浓度为0.01g/mL孔雀石绿(MG)和结晶紫CGV)混合标准的液相色谱圄头版权专有固A.1书号:155066 1-28119 定价:8.00元GB/T 20361-2006
