1、ICS 11.220 B 41 DB21 辽宁省 地 方 标 准 DB21/T 3095 2018 犬非结核细菌性肺炎诊断技术规范 The technical Specification for diagnostic bacterial of Non-tuberculosis mycobacteria pneumoniae for canine 2018 - 12 - 25 发布 2019 - 01 - 25 实施 辽宁省市场监督管理局 发布 DB21/T 3095 2018 I 目 次 前 言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 3.1 肺炎 pn
2、eumonia . 1 3.2 非结核细菌性肺炎 bacterial of Non-tuberculosis mycobacteria pneumoniae . 1 3.3 感染 infection . 1 3.4 16SrRNA . 1 4 诊断 . 1 4.1 流行病学特点 . 2 4.2 临床症状诊断 . 2 4.2.1 呼吸系统症状 . 2 4.2.2 发热及相关症状 . 2 4.2.3 其它方面症状 . 2 4.3 影像学特征 . 2 4.4 外周血检查特征 . 2 4.5 病原学检测 . 2 4.5.1 细菌分离培养和涂片镜检 . 2 4.5.2 生化试验 . 2 4.5.3 致病
3、性检验 . 3 4.5.4 分子生物学鉴定 . 3 5 诊断结果判定 . 3 5.1 初步诊断 . 4 5.2 确诊 . 4 6 鉴别诊断 . 4 附录 A（资料性附录） 细菌性肺炎主要致病菌分离鉴定具体方法和结果判定依据 . 5 附录 B（资料性附录） 犬细菌性肺炎的鉴别诊断 . 10 DB21/T 3095 2018 II 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草 本标准由辽宁省畜牧兽医局提出并归口。 本标准起草单位：锦州医科大学、鞍山动物检疫站、本溪市动物疫病预防控制中心等单位。 本标准主要起草人：周铁忠、毕聪明、盛鹏飞、李春宵、陈勇、张建平、马强、赵岩、郭维军、杨
4、丽、赵刚、刘建华、朱绪银、高蕾、李德臣、金娜、高柏华、 张娜、 宋志永、宋宝强、高峰、孙传禄、 徐畅、何礼。 DB21/T 3095 2018 1 犬非结核细菌性肺炎诊断技术规范 1 范围 本标准规定了犬非结核细菌性肺炎诊断的技术方法、诊断依据和鉴别诊断。 本标准适用于我省动物诊疗单位及兽医工作者对犬非结核细菌性肺炎的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件中 的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的 修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用 于本标准。但是，鼓励根据本标准达成协议的各方研究使用这些文件的最新版本
5、。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 肺炎 pneumonia 指终末气道、肺泡和肺间质的炎症，可由病原微生物、理化因素、免疫损伤、过敏及药物所致。按 病因可分为细菌性肺炎（肺炎链球菌、支气管败血波氏杆菌、金黄色葡萄球菌等 ），非典型病原体所致 肺炎（支原体、衣原体、军团菌），病毒性肺炎，肺真菌性肺炎，其他病原体所致肺炎（立克次氏体、 弓形体、肺寄生虫等），理化因素所致肺炎。 3.2 非结核细菌性肺炎 bacterial of Non-tuberculosis mycobacteria pneumoniae 细菌性肺炎指由肺炎
6、链球菌、支气管败血波氏杆菌、金黄色葡萄球菌等主要病原菌引起的肺炎，不 包括结核分枝杆菌所致的肺结核。为了严格区分本标准将细菌性肺炎定义为“非结核细菌性肺炎”。 3.3 感染 infection 病原微生物侵入动物机体，并在一 定部位定居，生长繁殖，从而引起机体一系列病理反应，这个过 程称为感染。 3.4 16SrRNA 16SrRNA基因是细菌上编码 rRNA相对应的 DNA序列，存在于所有细菌的基因组中； 16SrRNA具有高度 的 保守性 和特异性以及该基因序列足够长（包含约 50个功能域）等特征，所以， 16SrRNA基因检测技术 可做为病原菌检测和鉴定的主要方法，应用 该技术可以实现对
7、病原菌进行快速、微量、准确简便地分类 鉴定和检测。 4 诊断 DB21/T 3095 2018 2 依据流行病学特点、临床症状及影像学特征等作出初步诊断，确诊需做病原学检测。 4.1 流行病学特点 在发病前有接触感染病原微生物的病犬或带菌犬，如引入新的病犬未隔离就混群，或居住或到过细 菌性肺炎流行的区域；发病率高，但致死率低，主要为 4月龄以内的幼犬发病，成年犬少见发病；发病 前有春秋季节交替、环境温度突变、长途运输等应激因素，导致抵抗力下降，诱发条件性致病菌大量繁 殖而发病。 4.2 临床症状诊断 4.2.1 呼吸系统症状 表现为咳嗽，痰液脓汁样黄白色或铁锈样或带血， 有时流鼻汁；呼吸急促，
8、呼吸困难，如舌头青紫 及鼻翼扇动，重者呈点头状呼吸、呼气时间延长、出现胸壁吸气性凹陷或呻吟等；胸部听诊肺泡呼吸音 消失，支气管呼吸湿啰音，健康部位则肺泡音高朗，继发胸膜炎可听到胸膜摩擦音；胸部叩诊有局灶性 或大面积浊音区。 4.2.2 发热及相关症状 体温升高至 39.5 以上，表现精神沉郁，食欲减退或废绝，结膜潮红或蓝紫。 4.2.3 其它方面症状 重症肺炎引发心力衰竭，出现心率加快，心率不齐，脉搏微弱，可视粘膜明显发绀，颜面眼睑或双 下肢水肿等症状。引发缺氧中毒性脑病时出现烦躁、眼球上窜、凝视，昏睡、昏迷、惊 厥等症状，发生 缺氧中毒性肠麻痹时出现频繁呕吐、严重腹胀等症状。 4.3 影像学
9、特征 胸部 X线检查显示肺纹理增粗，片状、斑片状、大片状阴影和实变影，可伴有支气管充气征、液气 囊腔和肋膈角胸腔积液。 4.4 外周血检查特征 采集犬前肢头静脉（前臂头静脉）或后肢隐静脉或颈静脉血液样本 1.0ml，采用血液分析仪或人工 计数方法进行外周血白细胞计数和分类计数。应用血细胞分析仪计数方法按其说明书处理血液样本，进 样检测，仪器自动分析、打印结果。人工计数方法取 1滴外周血，滴于洁净无油脂的玻片制取血涂片， 应用瑞氏（ Wrights） 染色法和姬姆 萨 （ Giemsa）染色法进行染色，通过显微镜观察染色血涂片，计算 血液中各类白细胞的数量和百分率。 细菌性肺炎白细胞计数明显升高
10、，其中中性粒细胞比例显著升高，并有核左移现象。 4.5 病原学检测 4.5.1 细菌分离培养和涂片镜检 无菌操作采取气管吸取物、肺泡灌洗液、胸水、脓液和血液，于血液肉汤培养基中 37 增菌 10h后 再划线接种于血液琼脂平板和 胰蛋白胨大豆琼脂平板 培养基， 37 培养 18 24h后观察有无菌落生长； 挑取单个菌落进行染色、镜检，观察细菌的形态。 4.5.2 生化试验 DB21/T 3095 2018 3 挑取单个分离菌接种于细菌微量发酵管中， 37 培养 18 24h，观察、记录生化反应结果。 4.5.3 致病性检验 将分离菌的纯培养物接种于脑心浸液中 37 培养 18 24h，并计算活菌
11、数。选取 5只健康小鼠，每只 腹腔注射菌液 0.25ml(2.1108 CFU/ml)菌液；另取 5只体重相近的健康小鼠，每只腹腔注射等量灭菌脑 心浸液。小鼠攻毒后连续 7天观察临床表现及死亡情况。取发病死亡小鼠的肺、肝接种血液琼脂平板等 培养基，均生长出与原分离菌相同的菌。 病原学检测有关试验使用蒸馏水按国家标准 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法要求准备。 4.5.4 分子生物学鉴定 4.5.4.1 应用 16SrRNA 基因序列分析法鉴定细菌，首先合成用于扩增细菌 16SrRNA 基因序列的通用引 物： 27f: 5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3； 1492r:
12、 5- TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3。目的基因 1492bp 4.5.4.2 按照通用型柱式基因组提取试剂盒说明书提取待检病料所分离培养的细菌基因组 DNA，然后 在 PCR 反应管中按相应反应体系加入提取的 DNA（ 3L）、上下游引物（各 1L）、 Taq Mix（ 15L）、 ddH2O（ 10L）等试剂； 4.5.4.3 应用 PCR 扩增仪按相应反应条件进行扩增。 PCR 反应条件： 94 预变 5min； 94 变性 30s， 55 退火 30s； 72 延伸 30s， 35 个循环； 72 延伸 10min； 4 终止反应。 对 PCR 扩增产物进行 1.0%
13、 琼脂糖凝胶电泳检测 ，得到目的片段后，按照琼脂糖凝胶胶回收试剂盒（ OMEGA）的说明及步骤 对 PCR 扩增产物进行回收和纯化，回收产物作为测序模板进行测序，测序要求测通。 4.5.4.4 对所测出的基因序列进行同源性比对分析，即登陆 NCBI 网站（ http:/www.ncbi.nlm.nih.gov） 的 Blastn 在线软件，粘贴测序所得的 16S rRNA 基因序列，获取与该基因同源高的序列和相应的细菌名 称，若同源性大于 97%，可以确定为同种细菌。 16SrRNA基因序列分析法鉴定细菌 PCR扩增产物电泳参考图： 图 1 鉴定菌株 16SrRNA PCR 电泳图 注： M
14、DL2000 DNAMarker; 1.阳性对照； 2-6.阳性扩增产物； N.阴性对照 细菌性肺炎主要致病菌分离培养和形态特征、生化鉴定以及分子生物学鉴定具体方法和结果判定依 据见附录 1 5 诊断结果判定 DB21/T 3095 2018 4 5.1 初步诊断 根据流行病学特征和典型临床症状，结合外周血 、 X线影像学特征，可作出初步诊断。 5.2 确诊 依据病原学检测结果，确定是何种细菌感染，做出确诊。 6 鉴别诊断 需要与细菌性肺炎进行鉴别的重点疾病包括上呼吸道感染、犬副流感病毒感染、肺炎支原体肺炎、 肺炎衣原体肺炎、军团菌性肺炎、真菌性肺炎、病毒性肺炎、肺结核。其它需要鉴别的疾病还包
15、括肺部 肿瘤、肺水肿、肺气肿、理化因素所致非感染性肺炎等。 需要与细菌性肺炎鉴别的重点疾病的具体鉴别诊断要点见附录 2 A DB21/T 3095 2018 5 附 录 A （资料性附录） 细菌性肺炎主要致病菌分离鉴定具体方法和结果判定依据 一、链球 菌的分离鉴定 1.细菌学鉴定 1.1细菌的分离培养 无菌操作采取气管吸取物、肺泡灌洗液、胸水、脓液和血液，于血液肉汤培养基中 37 增菌 10h后 再划线接种于血液琼脂平板和脑心浸出液培养基， 37 培养 18 24h后观察。在血液琼脂平板上应生长 出湿润无色透明边缘整齐的光滑型菌落。菌落周围有明显的 -溶血环，直径约 5.0mm；在脑心浸出液培
16、 养基上为灰白色光滑菌落。 1.2细菌形态观察 挑取血琼脂平板中的单个菌落涂片、革兰氏染色、镜检，观察细菌的形态，结果应为革兰阳性链球 菌。 链球菌分离培养和涂片镜检参考图片： 图 A.1 分离菌在脑心浸出液培养 图 A.2 分离菌在血琼脂培养基上生长状态 图 A.3 镜检下分离菌形态结构 DB21/T 3095 2018 6 1.3生化试验 分离菌经 24h鲜血琼脂平板纯培养后，进行糖发酵试验和其他生化试验，结果应如表 A.1中所列。 表 A.1 链球菌的生化反应结果 项目 结果 项目 结果 项目 结果 V-P试验 - 山梨醇 + 甜醇 - 6.5%NaCl - 阿拉伯糖 - 半乳糖 + 淀
17、粉酶试验 + 果糖 + 棉籽糖 - 葡萄糖 + 肌醇 - 菊糖 - 蔗糖 + 木糖 - 水杨素 + 卫矛醇 - 麦芽糖 + 海藻糖 + 鼠李糖 - 乳糖 + 柳醇 + 2.分子生物学鉴定 2.1 应用 16SrRNA基因序列分析法鉴定细菌，首先合成用于扩增细菌 16SrRNA基因序列的通用引 物： 27f: 5-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3； 1492r: 5- TACGGYTACCTTGTTACGACTT-3。 目的基因 1492bp 2.2 按照通用型柱式基因组提取试剂盒说明书提取待检病料所分离培养的细菌基因组 DNA，然后在 PCR反应管中按相应反应体系加入提取的 DNA
18、（ 3L）、上下游引物（各 1L）、 Taq Mix（ 15L）、 ddH2O （ 10L）等试剂； 2.3 应用 PCR扩增仪按相应反应条件进行扩增。 PCR反应条件： 94 预变 5min； 94 变性 30s， 55 退火 30s； 72 延伸 30s， 35个循环； 72 延伸 10min； 4 终止反应。 对 PCR扩增产物进行 1.0%琼脂糖凝 胶电泳检测 ，得到目的片段后，按照琼脂糖凝胶胶回收试剂盒（ OMEGA）的说明及步骤对 PCR扩 增产物进行回收和纯化，回收产物作为测序模板进行测序，测序要求测通。 2.4 对所测出的基因序列进行同源性比对分析，即登陆 NCBI网站（ ht
19、tp:/www.ncbi.nlm.nih.gov）的 Blastn在线软件，粘贴测序所得的 16S rRNA基因序列，获取与该基因同源高的序列和相应的细菌名称， 若同源性大于 97%，可以确定为链球菌同种细菌。 16SrRNA基因序列分析法鉴定链球菌 PCR扩增产物电泳参考图： 图 A.4 鉴定菌株 16SrRNA PCR 电泳图 注： M DL2000 DNAMarker; 1.阳性对照； 2-6.阳性扩增产物； N.阴性对照 3.致病性检验 DB21/T 3095 2018 7 取 10只小鼠随机分为 2组，即试验组和对照组，每组 5只。无菌吸取上述经生化鉴定的分离菌的血清 肉汤纯培养物腹
20、腔注射实验组小白鼠， 每只注射 0.2 ml（ 4108 CFU/ml）对照组每只小白鼠腹腔注射 0.2 ml无菌肉汤。注射后小鼠隔离饲养，观察发病及死亡情况，并对死亡小鼠的心血、脑、肝脏、脾脏进 行细菌分离鉴定。观察到试验组小鼠注射 24h后应表现出不同程度的精神萎靡，毛皮粗糙竖起，呼吸急 促、采食减少等现象；对照组小鼠无此现象。试验组小鼠 72h后全部死亡。将死亡小鼠剖检，将脏器分 离培养，应得到细菌的培养特性、细菌形态、生化特 性应均与接种细菌一致，表明分离菌为致病性链球 菌。 二、葡萄球菌的分离鉴定 1.细菌学鉴定 1.1形态学检查 无菌 操作采取气管吸取物、肺泡灌洗液、胸水、脓液和血
21、液直接涂片，经革兰氏染色后镜检。可见 G+球菌，圆形或卵圆形，直径约 1m，呈 葡萄串状排列，无鞭毛、无芽孢、无荚膜。 葡萄球菌涂片镜检参考图如下： 图 A.5 葡萄球菌革兰氏染色后镜检形态 1.2分离培养 将上述病料于血液肉汤培养基中 37 增菌 10h后，再接种于鲜血琼脂平板， 37 培养 1824h后观察， 并挑取可疑菌落，涂片镜检。该菌在鲜血琼脂平板上形成圆形、突起、边缘整齐、表面光滑的白色菌落， 未见有色素沉着，菌落周围有明显的 -溶血环。菌落形态与链球菌类似。 1.3鉴 别培养 将镜检后的可疑菌落接种于高甘露醇琼脂平板 37 培养 2448h培养观察结果。在高甘露醇琼脂平板 上形成
22、 1mm左右 、凸起、黄色菌落，有金黄色色素产生，菌落周围的培养基由红色变成黄色。 1.4纯培养 挑取可疑菌落转种于普通营养琼脂平板， 37 培养 1824h。 1.5生化试验 将纯培养菌分别接种于 H2S反应管和葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、果糖、木糖、阿拉伯糖、甘露 醇、尿素等微量发酵管中， 37 培养 24 48h后观察结果。该菌能分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、甘露醇、 蔗糖、果糖、木糖、阿拉伯糖，不产生 H2S，不分 解尿素。 2.分子生物学鉴定 DB21/T 3095 2018 8 应用 16SrRNA基因序列分析法鉴定细菌的通用引物、方法条件同链球菌； PCR产物测序与 DNA序 列分析
23、 将所得到的序列与 GenBank中 FJ899095.1金黄色葡萄球菌株 16S rRNA序列进行对比，同源性达 到 96%以上即可以确定。 金黄色葡萄球菌 PCR扩增产物电泳目的条带参考图如下： 图 A.6 金黄色葡萄球菌 16SrRNA 序列基因 PCR 检测图 注： M DM2000; 1、 3阳性 样本 ； 2.阳性 对照（ CQHC4CSA002） ； 4.阴性对照 3.致病性检验 3.1血浆凝固酶试验 无菌采取 健康家兔的血液，肝素抗凝，离心后去血细胞，取上层血浆备用。将新鲜兔血浆用灭菌生 理盐水作 1:4稀释，分装于小试管中，每管 0.5ml；取 12h分离菌株肉汤培养液 0.
24、5ml，接种于含有 0.5ml 血 浆的试管中， 37 培养，每 0.5h观察 1次，观察 6h判定结果；同时用已知的血浆凝固酶阳性和阴性的 葡萄球菌及肉汤培养基作对照。已知的阳性菌株和待检菌株均使血浆呈胶冻状凝固，而阴性菌株和肉汤 培养基均无上述变化，则结果可判为阳性。 3.2.致病性试验 取清洁级小鼠 5 只，分离菌株 24h肉汤培养液（ 1.5108 CFU/ml）；经不同途径接种： 1 只小鼠皮 下注射菌液 1.0ml； 1只小鼠腹腔注射菌液 1.0ml； 2只小鼠分别从静脉注射菌液 0.5ml； 1只小鼠由静脉 注射灭菌生理盐水 1ml作为空白对照。分别隔离观察，皮下注射菌液小鼠 2
25、4h后注射部位皮肤应发生溃 疡性坏死；腹腔接种菌液的小鼠 48h后接种部位应局部出现化脓灶；静脉接种菌液的 2只小鼠，均应在 24 48h死亡。病鼠剖检后，应可见肝脏、肾脏等脏器肿大，脑组织软化、空虚，与自然病变相似，取病灶 部的病料培养后均分离到接种菌；对照的小鼠应健康存活，剖检后其器官组织未见上述病 变。发病或死 亡者再进行病原菌分离鉴定。 三、支气管败血波氏杆菌的分离鉴定 1.细菌学鉴定 1.1细菌的分离培养 无菌操作采取气管吸取物、肺泡灌洗液、胸水、脓液和血液，于血液肉汤培养基中 37增菌 10h后 再划线接种于胰蛋白胨大豆琼脂平 板， 37 培养 18 24h后观察。 在胰蛋白胨大豆
26、琼脂平板上生长出圆 形、光滑、米黄色的小菌落。挑取单个菌落进行染色、镜检，观察细菌的形态。结果为革兰氏阴性中等 大小杆菌，多呈单个存在。 1.2生化试验 DB21/T 3095 2018 9 挑取单个分离菌接种于细菌微量发酵管中， 37 培养 1824h，观察、记录 生化反应结果。该菌分解 氨基酸，不分解糖类，不产硫化氢，枸橼酸盐、脲酶、氧化酶试验为阳性， ONPG、 VP、吲哚试验为阴 性。 2.分子生物学鉴定 应用 16SrRNA基因序列分析法鉴定细菌的通用引物、方法条件同链球菌； PCR产物测序与 DNA序 列分析 纯化、回收 PCR产物，送交测序公司测序，利用 NCBI的 BLAST工
27、具对分离菌的 16S rRNA的基 因序列进行同源性比对。结果显示该菌株与序列 (GenBank序列号： AP014582.1)同源性为 96%以上，则 可确定分离菌株为支气管败血波氏杆菌。 3.致病性检验 将分离菌的纯培养物接种于脑心浸液中 37 培养 1824h，并计算活菌数。选取 5只健康小鼠，每只 腹腔注射菌液 0.25ml（ 2.1108 CFU/ml）菌液；另取 5只体重相近的健康小鼠，每只腹腔注射等量灭菌 脑心浸液。小鼠攻毒后连续 7天观察临床表现及死亡情况。试验小鼠于接种菌液后出现精神萎靡，食欲、 饮欲废绝，被毛杂乱等临床症状，在 48h内全部死亡。对照组小鼠在观察期内，全部健
28、康存活。死亡小 鼠眼观主要病变为肺脏、肝脏和肠等出血、坏死。取死亡小鼠的肺、肝接种胰蛋白胨大豆琼脂平板，均 生长出与原分离菌相同的菌。 DB21/T 3095 2018 10 B B 附 录 B （资料性附录） 犬细菌性肺炎的鉴别诊断 一、犬细菌性肺炎应与如下重点疾病进行鉴别诊断 1. 上呼吸道感染 环境温度不稳定是本病的主要原因，不同年龄犬均可发生，幼犬发病率相对较高。患犬多表现为轻 度咳嗽，少数病例出现干呕或吐出未消化的食物。体温正常，肺部听诊无明显变化。气管听诊，声音粗 粝。临床触诊喉部和气管敏感，人工诱咳后持续咳嗽，甚至继发干呕；血常规检查无明显变化，少数病 例白细胞水平轻度升高； 血
29、清 C反应蛋白（ CRP）轻度升高； X线检查可见气管内影像增强，肺部影像 无明显变化。 2.犬副流感病毒感染 本病是由副粘病毒科，副粘病毒属的犬副流感病毒（ Canine Parainfluenza Virus, CPIV）引起的犬呼 吸道性传染病，可以侵害任何年龄的犬。此病的病程为一周以上，少数病例可长达数月之久。大多数犬 可随着机体抵抗力的提高而逐渐康复，少数犬会因为治疗不及时继发支气管肺炎。患犬表现为干咳，咳 嗽随着运动增加和气管、喉部诱咳或食物以及寒风的刺激而加剧；精神、食欲等均正常；一般不发热； 肺部听诊和血常规检查无明显变化；血清 C反应蛋白（ CRP）水平轻度升高； X线检查可
30、见气管内影像 增强，肺部影像无明显变化。 通过病原分离鉴定和分子生物学检测病毒核酸可区分其它病原。 3.犬支原体肺炎 本病由支原体 （ Mycoplasma） 引起，潜伏期较长。患犬体况良好时，不表现明显的临床症状。发 病初期，临床症状与犬上呼吸道感染相似。该病起病较慢，少数病例伴有发热、无力等症状。血常规检 查一般无明显变化，个别病例出现白细胞数轻度升高，中性粒细胞比率升高。长期的咳嗽是本病的主要 临床特征，尤以凌晨时咳嗽最为重剧，经治疗后，咳嗽还可持续 1-2周； X线检查可见气管内影像增强 。 应用支原体胶体金抗体检测卡检测患犬血液中支原体抗体可作为重要诊断依据。通过通过病原分离 鉴定和
31、分子生物学检测方法可区分其它病原。 4.犬衣原体肺炎 本病由衣原体（ Chlamydia）引起，潜伏期较长。患犬体况良好时，不表现明显的临床症状。发病 初期，临床症状与犬上呼吸道感染、犬支原体肺炎相似。即起病较慢，少数病例伴有发热、无力等症状。 血常规检查一般无明显变化，个别病例出现白细胞数轻度升高，中性粒细胞比率升高。长期的咳嗽，尤 以凌晨时咳嗽最为重剧。经治疗后，咳嗽还可持续 1-2周。 X线检查可见气管内影像增强。 应 用支原体胶体金抗体检测卡检测患犬血液中支原体抗体可作为重要诊断依据。通过通过病原分离 鉴定和分子生物学检测方法可区分其它病原。 5.犬霉菌性肺炎 犬霉菌性肺炎是由霉菌和霉
32、菌孢子引起的一种慢性炎症，本病与饲养环境和季节密切相关。临床上 常见的致病菌有曲霉菌、组织胞浆菌、隐球菌、芽生菌和诺卡氏菌等。本病具有支气管肺炎的症状，但 呈亚急性及慢性经过。患犬呼吸困难，渐进性消瘦，并伴有角膜浑浊或溃疡。患犬从鼻孔流出污秽的鼻 液，显微镜检查可见霉菌的菌丝。 死亡患犬剖检可见肺脏上有大小不一的结节，结节周围有结缔组织 膜包裹，内容 物镜检可见霉菌菌丝。 6.犬瘟热 DB21/T 3095 2018 11 犬瘟热是由 犬瘟热病毒 （ Canine distemper virus）引起的一种高度接触性传染病，传染性强，死亡 率可高达 80%以上。犬瘟热症状初期狗的体温高达 39
33、.5 41 ，食欲不振，精神沉郁，眼鼻流 出水样分 泌物， 打喷嚏 ，有腹泻。在以后 2 14天内再次出现体温升高，咳嗽，有 脓性鼻涕 。同时继发 胃肠道疾 病 ，呕吐、拉稀，食欲废绝。精神高度沉郁，嗜睡。犬瘟热发病后期就会出现典型的神经症状，口吐白 沫，抽搐 。 应用支原体胶体金抗体检测卡检测患犬血液中支原体抗体可作为重要诊断依据。通过通过病原分离 鉴定和分子生物学检测方法可区分其它病原。 7.犬结核性肺炎 犬的结核病（ tuberculosis）主要由分枝杆菌属（ Mycobacterium）的人型结核分枝杆菌、牛型结核 分枝杆菌感染发病，极少数被禽型分枝杆菌 感染 。本病属于一种 慢性消
34、耗性疾病 ， 潜伏期 长短不一，与 犬的年龄、休质、营养和管理情况有关。患犬一般慢性感染，在相当一段时间内不表现症状，以后出现 食欲不振、容易疲劳、虚弱、 进行性消瘦 ，精神不振等。肺结核表现咳嗽（干咳），后期转为湿咳，并 有黏液脓性的痰，伴有低热、消瘦、贫血等症状出现。病变部听诊有支气管肺泡呼吸音和湿罗音；结核 病蔓延到心包和胸膜时，呼吸困难，发绀和右心衰竭；伴发腹部型结核时，腹部触压可触到腹腔脏器有 大小不同的肿块， 肠系膜淋巴结肿大 ；表现呕吐、腹泻，皮肤结核多发于喉头和颈部，病灶边缘呈不规 则的肉芽组织溃疡。 骨结核 可表现运动障碍、跛行，并易出现骨折。 肺部结核通过放射线透视或照相检查，可见 有钙化病灶或空洞影。 可用结核菌素进行皮内试验，在皮内注射结核菌素 250单位，观察皮肤肿块是否在判定标准以上。 用鼻腔分泌物、痰液、乳汁、及其他病灶进行涂片，抗酸染色后进行镜检，可以直接看到结核杆菌。 二、犬细菌性肺炎与其他肺部疾病的鉴别诊断 临床上许多肺部疾病，如肺肿瘤、肺水肿、肺气肿和理化因素所致的非感染性肺炎，在发病初期同 样具有细菌性肺炎的临床症状。但此类疾病均具有特定的致病原因。通过流行病学调查及影像学、病理 学诊断方法可以鉴别诊断。 _
