1、ICS 65.020.01 B 61 DB35 福建省地方标准 DB35/T 18882020 绣球菌菌种生产技术规程 Technical rules of sparassis latifolia pure culture production 2020 - 02 - 20 发布 2020 - 05 - 20 实施 福建省市场监督管理局 发布 DB35/T 18882020 I 目 次 前言 . . II 1 范围 . 1 2 规范性引 用文件 . 1 3 术语和定义 . . 1 4 要求 . 2 5 生产技术 . . 2 6 质量要求 . . 3 7 检验方法 . . 5 8 标签、标 志、
2、包装、运输和贮存 . 6 附录 A（资料性附录） 绣球菌母种培养基配方 . 8 附录 B（资料性附录） 绣球菌原种培养基配方 . 9 DB35/T 18882020 II 前 言 本标准按照GB/T 1.12009给出的规则起草。 本标准由福建省农业科学院提出。 本标准由福建省农业农村厅归口。 本标准起草单位：福建省农业科学院食用菌研究所、福建天益菌业有限公司、福建容益菌业科技研 发有限公司、福清市火麒麟食用菌技术开发有限公司。 本标准主要起草人：林衍铨、马璐、应正河、肖冬来、张迪、杨驰、江晓凌、林智、吴先孟、王国强。 DB35/T 18882020 1 绣球菌菌种生产技术规程 1 范围 本标
3、准规定了绣球菌（ Sparassis latifolia）菌种生产的要求、生产技术、质量要求、检验方法、 标签、标志、包装、运输和贮存。 本标准适用于绣球菌菌种的生产。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 1912008 包装储运图示标志 GB/T 6711998 化学试剂 硫酸镁 GB/T 12742011 化学试剂 磷酸二氢钾 GB 1886.2392016 食品安全国家标准 食品添加剂 琼脂 GB 57492006 生活饮用水卫生标准
4、GB/T 104632008 玉米粉 GB/T 127282006 食用菌术语 GB/T 208802018 食用葡萄糖 NY/T 5282010 食用菌菌种生产技术规程 NY/T 1846 2010 食用菌菌种检验规程 食用菌菌种管理办法（2015年修正版） 3 术语和定义 GB/T 127282006界定的以及下列术语和定义适用于本文件。为了便于使用，以下重复列出了GB/T 127282006中的一些术语和定义。 3.1 母种 stock culture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，也称一级种、试管种。 GB/T 127282006，定义2.5.7 3.2
5、 种源母种 provenan ce culture 从具备相应技术资质的供种单位购买的试管母种。 3.3 生产母种 cultivate culture 从试管母种转接得到的菌种。 DB35/T 18882020 2 3.4 原种 mother spawn 由母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物，也称二级种。 GB/T 127282006，定义2.5.8 3.5 锁状联合 clamp connection 一种锁状桥接的菌丝结构，是异宗结合担子菌次生菌丝的特征。 GB/T 127282006，定义2.2.5 4 要求 4.1 生产条件要求 人员要求、生产场地环境、厂房设置和布局、设备设施应符合
6、食用菌菌种管理办法和NY/T 528 2010的规定。 4.2 种源要求 从选育单位或具备相应技术资质的供种单位引种。 4.3 原料要求 4.3.1 母种 马铃薯新鲜、无发芽、无病斑、无霉烂。鱼粉蛋白胨干燥、无虫蛀、霉变。选用的葡萄糖应符合 GB/T 208802018的 要求，硫酸镁应符合GB/T 6711998的要求，磷酸二氢钾应符合GB/T 1274201 1 的要求，琼脂应符合GB 1886.2392016的要求。 4.3.2 原种 选用的玉米粉应符合GB/T 104632008的要求。松木屑应新鲜且粗细均匀，不含有害物质，使用前 过筛除去杂质。 4.3.3 容器 各级菌种生产所用容器
7、应符合NY/T 5282010中4.7.1.2的规定。 4.3.4 水 菌种生产过程所用水源应符合GB 57492006的要求。 5 生产技术 5.1 菌种生产工艺流程 5.1.1 母种 配置培养基高压灭菌冷却摆斜面接种培养母种。 DB35/T 18882020 3 5.1.2 原种 原料过筛配置培养基高压灭菌冷却接种培养原种。 5.2 培养基配方 母种宜使用附录A的培养基配方，原种宜使用附录B的培养基配方。 5.3 培养基制作 5.3.1 母种培养基 按配方称取去皮的切块马铃薯，加水煮沸20 min30 min，纱布过滤得到浸提液，加入琼脂后继续 加热至琼脂完全溶解后，加入营养物质，定容至所
8、需体积，分装试管，高压灭菌后，取出试管，摆斜面， 做成斜面培养基。 5.3.2 原种培养基 按配方称取各种原辅材料，加水搅拌均匀，调节含水量至60%65%。装瓶时，培养基装至瓶肩位置， 中间预留接种孔洞，高压灭菌结束后自然降温冷却。 5.4 培养基灭菌效果检查 5.4.1 母种培养基 随机抽取3%5%的试管，置于25 条件下培养，48 h后检查，无微生物长出的为灭菌合格。 5.4.2 原种培养基 根据每批次灭菌数量，随机抽取1%作为样品， 按无菌操作流程，挑取其中的基质颗粒接种于PDA培 养基中（培养基配方参见附录A），置于25 条件下培养，48 h后检查，无微生物长出的为灭菌合格。 5.5
9、接种 按无菌操作流程，1支种源母种扩繁2030支生产母钟，1支生产母种接种1瓶原种。 5.6 培养 5.6.1 母种 接种后置于23 24 条件下，避光培养25 d30 d，定期检查，及时剔除不合格菌种。 5.6.2 原种 接种后置于可控温培养间中，23 24 条件下避光培养，原种培养50 d55 d，培养期间定期 检查，及时剔除不合格菌种。原种培养好后，可直接作为栽培种使用。 6 质量要求 6.1 母种质量要求 6.1.1 感官要求 母种感官要求应符合表1的规定。 DB35/T 18882020 4 表1 母种感官要求 检验项目 要求 容器 完整、无损 棉塞（或硅胶塞） 洁净、干燥、松紧适度
10、，能满足透气和滤菌要求 接种块大小 （35） mm（35） mm 菌丝形态特征 菌丝体白色、较浓密，稍有爬壁现象，气生菌丝长势较旺盛 菌丝体生长量 菌丝已长满斜面或占斜面3/4以上 菌落边缘 整齐 分泌物 无 脱壁 无 菌种外观 杂菌 无 螨、虫 无 气味 有绣球菌特有香味，无酸、臭、霉等异味 6.1.2 显微特征 菌丝呈管状，分支较多，菌丝直径2.10 m4.15 m之间，平均（3.290.54） m，有锁状联合。 6.1.3 菌丝生长速度 参考附录A规定的培养基配方，23 24 条件下，菌丝长满斜面3 /4以上需25 d30 d。 6.2 原种质量要求 6.2.1 感官要求 原种感官要求应
11、符合表2的规定。 表2 原种感官要求 检验项目 要求 容器 完整、无损 棉塞（或硅胶塞） 洁净、干燥、松紧适度，能满足透气和滤菌要求 菌丝形态特征 菌丝体白色、较浓密，有爬壁现象，气生菌丝长势较旺盛 菌丝体生长量 菌丝长满容器 培养基及菌丝体 紧贴瓶（袋）壁，有爬壁，无干缩 表面分泌物 无 菌种外观 杂菌菌落 无 螨、虫 无 气味 有绣球菌特有香味，无酸、臭、霉等异味 6.2.2 菌丝生长速度 参考附录B规定的培养基配方，23 24 条件下，菌丝长满玻璃瓶需50 d55 d。 DB35/T 18882020 5 6.3 菌种质量判定规则 6.3.1 合格菌种 菌丝微观形态、菌种外观、杂菌、螨、
12、虫、菌丝生长速度、气味等项均符合要求的，为合格菌种。 6.3.2 不合格菌种 菌丝微观形态、培养特征、菌种外观、杂菌、螨、虫、菌丝生长速度、气味等任何一项不符合要求 的，为不合格菌种。 7 检验方法 7.1 感官检验 感官要求检验方法按表3逐项进行。 表3 感官要求检验方法 检验项目 检验方法 容器 肉眼观察 棉塞（或硅胶塞） 肉眼观察 菌丝形态特征 显微镜观察 菌丝体生长量 肉眼观察、测量 培养基及菌丝体 肉眼观察 表面分泌物 肉眼观察 菌种外观 杂菌菌落 肉眼观察 螨、虫 肉眼观察，必要时用放大镜或者显微镜观察 气味 鼻嗅 7.2 菌丝体特征 从待检样品中挑取少量菌丝，置于洁净的载玻片上做
13、成水封片，显微镜下观察。 7.3 螨、虫检验 取适量菌丝体用放大镜或显微镜镜检。 7.4 杂菌检验 细菌应按照NY/T 18462010中4.4规定的细菌检验方法进行 检验，霉菌应按照NY/T 18462010中 4.3规定的霉菌检验方法进行检验。 7.5 菌丝生长速度检验 7.5.1 母种 参考附录A规定的培养基配方，23 24 条件下，计算菌丝长满3/4试管所需天数。 DB35/T 18882020 6 7.5.2 原种 参考附录B规定的培养基配方，23 24 条件下，计算菌丝长满玻璃瓶所需天数。 7.6 留样 各级菌种应留样备查，留样数量为每批次35支（瓶），0 4 贮存，贮存至正常生产
14、条件下 该批菌种生产的栽培袋出菇采收完毕。 8 标签、标志、包装、运输和贮存 8.1 标签、标志 8.1.1 产品标签 每支（瓶）菌种应贴有标签，应清晰注明以下信息： a) 产品名称（菌种名称、菌株代号、类别）； b) 生产单位； c) 接种日期； d) 执行标准。 8.1.2 包装标签 菌种包装应贴有标签，应清晰注明以下信息： a) 产品名称（品种名称、菌株代号、类别）； b) 保质期、贮存条件； c) 数量； d) 执行标准； e) 菌种生产经营许可证编号。 8.1.3 包装储运图示 按GB/T 1912008规定，应注明以下图示标志： a) 小心轻放标志； b) 防水、防潮、防冻标志；
15、c) 防晒、防高温标志； d) 防止倒置标志； e) 防止重压标志。 8.2 包装 8.2.1 母种外包装应采用木盒或有足够强度的纸箱，内填棉花、碎纸等缓冲物。 8.2.2 原种外包装应采用有足够强度的纸箱，菌种间用碎布、报纸等具有缓冲作用的轻质材料填满。 纸箱上部和底部用宽胶带封口，箱内附产品合格证书和使用说明（包括菌种种性、培养基配方及适用范 围等）。 8.3 运输 8.3.1 不得与有毒、有害、有异味的物品混装混运。 8.3.2 运输工具应清洁、卫生、无污染物。 DB35/T 18882020 7 8.3.3 菌种运输过程中应采用可控温的冷藏车进行运输。 8.3.4 运输中应有防震、防晒
16、、防尘、防高温、防雨淋、防杂菌污染措施。 8.4 贮存 8.4.1 母种长好后应在 10 d 内使用完。 8.4.2 原种长好后应尽快使用，如需贮存，应保持环境清洁、干燥、通风，温度控制在 21 23 ， 贮存期不超过 15 d。 DB35/T 18882020 8 A A 附 录 A （资料性附录） 绣球菌母种培养基配方 A.1 PDA培养基 去皮马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁2 g，琼脂20 g，水1 000 mL， pH自然。 A.2 PDPA培养基 去皮马铃薯200 g（用浸出汁），葡萄糖20 g，鱼粉蛋白胨3 g，磷酸二氢钾3 g，硫酸镁2 g
17、，琼脂 20 g，水1 000 mL，pH自然。 DB35/T 18882020 9 B B 附 录 B （资料性附录） 绣球菌原种培养基配方 绣球菌原种可采用下列培养基配方之一： a) 松木屑 70%，玉米粉 28%，轻质碳酸钙 2%，含水量 60%65%，pH自然； b) 松木屑78%，面粉10%，玉米粉10%，红糖1%，轻质碳酸钙1%，含水量60%65%，pH 自然； c) 松木屑76%，麸皮18%，玉米粉2%，红糖1.5%，石膏1.5%，过磷酸钙1%，含水量60%65%， pH 自然。 _ DB35/T 18882020 福建省地方标准 绣球菌菌种生产技术规程 DB35/T 18882020 * 2020年2月第 一版 2020年 2月第一次印刷
