1、ICS 65.120 B25 DB37 山东省地方标 准 DB 37/T 34932019 饲料原料玉米代谢能体外评定法 Determination of maizes metabolic energy in vitro method 2019-01-29发布 2019-03-01实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 3493 2019 I 前言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准主要起草单位：山东农业大学。 本标准主要起草人：林海、焦洪超、王晓鹃、赵景鹏、杨景晁。 DB3
2、7/T 3493 2019 1 饲料原料玉米代谢能体外评定法 1范围 本标准规定了通过体外消化酶法和理化评定法进行饲料玉米代谢能评定的方法。 本标准适用于饲料玉米代谢能测定。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 5498 粮油检验 容重测定 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 17890 饲料用玉米 GB/T 20806 饲料中中性洗涤纤维（NDF）的测定 SB/T 10146
3、HGT-1000型谷物容重器 3 体外消化酶法 3.1 原理 通过胃蛋白酶-胰蛋白酶体外消化玉米，根据玉米体外干物质消失率与其代谢能的回归分析，建立 玉米体外干物质消失率与代谢能的数学模型，将测得的玉米体外干物质消失率代入构建的数学模型，计 算获得玉米的代谢能。 3.2 试剂或材料 本标准所用试剂，未注明要求时，均使用分析纯试剂。 3.2.1 水符合 GB/T 6682 三级水的规定。 3.2.2 胃蛋白酶：250 u/mg 。 3.2.3 胰蛋白酶：600 u/mg 。 3.2.4 0.01 mol/L 盐酸溶液：pH 2.0，0.31 mL 盐酸，注入 1000 mL 水中。 3.2.5
4、0.1 mol/L 磷酸缓冲溶液：pH 7.6，31.26 g Na 2 HPO 4 12H 2 O 和 2.03g NaH 2 PO 4 2H 2 O 分别溶解、混 合，溶解于 1000 mL 水中。 3.2.6 1.0 mol/L 氢氧化钠溶液：4 g NaOH，溶解于 100 mL 水中。 3.2.7 1.0 mg/mL 胃蛋白酶溶液： 0.1 g 胃蛋白酶 （3.2.2） ， 溶解于 100 mL 0.01 mol/L 盐酸溶液 （3.2.4） 中。 3.2.8 2.5 mg/mL 胰蛋白酶溶液：0.25 g 胰蛋白酶（3.2.3），溶解于 100 mL 0.1 mol/L 磷酸缓冲溶
5、 液（3.2.5）中，使用前半小时配制。 DB37/T 3493 2019 2 3.2.9 透析袋：截留分子量 12000 D14000 D ，使用前以水煮沸 10 min ，清洗干净，于 4 水中 浸泡存放，90 天内可用。 3.3 仪器设备 3.3.1 高速粉碎机：转速24000 rpm 。 3.3.2 鼓风干燥箱：RT+10 200 ，精度0.5 。 3.3.3 分析天平：0.0001 g 。 3.3.4 水浴恒温振荡器：RT+5 100 ，精度0.5 。 3.4 采样 按GB/T 14699.1的规定进行采样。 3.5 测定步骤 3.5.1 玉米样品使用高速粉碎机（3.3.1）进行粉碎
6、，至全部过 0.25 mm 筛。 3.5.2 粉碎后玉米样品于鼓风干燥箱（3.3.2）中，105 2 烘至恒重。 3.5.3 准确称取烘干后玉米样品 1.0 g ，置于 50mL 三角瓶中，准确加入 1.0 mg/mL 胃蛋白酶溶液 （3.2.7）10 mL ，加盖密封，置于水浴恒温振荡器（3.3.4）中，37 、振幅 180 r/min 连续消化 4 小时。 3.5.4 在消化液中加入 1.0 mol/L NaOH 溶液（3.2.6）0.1 ml0.5 ml 中和，然后加入 2.5 mg/mL 胰 蛋白酶溶液（3.2.8）10 mL ，混合均匀后转移到透析袋（3.2.9）中，封口，放入盛有
7、300 mL 磷酸缓 冲液（3.2.5）的烧杯中，置于水浴恒温振荡器（3.3.4）中，37 、振幅 180 r/min 连续消化 20 小 时。 3.5.5 取出透析袋，用水反复冲洗透析袋内消化残渣 6 次以上，并将残渣全部转移至滤纸中，105 2 烘至恒重，测定残渣的质量。 3.5.6 根据下述公式计算玉米的体外干物质消失率： 0 10 M MM DMD .(1) 式中： DMD待测玉米样品干物质消失率； M 0 待测玉米样品体外消化前的质量，g ； M 1 待测玉米样品体外消化后的质量，g 。 3.6 结果计算 将待测玉米样品的体外干物质消失率（DMD）代入以下数学模型，计算得到玉米表观代
8、谢能： .(2) 式中： AME待测玉米样品的表观代谢能，KJ/kg ； DMD待测玉米样品干物质消失率。 4 数学模型套算法 4.1 原理 DB37/T 3493 2019 3 通过测定若干玉米样品中性洗涤纤维含量、 容重体积和实测代谢能值， 并将测定结果进行回归分析， 建立玉米中性洗涤纤维、容重体积与玉米代谢能的数学模型，将测得的玉米中性洗涤纤维含量和容重体 积代入构建的数学模型，计算获得玉米的代谢能。 4.2 仪器设备 4.2.1 鼓风干燥箱：RT+10 200 ，精度0.5 。 4.2.2 谷物容重器：符合 LS/T 3701 要求。 4.2.3 高速粉碎机：转速24000 rpm 。
9、 4.3 采样 按GB/T 14699.1的规定进行采样。 4.4 测定步骤 4.4.1 玉米样品于 65 下烘至恒重（4.2.1），回潮。 4.4.2 按 GB/T 20806 方法，测定玉米样品的中性洗涤纤维含量。 4.4.3 按 GB/T 5498 方法，测定玉米样品的容重。 4.4.4 将玉米样品粉碎，全部过 0.85 mm 筛，按 GB/T 5498 方法测定玉米样品粉碎后容重。 4.4.5 根据下述公式计算玉米样品的容重体积： . (3) 式中： V待测玉米样品容重体积； VW 1 待测玉米样品容重，g/L ； VW 2 待测玉米样品粉碎后容重，g/L 。 4.5 结果计算 将待测玉米样品的中性洗涤纤维含量和容重体积代入下述数学模型，计算得到玉米表观代谢能。 . (4) 式中： AME待测玉米样品的表观代谢能，KJ/kg ； NDF待测玉米样品中性洗涤纤维含量，% ； V待测玉米样品容重体积。 _
