1、ICS 67.050 X 04 DB37 山东省 地 方 标 准 DB37/T 3991 2020 食品中溴氰虫酰胺残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 Determination of cyantraniliprole residue in foods Liquid chromatography-tandem mass spectrometry 2020 - 06 - 08 发布 2020 - 07 - 08 实施 山东省市场监督管理局 发布 DB37/T 3991 2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1 2009给出的规则起草。 本标准由青岛海关提出、归口并组织实施。 本标
2、准起草单位：青岛海关技术中心、黄岛海关。 本标准主要起草人：崔淑华、郭庆龙、张谦、刘宏玉、张雪琰、刘成帅、崔伟佳、李洲、辛文。 DB37/T 3991 2020 1 食品中溴氰虫酰 胺残留量的测定 液相色谱 -质谱 /质谱法 1 范围 本标准规定了食品中溴氰虫酰胺残留量的液相色谱 -质谱 /质谱检测方法。 本标准适用于大米、玉米、甘蓝、番茄、洋葱、干辣椒、苹果、猪肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋中溴氰虫 酰胺残留量的测定，其它食品可参照执行。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单
3、）适用于本文件。 GB 2763 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格 和试验方法 3 原理 试样经乙腈提取，分散固相萃取净化（油脂含量高的样品须先用乙腈饱和正己烷去脂和冷冻去脂） 后，用液相色谱 -质谱 /质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T 6682中规定的一级水。 4.1 试剂 4.1.1 乙腈（ CH3CN， 75-05-8）：色谱纯。 4.1.2 甲醇（ CH3OH， 67-56-1）：色谱纯。 4.1.3 正己烷（ C6H14， 110-54-3）：色谱纯。 4.1.4 乙酸铵（
4、C2H7NO2， 631-61-8）：色谱纯。 4.1.5 氯化钠（ NaCl， 7647-14-5）：用前在 450 灼烧 4 h， 冷却后密封备用。 4.1.6 无水硫酸镁（ MgSO4， 7487-88-9）：用前在 650 灼烧 4 h，贮藏干燥器中，冷却后备用。 4.2 溶液配制 4.2.1 乙腈饱和正己烷溶液：取适量乙腈加入正己烷中，剧烈振摇，静置至出现明显分层，弃去乙腈 层备用。 4.2.2 乙酸铵溶液（ 5 mmol/L）：称取 0.385 g 乙酸铵用水溶解并定容至 1 L。 4.3 标准品 溴氰虫酰胺（ Cyantraniliprole， C19H14BrClN6O2， C
5、AS号： 736994-63-1），纯度 98.0 %。 DB37/T 3991 2020 2 4.4 标准溶液配制 4.4.1 标准储备溶液 准确称取适量的标准品（精确至 0.1 mg），用乙腈溶解，配制成浓度为 1 000 g/mL的标准储备溶 液，该储备溶液 -18 保存，保存期为一年。 4.4.2 标准中间溶液 准确吸取适量标准储备溶液，用甲醇配制成浓度为 10 g/mL的标准中间溶液，该溶液 4保存，保 存期为一个月。 4.4.3 基质标准工作溶液 根据需要准确吸取适量标准中间溶液，用样品空白基质溶液配制成 0.002、 0.005、 0.01、 0.02、 0.05、 0.1 mg
6、/L的系列标准工作溶液。该溶液应现用现配。 4.5 材料 4.5.1 N-丙基乙二胺（ Primary secondary amine， PSA）：粒度 40 60 m。 4.5.2 十八烷基硅烷键合相（ C18）：粒度 40 60 m。 4.5.3 有机滤膜： 0.22 m。 5 仪器和设备 5.1 液相色谱 -三重四级杆质谱仪：配备电喷雾离子源（ ESI）。 5.2 高速组织捣碎机。 5.3 高速粉碎机。 5.4 匀浆机。 5.5 天平：感量 0.01 mg 和 0.01 g。 5.6 振荡器。 5.7 超声波仪。 5.8 离心机，转速不低于 8 000 r/min。 5.9 涡旋混合器。
7、 5.10 具塞离心管： 50 mL， 10 mL。 6 试样制备与保存 6.1 大米、玉米、干辣椒 取 500 g代表性样品，用高速粉碎机处理至粉状，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封 并做好标识。于 -18 以下保存。 6.2 甘蓝、番茄、洋葱、苹果 取 500 g代表性样品，用匀浆机制成匀浆，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封并做好 标识。于 -18 以下保存。 6.3 猪肉、鸡肝 DB37/T 3991 2020 3 取 500 g代表性样品，用高速组织捣碎机制成糊状，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密 封并做好标识。于 -18 以下保存。 6.4 牛奶、鸡蛋 取
8、 500 g代表性样品，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器作为试样，密封并做好标识。于 -18 以下保存。 7 分析步骤 7.1 提取 7.1.1 大米、玉米 称取 4 g试样（精确至 0.01 g）于 50 mL具塞离心管中 ，加 5 mL水混匀，放置 30 min。准确加入 20.0 mL乙腈振荡提取 20 min，超声提取 5 min后加入 3 g无水硫酸镁和 2 g氯化钠，涡旋振荡 1 min， 8 000 r/min 离心 5 min后，待净化。 7.1.2 甘蓝、番茄、洋葱 称取 10 g试样（精确至 0.01 g）于 50 mL具塞离心管中。准确加入 20.0 mL乙腈振荡提
9、取 20 min，超 声提取 5 min后加入 3 g无水硫酸镁和 2 g氯化钠，涡旋振荡 1 min， 8 000 r/min离心 5 min后，待净化。 7.1.3 干辣椒 称取 4 g试样（精确至 0.01g）于 50 mL具塞离心管中，加 15 mL水混匀，放置 30 min。准确加入 20.0 mL乙腈振荡提取 20 min，超声提取 5 min后加入 3 g无水硫酸镁和 2 g氯化钠，涡旋振荡 1 min， 8 000 r/min 离心 5 min后，待净化。 7.1.4 猪肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋 称取 4 g试样（精确至 0.01g）于 50 mL具塞离心管中，加 5 mL水混匀（
10、检测牛奶时，不需加水）， 放置 30 min。准确加入 20.0 mL乙腈振荡提取 20 min，超声提取 5 min后加入 3 g无水硫酸镁和 2 g氯化钠， 涡旋振荡 1 min， 8 000 r/min离心 5 min后，待净化。将 10 mL上清液转移至 50 mL具塞离心管中，加入 10 mL乙腈饱和正己烷，涡旋振荡 2 min，静置分层，弃去正己烷层，再加入 10 mL乙腈饱和正己烷重复 操作一次，然后将离心管置于 -18 冷冻 30 min，迅速取出 2 mL提取液，待净化。 7.2 净化 称取 0.15 g无水硫酸镁， 0.10 g PSA和 0.10 g C18置于 10 m
11、L离心管，将 2 mL上述提取液至此离心 管中，涡旋 1 min， 5 000 r/min离心 5 min。取上清液过 0.22 m有机微孔滤膜后， 供液相色谱 -质谱 / 质谱测定。 7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件 条件如下： a) 色谱柱： C18柱，柱长 150 mm，内径 2.1 mm，粒径 3 m，或等效柱； b) 流速： 0.25 mL/min； DB37/T 3991 2020 4 c) 进样量： 5 L； d) 柱温： 30 ； e) 流动相及梯度洗脱条件见表 1。 表 1 流动相及梯度洗脱条件 时间 min 甲醇 % 乙酸铵溶液 % 0 25 75 0.5 25
12、75 2.5 90 10 6.0 90 10 6.1 25 75 10 25 75 7.3.2 质谱参考条件 条件如下： a) 电离方式：电喷雾电离（ ESI）； b) 毛细管电压： 4.0 kV； c) 干燥气温度： 350 ； d) 辅助气（鞘气）温度： 350 ； e) 雾化气、干燥气、辅助气（鞘气）均为高纯氮气，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达 到检测要求； f) 扫描方式：正离子扫描； g) 检测方式：多反应监测，参数见表 2。 表 2 多反应监测条件 中文名称 英文名称 母离子 m/z 子离子 m/z 驻留时间 s 裂解电压 V 碰撞能量 eV 溴氰虫酰 胺 Cyantran
13、iliprole 475.0 285.8a 0.2 110 10 443.9 0.2 110 15 a 为定量子离子 7.3.3 标准曲线 的制作 按浓度由小到大的顺序，依次分析基质标准溶液，得到相应的峰面积。以基质标准溶液的浓度为横 坐标，以相应的峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。 7.3.4 试样溶液的测定 将试样溶液注入液相色谱 -质谱仪中，得到相应的峰面积，由标准曲线得到试样溶液中溴氰虫酰胺 的浓度。如果试样溶液浓度超过标准曲线的上限，须用乙腈稀释试样溶液至线性范围后再进行测定。在 上述仪器条件下，溴氰虫酰胺的参考保留时间为 4.4 min。标准品的 MRM总离子流图和选择离子流图参见 附
14、录 A中图 A.1、图 A.2。 7.3.5 定性 DB37/T 3991 2020 5 如果样品的质量色谱峰保留时间与基质标准溶液一 致，定性离子对的相对丰度与浓度相当的基质标 准溶液的相对丰度一致，相对丰度偏差不超过表 3的规定，则可判断样品中存在相应的被测物。 表 3 定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50 % 20 % 50 % 10 % 20 % 10 % 允许的相对偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 7.4 空白试验 除不称取试样外，均按上述步骤进行。 8 结果计算和表述 试样中溴氰虫酰胺的含量按式（ 1）计算： 1000 1000 m VX . (1)
15、 式中： X 试样中溴氰虫酰胺的含量，单位为毫克每千克（ mg/kg）； 从基质标准曲线得到的试样测定液中溴氰虫酰胺的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； V 试样测定液的最终定容体积，单位为毫升（ mL）； m 最终样液所代表的试样质量，单位为克（ g）。 计算结果应扣除空白值，保留两位有效数字。 9 精密度 9.1 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合 附录 C 的要求。 9.2 在再现性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值与其算术平均值的比值（百分率），应符合 附录 D 的要求。 10 定量限和回收率 10.1 定量限 大米、玉米、干辣
16、椒、猪肉、鸡肝、牛奶、鸡蛋中溴氰虫酰胺定量限为 0.01 mg/kg，甘蓝、番茄、 洋葱、苹果中溴氰虫酰胺定量限为 0.004 mg/kg。 10.2 回收率 不同样品中溴氰虫酰胺添加水平及回收率参见附录 B。 DB37/T 3991 2020 6 A A 附 录 A （资料性附录） 溴氰虫酰胺标准品谱图 溴氰虫酰胺标准品 MRM总离子流图见图 A.1，选择离子流图见图 A.2。 图 A.1 溴氰虫酰胺标准品 MRM 总离子流图 图 A.2 溴氰虫酰胺标准品 MRM 选择离子流图 DB37/T 3991 2020 7 B B 附 录 B （资料性附录） 样品的添加浓度及回收率的实验数据 样 品
17、的添加浓度及回收率的实验数据见表 B.1。 表 B.1 样品的添加浓度及回收率的实验数据 样品名称 添加浓度 /（ mg/kg） 回收率范围 /% 大米 0.01 86.5 101.9 0.2 83.2 102.5 0.4 90.4 98.6 玉米 0.01 79.6 95.4 0.02 81.5 105.3 0.05 85.2 102.1 甘蓝 0.004 86.1 108.7 0.5 83.9 105.2 1 90.5 109.0 番茄 0.004 92.6 104.5 0.2 94.9 106.7 0.4 90.6 98.2 洋葱 0.004 79.9 94.3 0.05 83.8 97
18、.5 1 80.2 91.9 苹果 0.004 90.9 100.7 0.8 88.3 98.4 1.6 91.6 104.2 干辣椒 0.01 88.4 95.2 5 82.8 100.7 10 78.3 90.7 猪肉 0.01 83.2 113.8 0.2 85.1 104.2 0.4 80.5 98.3 DB37/T 3991 2020 8 表 B.1 样品的添加浓度及回收率的实验数据 （续 ） 样品名称 添加浓度 /（ mg/kg） 回收率范围 /% 鸡肝 0.01 88.6 108.4 0.15 86.0 99.9 0.3 83.5 105.3 牛奶 0.01 84.4 115.3
19、 0.6 86.1 103.2 1.2 79.2 99.2 鸡蛋 0.01 82.5 112.4 0.15 86.9 104.9 0.3 78.0 97.6 DB37/T 3991 2020 9 C C 附 录 C （规范性附录） 实验室内重复性要求 实验室内重复性要求见表 C.1。 表 C.1 实验室内重复性要求 被测组分 含量 mg/kg 精密度 % 0.001 36 0.0010.01 32 0.010.1 22 0.11 18 1 14 DB37/T 3991 2020 10 D D 附 录 D （规范性附录） 实验室间再现性要求 实验室间再现性要求见表 D.1。 表 D.1 实验室间再现性要求 被测组分含量 mg/kg 精密度 % 0.001 54 0.0010.01 46 0.010.1 34 0.11 25 1 19 _
