1、ICS 65.020.01B 04 DB1302唐 山 市 地 方 标 准DB1302/T 509 2020青 贮 玉 米 中 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 残 留量 的 测 定 液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱 法 2020-08-20发 布 2020-09-20实 施唐 山 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB1302/T 509 2020 I 前 言本 标 准 按 照 GB/T 1.1-2009给 出 的 规 则 起 草 。本 标 准 由 唐 山 市 市 场 监 督 管 理 局 提 出 并 归 口 。本 标 准 起 草 单 位 ： 唐 山 市 食 品 药 品 综 合 检 验
2、 检 测 中 心 。本 标 准 主 要 起 草 人 ： 赵 海 涛 、 王 帅 、 闫 艳 华 、 张 贺 凤 、 杜 雪 娜 、 王 磊 、 王 雅 静 、 汤 思 凝 、 张 亮 、 周彦 成 、 刘 会 会 、 张 谊 、 薄 会 娜 、 湛 毅 强 、 薛 凤 珍 、 李 丽 媛 。 DB1302/T 509 2020 1 青 贮 玉 米 中 8 种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 残 留 量 的 测 定液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱 法1 范 围本 标 准 规 定 了 采 用 液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱 法 测 定 青 贮 玉 米 中 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 残 留
3、 量 的 方 法 。本 标 准 适 用 于 青 贮 玉 米 中 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 残 留 量 的 测 定 ， 其 他 同 类 型 农 药 残 留 量 的 测 定 可 参 照执 行 。本 标 准 定 量 测 定 的 8种 农 药 测 定 下 限 为 0.04 mg/kg。2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 对 于 本 文 件 的 应 用 是 必 不 可 少 的 。 凡 是 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 。凡 是 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ）
4、适 用 于 本 文 件 。GB/T 6682 分 析 实 验 室 用 水 规 则 和 试 验 方 法3 原 理试 样 经 乙 腈 匀 浆 提 取 ， 氯 化 钠 盐 析 ， 氨 基 固 相 萃 取 柱 净 化 ， 用 二 氯 甲 烷 +甲 醇 （ 95+5） 洗 脱 农 药 ，液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱 法 测 定 ， 外 标 法 定 量 。4 试 剂 和 材 料除 另 有 说 明 外 ， 所 用 试 剂 均 为 分 析 纯 ， 实 验 用 水 为 GB/T 6682规 定 的 一 级 水 。4.1 乙 腈 ， 色 谱 纯 。 4.2 甲 醇 ， 色 谱 纯 。4.3 二 氯 甲 烷
5、， 色 谱 纯 。4.4 氯 化 钠 ， 140 烘 烤 4 h。4.5 氨 基 固 相 萃 取 柱 ： 1000 mg， 6 mL。4.6 滤 膜 ， 0.22 m 有 机 系 滤 膜 。4.7 淋 洗 液 ： 二 氯 甲 烷 +甲 醇 （ 95+5， 体 积 比 ） 。4.8 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 标 准 品 见 表 1。表 1 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 标 准 品序 号 中 文 名 浓 度 /（ mg/kg） 纯 度 /（ ） 溶 剂1 涕 灭 威 亚 砜 1000 96 甲 醇 2 涕 灭 威 砜 1000 96 甲 醇3 灭 多 威 1000 96 甲 醇4 3-
6、羟 基 克 百 威 1000 96 甲 醇 DB1302/T 506 2020 2 表 1 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 标 准 品 （ 续 ）序 号 中 文 名 浓 度 /（ mg/kg） 纯 度 /（ ） 溶 剂5 涕 灭 威 1000 96 甲 醇6 甲 萘 威 1000 96 甲 醇7 异 丙 威 1000 96 甲 醇8 克 百 威 1000 96 甲 醇4.9 标 准 溶 液 配 制4.9.1 混 合 标 准 溶 液分 别 取 各 农 药 标 准 储 备 液 50 L 于 5 mL 容 量 瓶 中 用 丙 酮 分 别 稀 释 定 容 到 5 mL， 配 成 浓 度 为 10g/
7、mL 的 使 用 液 ， 密 封 储 存 于 4 冰 箱 ， 备 用 。 4.9.2 基 质 混 合 标 准 工 作 溶 液取 样 品 空 白 溶 液 分 别 配 制 0.02 g/mL、 0.04 g/mL、 0.06 g/mL、 0.08 g/mL、 0.12 g/mL、 0.16g/mL、 0.32 g/mL 的 基 质 混 合 标 准 工 作 液 ， 现 用 现 配 。5 仪 器 设 备5.1 液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱 仪 ， 配 有 电 喷 雾 离 子 源 （ ESI） 。5.2 破 壁 料 理 机 。5.3 氮 吹 仪 。5.4 涡 旋 混 合 器 。5.5 分 析 天
8、平 ： 感 量 0.01 g。5.6 均 质 器 。 5.7 容 量 瓶 ： 5 mL。5.8 移 液 器 ： 2 mL。5.9 样 品 瓶 ： 2 mL， 带 聚 四 氟 乙 烯 旋 盖 。6 测 定 步 骤6.1 试 样 制 备取 不 少 于 1000 g 样 品 ， 去 除 其 中 杂 物 ， 将 样 品 四 分 缩 分 至 250 g， 粉 碎 后 密 封 ， 制 成 试 样 备 用 ， 剩余 试 样 于 -18 保 存 。6.2 提 取称 取 25 g（ 精 确 至 0.01 g） 样 品 于 200 mL烧 杯 中 ， 加 入 50 mL乙 腈 ， 用 均 质 器 匀 浆 提 取
9、2 min后 用 滤 纸 过 滤 ， 滤 液 收 集 到 装 有 6 g氯 化 钠 的 100 mL具 塞 量 筒 中 (氯 化 钠 量 以 足 量 饱 和 即 可 )， 剧 烈 震 荡 30 s， 在室 温 下 静 置 30 min， 使 乙 腈 和 水 相 分 层 。6.3 净 化 DB1302/T 509 2020 3 从 具 塞 量 筒 中 的 乙 腈 层 中 吸 取 10.00 mL上 清 液 于 15 mL试 管 中 ， 在 80 的 氮 吹 仪 上 缓 慢 吹 至 近 干 ，加 入 2.0 mL二 氯 甲 烷 +甲 醇 （ 95+5） ， 在 涡 旋 混 合 器 上 涡 旋 30
10、 s， 待 净 化 。 将 氨 基 固 相 萃 取 柱 用 3.0 mL二 氯 甲 烷 +甲 醇 （ 95+5） 预 淋 洗 ， 条 件 化 ， 当 溶 液 液 面 达 到 柱 吸 附 层 表 面 时 ， 立 即 倒 入 上 述 待 净 化 溶 液 ，用 15 mL刻 度 离 心 管 接 收 洗 脱 液 ， 用 4 mL二 氯 甲 烷 +甲 醇 （ 95+5） 冲 洗 试 管 后 淋 洗 氨 基 固 相 萃 取 柱 ， 并重 复 三 次 ， 收 集 洗 液 ， 在 50 的 氮 吹 仪 上 缓 慢 吹 至 近 干 ， 加 入 2.0 mL甲 醇 混 匀 ， 经 0.22 m的 有 机 系滤 膜
11、 过 滤 后 移 入 2 mL自 动 进 样 器 样 品 瓶 中 ， 待 测 。6.4 测 定 条 件6.4.1 液 相 色 谱 条 件6.4.1.1 色 谱 柱 ： H18， （ 50 mm 3.00 mm， 2.60 m） 。6.4.1.2 柱 温 ： 40 。6.4.1.3 进 样 量 ： 2 L。 6.4.1.4 流 速 ： 0.40 mL/min。6.4.1.5 流 动 相 ： A： 甲 醇 ； B： 5 mmol 甲 酸 铵 +0.05%甲 酸 水 溶 液 ， 梯 度 洗 脱 条 件 见 表 2。表 2 梯 度 洗 脱 条 件时 间 /min A（ 甲 醇 ） / B（ 5mmol
12、甲 酸 铵 +0.05%甲 酸 水 溶 液 ） /0.00 100 00.50 90 105.00 5 958.00 5 958.01 90 1010.00 100 06.4.2 质 谱 参 考 条 件 6.4.2.1 离 子 源 ： 电 喷 雾 离 子 源 （ ESI） 。6.4.2.2 扫 描 方 式 ： 正 离 子 扫 描 。6.4.2.3 监 测 方 式 ： 多 反 应 监 测 （ MRM） 。6.4.2.4 雾 化 气 流 量 ： 3.0 L/min。6.4.2.5 干 燥 气 流 量 ： 15.0 L/min。6.4.2.6 加 热 块 温 度 ： 400 。6.4.2.7 DL管
13、 温 度 ： 400 。6.4.2.8 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 质 谱 参 数 见 表 3。表 3 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 质 谱 参 数 化 合 物 名 称 保 留 时 间（ min） 定 量 离 子 定 性 离 子 碰 撞 电 压(V)涕 灭 威 亚 砜 3.008 207.10/89.00 207.10/132.00； 207.10/89.00 14； 8涕 灭 威 砜 3.236 240.10/86.00 240.10/86.00； 240.10/223.00 21； 8灭 多 威 3.908 163.05/88.00 163.05/88.00； 163.05/10
14、6.05 8； 103-羟 基 克 百 威 4.601 238.10/163.10 238.10/163.10； 238.10/181.20 14； 10涕 灭 威 5.330 208.10/116.00 208.10/116.00； 208.10/89.10 15； 20 DB1302/T 506 2020 4 表 3 8 种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 质 谱 参 数 (续 )化 合 物 名 称 保 留 时 间（ min） 定 量 离 子 定 性 离 子 碰 撞 电 压(V)甲 萘 威 6.202 202.05/145.05 202.05/145.05； 202.05/127.05 9；
15、27异 丙 威 6.208 194.10/95.00 194.10/95.00； 194.10/137.10 20； 15克 百 威 6.157 222.30/165.10 222.30/165.10； 222.30/123.10 17； 206.5 液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱 测 定6.5.1 定 性 测 定在 相 同 实 验 条 件 下 进 行 样 品 测 定 时 ， 如 果 检 出 的 色 谱 峰 的 保 留 时 间 与 标 准 样 品 相 一 致 ， 并 且 在 扣 除背 景 后 的 样 品 质 谱 图 中 ， 所 选 择 的 离 子 均 出 现 ， 而 且 所 选 择 的 离
16、 子 丰 度 比 与 标 准 品 的 离 子 丰 度 比 相 一 致 （ 相 对 丰 度 50 ， 允 许 20 偏 差 ； 相 对 丰 度 20 50 ， 允 许 25 偏 差 ； 相 对 丰 度 10% 20 ，允 许 30 偏 差 ； 相 对 丰 度 10 ， 允 许 50 偏 差 ） ， 则 可 判 断 样 品 中 存 在 这 种 农 药 。6.5.2 定 量 测 定本 标 准 中 液 相 色 谱 -质 谱 /质 谱 采 用 外 标 -校 准 曲 线 法 定 量 测 定 。 为 减 少 基 质 对 定 量 测 定 的 影 响 ， 定 量用 标 准 溶 液 应 采 用 基 质 混 合 标
17、 准 工 作 溶 液 绘 制 标 准 曲 线 ， 并 且 保 证 所 测 样 品 中 农 药 的 响 应 值 均 在 仪 器 的线 性 范 围 内 。 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 的 多 反 应 监 测 （ MRM） 色 谱 图 见 附 录 A。6.6 平 行 试 验按 上 述 步 骤 对 同 一 试 样 进 行 平 行 试 验 。6.7 空 白 试 验 除 不 称 取 试 样 外 ， 均 按 上 述 步 骤 进 行 。6.8 结 果 计 算 和 描 述按 式 （ 1） 计 算 试 样 中 8 种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 的 含 量 ， 计 算 结 果 需 将 空 白 值 扣 除 。
18、10001000 mVcX （ 1）式 中 ：X一 试 样 中 被 测 组 分 残 留 量 ， 单 位 为 毫 克 每 千 克 （ mg/kg） ；c一 从 标 准 工 作 曲 线 得 到 的 被 测 组 分 溶 液 浓 度 ， 单 位 为 微 克 每 毫 升 （ g/mL） ;V一 样 品 溶 液 最 终 定 容 体 积 ， 单 位 为 毫 升 （ mL） ；m一 样 品 溶 液 所 代 表 最 终 试 样 的 质 量 ， 单 位 为 克 （ g） 。计 算 结 果 应 扣 除 空 白 值 。 7 测 定 下 限 、 精 密 度7.1 测 定 下 限本 方 法 8种 氨 基 甲 酸 酯 农
19、药 测 定 下 限 为 0.04 mg/kg。 DB1302/T 509 2020 5 7.2 精 密 度在 重 复 性 条 件 下 ， 获 得 的 2次 独 立 测 试 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 重 复 性 限 （ r） 。 精 密 度 数 据 表 见 表 4。在 再 现 性 条 件 下 ， 获 得 的 2次 独 立 测 试 结 果 的 绝 对 差 值 不 得 超 过 再 现 性 限 （ R） 。 精 密 度 数 据 表 见 表 4。表 4 精 密 度 数 据 表农 药 名 称 含 量（ mg/kg） 重 复 性 限（ r） 再 现 性 限（ R） 含 量（ mg/kg）
20、重 复 性 限（ r） 再 现 性 限（ R） 含 量（ mg/kg） 重 复 性 限（ r） 再 现 性 限（ R）涕 灭 威 亚 砜 0.04 0.0027 0.0064 0.08 0.0036 0.0076 0.2 0.0129 0.0075涕 灭 威 砜 0.04 0.0032 0.0075 0.08 0.0059 0.0105 0.2 0.0243 0.0597灭 多 威 0.04 0.0029 0.0056 0.08 0.0046 0.0095 0.2 0.0126 0.0394 3-羟 基 克 百 威 0.04 0.0067 0.0094 0.08 0.0038 0.0093 0
21、.2 0.0135 0.0473涕 灭 威 0.04 0.0025 0.0061 0.08 0.0052 0.0109 0.2 0.0127 0.0423甲 萘 威 0.04 0.0038 0.0072 0.08 0.0042 0.0079 0.2 0.0394 0.1185异 丙 威 0.04 0.0024 0.0042 0.08 0.0037 0.0086 0.2 0.0297 0.0156克 百 威 0.04 0.0036 0.0068 0.08 0.0058 0.0128 0.2 0.0337 0.1542 DB1302/T 506 2020 6 2 附 录 A（ 资 料 性 附 录
22、）8 种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 的 多 反 应 监 测 （ MRM） 色 谱 图8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 的 多 反 应 监 测 （ MRM） 色 谱 图 见 图 A.1。 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75 5.00 5.25 5.50 5.75 6.00 6.25 6.50 min0100000200000 300000400000500000 600000700000800000 7:克百威 222.30165.10(+) CE: -17.06:甲萘威 202.05145.05(+) CE: -9.03:灭多威 163.
23、0588.00(+) CE: -8.02:涕灭威砜 240.1086.00(+) CE: -21.01:涕灭威亚砜 207.10132.00(+) CE: -8.0 2.75 3.00 3.25 3.50 3.75 4.00 4.25 4.50 4.75 5.00 5.25 5.50 5.75 6.00 6.25 6.50 min010000200003000040000 5000060000700008000090000100000 110000120000130000140000150000 8:异丙威 194.10137.10(+) CE: -15.05:涕灭威 208.00116.10(+) CE: -10.04:3-羟基克百威 238.10163.10(+) CE: -14.01一 涕 灭 威 亚 砜 5一 甲 萘 威 2一 涕 灭 威 砜 6一 3-羟 基 克 百 威3一 灭 多 威 7一 涕 灭 威4一 克 百 威 8一 异 丙 威图 A.1 8种 氨 基 甲 酸 酯 农 药 的 多 反 应 监 测 （ MRM） 色 谱 图 1 3 4 58 76
