1、 ICS 65.020 B61 备案号：30058-2011 DB46 海 南 省 地 方 标 准 DB 46/ T1902010 蔬菜根结线虫病防控技术规程 2010 - 08 - 05发布 2010 - 09 - 05实施 海南省质量技术监督局 发 布 DB46/T190-2010 I 前 言 本标准由海南省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：海南省农业科学院农业环境与植物保护研究所。 本标准主要起草人：陈绵才、芮凯、王会芳、吴凤芝、肖彤斌、符美英、黄伟明。 DB46/T 1902010 1 蔬菜根结线虫病防控技术规程 1 范围 本标准规定了蔬菜根结线虫（Meloidogyne s
2、pp.）的术语和定义、调查和诊断，以及蔬菜从播种到 收获各个生育阶段根结线虫病防治的技术措施。 本标准适用于海南省范围内蔬菜根结线虫的识别与防治。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 8321.5 农药合理使用准则（五） 3 术语和定义 3.1 根结线虫 线虫动物门的一类细小动物，雌、雄虫异形。成熟雌虫梨形或柠檬形，雄虫蠕虫形。 3.2 2龄幼虫 根结线虫2龄幼虫呈线状，两端略尖细，以2龄幼虫从寄主植物须根或侧根侵入并诱发病害。 3.3 生
3、物熏蒸 在秸秆或稻草上撒施石灰，并翻犁入耕作层直至秸秆腐烂，可加入鸡粪等农家肥，用农用薄膜封盖 15 d以上，翻土通气57d后移栽。 4 取样 4.1 取样时间 种植（移栽）前取样一次及种植（移栽）后每月取样一次。 4.2 取样方法 种植（移栽）前用对角线5点取样法从1020cm的耕作层取土样，充分混匀后用量杯量取100 mL 土样分离线虫24 h。种植（移栽）后采用相同的办法从作物根际020 cm土层采集土样并分离线虫。 如果不能及时分离，可置于17保存。 DB46/T 1902010 2 5 根结线虫的检测 5.1 根结线虫的分离 从土壤或植物根组织中收集根结线虫的卵、2龄幼虫和成虫的实验
4、方法。常用的有直接解剖分离法、 贝曼漏斗分离法、离心飘浮分离法和直接过筛分离法。 5.2 线虫计数 用培养皿收集分离的线虫，在体视显微镜下统计2龄幼虫的数量。 5.3 根结线虫的诊断 在体视显微镜下直接用解剖针解剖根结，观察根系中是否有根结线虫雌虫和雄虫。用贝曼漏斗法分 离土壤中线虫，在体视显微镜下观察是否有根结线虫雄虫和2龄幼虫。 5.4 根结线虫的种类和检测特征 海南岛蔬菜产区发生与为害的常见根结线虫有4种，即：南方根结线虫、花生根结线虫、爪哇根结 线虫和象耳豆根结线虫。其各自的诊断特征参见附录B。 6 综合防治技术 6.1 农业防治 6.1.1 轮作 采用蔬菜与非寄主作物如玉米进行一年以
5、上轮作或进行水旱轮作。 6.1.2 及时清理病株残体 蔬菜收获后根系腐烂前清洁病田，将染病根系连同植株残体清理出田外集中焚烧。 6.1.3 培育和选用无病苗 采用无病土或无病培养基质育苗，移栽时剔除有根结的疑似病苗。 6.1.4 加强肥水管理 下足有机肥，注意及时增施有机肥和生物肥料以及土壤改良剂，适时喷施有机叶面肥。 6.2 土壤消毒 6.2.1 生物熏蒸与阳光消毒 非寄主作物收获后均匀撒施石灰50kg/667m2，并将秸秆翻犁入耕作层直至秸秆腐烂。或上茬蔬菜完 全收获后于土壤表面撒施：稻草500kg/667m2+50%石灰氮100kg/667m2，或稻草500kg/667m2+鸡粪 250
6、kg/667m2+17.2%碳酸氢铵67kg/667m2，一并翻犁入20cm以下耕作层，用农用薄膜封盖15d（天）后， 翻土通气57d后移栽。或盛夏高温季节对耕作层土壤实施深翻晒垡15d以上。 6.2.2 植前土壤消毒 DB46/T 1902010 3 按3kg/667m2的剂量用35%威百亩水剂兑水300kg沟施和覆土并用地膜覆盖熏蒸7d后，翻土释放毒 气，7天后移栽菜苗。 6.3 药剂防治 6.3.1 防治指标 100 mL土壤中2龄幼虫数量30条时实施防治。 6.3.2 植前施用杀线虫剂 在种植穴或种植沟中施入10%噻唑膦颗粒剂1.01.5 kg/667m2、或5%丁硫克百威颗粒剂5.0
7、 kg/667m2、或0.5%阿维菌素颗粒剂3.0 kg/667m2、或5亿孢子/g淡紫拟青霉颗粒剂5.0 kg/667m2、或2.5亿 孢子/g厚垣轮枝菌微粒剂5.0 kg/667m2，并与土壤充分混匀后移栽。 6.3.3 生长期施用杀线虫剂 可选用10%噻唑膦颗粒剂1.01.5 kg/667m2，或0.5%阿维菌素颗粒剂3.0 kg/667m2沟施。也可选用 2.5%二硫氰基甲烷可湿性粉剂15003000倍液，或1.8%阿维菌素乳油10001500倍液灌根。 6.3.4 杀线虫剂品种及使用技术 参见附录A。 6.3.5 严禁使用的高毒剧毒高残留农药 按照海南省的相关管理规定执行。 DB46
8、/T 1902010 4 附 录 A （资料性附录） 用于防治蔬菜根结线虫的杀线虫剂种类和使用技术 杀线虫剂名称 施用量 施药方法和要求 持效期 安全 间隔期 消 毒 药 剂 35%威百亩水剂 3.0-4.0kg/667m2 仅限种植前土壤消毒处理，均匀 施于沟内，随即盖土踏实，盖地 膜熏蒸 7d 后揭膜，充分透气 7d 后再播种或移栽。 120d 98%棉隆微粒剂 5-7 kg/667m2 仅限种植前土壤消毒处理，均匀 施于沟内，随即盖土踏实，盖地 膜熏蒸15d后揭膜，翻耕透气2 3d后，再播种或移栽。 120d 50%氰氨化钙颗粒剂 40-80 kg/667m2 播种前或定植前施用，随同有
9、机 基肥均匀撒施于土壤表面， 翻耕 入20cm耕作层，浇水后覆盖塑料 薄膜。15-30d 后揭地膜，并松土 降温12d后播种或移栽。 120d 防 治 药 剂 5亿活孢子/g淡紫 拟青霉颗粒剂 2.5-3.0 kg/667m 2 播种前或移栽前均匀穴施、沟施 在种子或幼苗根系附近，施药深 度为20cm左右，施药1次。 90d 10d 2.5亿孢子/g厚垣 轮枝菌微粒剂 3.0-5.0 kg/667m 2 播种前或移栽前均匀穴施或沟 施。每个作物周期分 2 次施用。 育苗时与营养土混匀施用，移栽 时与适量农家肥或土混匀穴施。 90d 10d 0.5%阿维菌素 颗粒剂 3.0-5.0 kg/667
10、m 2 苗床土消毒或整个生长期施用， 拌细土沟施或穴施。 30d 10d 10%噻唑磷颗粒剂 1.0-1.5kg/667m2 沟施、穴施，在播种前撒施并充 分与土壤混合，整个生长期可施 用，每季最多使用1次。 120d 10d 5%丁硫克百威 颗粒剂 5.0-7.0kg/667m 2 在移栽前或移栽时采用沟施或穴 施, 然后覆土、浇水。每季最多使 用1次。 90d 15d 2.5%二硫氰基甲烷 可湿性粉剂 1500-3000倍液 灌根，在整个生长期内均可施用。 60d 10d 注：合理选用杀线虫剂，严格控制农药的安全间隔期、施用剂量和施用次数，尽量减轻化学农药对环境 的污染和天敌的伤害，避免对
11、果实造成污染。注意不同作用机理的农药的合理混用和交替使用，避免根 结线虫产生抗药性。 DB46/T 1902010 5 附 录 B （资料性附录） 蔬菜根结线虫的检测特征 根结线虫（Meloidogyne spp.）在属于线虫动物门、侧尾腺纲、垫刃目、异皮科、根结属。至目前 全世界已报道有90多个种，国内已报道有近40个种分布。根结线虫的寄主广泛，超过3000种植物， 是普遍而重要的农作物病原线虫，一般造成农作物减产10%20 %，严重的达75 % 以上。海南岛蔬菜 产区分布的根结线虫有4种，即南方根结线虫、花生根结线虫、爪哇根结线虫和象耳豆根结线虫。 B.1 根结线虫病的症状 植物根部产生大
12、小不一的、呈圆形或纺锤形或不规则瘤状根结。一条根上可串珠状着生多个根结， 分布整个根系。严重时须根和小根损坏，仅存主根，整个根系呈鸡爪状，后期根系腐烂。地上部似缺肥 水状，植株矮化，叶片变小变黄，严重时干枯，甚至整株枯死。 B.2 病株分级标准 0 级：根系无根结；1 级：根系有少量小根结；3 级：三分之二根系布满根结；5 级：根系布满根 结并有次生根结；7级：根系形成根结团。 B.3 防治效果的统计 采用对角线五点取样法，每点调查2株，共调查10株，计算发病率、病情指数和防治效果。 发病率=（发病株数/调查株数）100%； 根结指数=（病情级值 该级病情株数）/（调查总株数7）100； 防治
13、效果=1-（施药前对照区活虫数施药后处理区活虫数）/（施药后对照区活虫数施药前处理 区活虫数）100%。 B.4 南方根结线虫 雌虫：体长607.7(483.5698.5)m；最大体宽403.5(316.5538)m；口针长14.5(13.115.6)m； DEGO3.2 (2.54.5)m；口针基部球高2.2(1.93.2)m；口针基部球宽4.0(3.24.5)m；中食道球高 50.5(42.061.2)m；中食道球宽41.5(29.047.5)m。 雄虫：体长1508.0(1007.51674.0)m；最大体宽35.0(33.240.0)m；口针长24.2(22.540.0)m； DEGO
14、2.3(1.73.0)m；口针基部球高3.4(2.53.5)m；口针基部球宽4.8(4.55.1)m。 2龄幼虫：体长402.1(352478)m；最大体宽15.5(13.517.0)m；口针长12.3(10.514.0)m； DEGO2.9(2.03.6)m；尾长51.5(43.059.2)m；透明尾长15.5(11.521.5)m。 形态描述：雌雄异形，雌虫膨大，呈球形、梨形，有突出的颈部；唇区稍突起，略呈帽状，会阴花 纹变异较大，一般背躬高；花纹明显呈椭圆形或方形，背弓顶部圆或平，有时呈梯形，背纹紧密，背面 和侧面的花纹从波浪形至锯齿形，有时平滑，侧区常不清楚，侧纹常分叉。雄虫线形，唇区
15、平至凹，不 缢缩，常有23条不完整的环纹；口针圆锥体部尖端钝圆，杆状部常为圆柱形，靠近基部球位置较窄， 基部球圆。 其他特征：年轻雌虫同工酶试验表明其苹果酸脱氢酶电泳带谱型为N1，酯酶电泳带谱型为I1型。 用引物C2F3和1108扩增线粒体DNA的COII和LrRNA基因间序列，其片段长度为1.7kb，用HinfI内切 酶酶切成1.3和0.4kb大小的两条限制性片段。引物的序列如下： 引物C2F3：5-GGTCAATGTTCAGAAATTTGTGG-3 DB46/T 1902010 6 引物1108：5-TACCTTTGACCAATCACGCT-3 形态和鉴定特征见图A、图B、图C、图D、图E
16、。 B.5 爪哇根结线虫 雌虫：体长715.8(589.0865.0)m；最大体宽455.5(425.0612.3)m；口针长15.6(13.017.3)m； DEGO4.6(4.15.0)m；口针基部球高2.0(1.82.5)m；基部球宽4.3(3.95.0)m；中食道球高50.5(30.0 60.2)m；中食道球宽42.5(33.048.5)m。 雄虫：体长1540.0(1107.51679.0)m；最大体宽36.5(33.243.0)m；口针长23.8(22.540.0)m； DEGO3.2 (1.53.0)m；口针基部球高2.7(2.53.5)m；口针基部球宽4.2(3.45.0)m。
17、 2龄幼虫：体长432.2(352.2478.1)m；最大体宽15.3(13.517.0)m；口针长12.3(9.512.9)m； DEGO3.1(2.03.9)m；尾长51.3(43.054.2)m；透明尾长15.6(11.521.5)m。 形态描述：雌虫犁型或近球型，颈较长，与虫体纵抽在一条直线上或略弯向一侧，与体分界明显； 口针基球与基杆分解明显，会阴花纹在群体内变异很大，通常为椭圆形至圆形，形成一个套一个的同心 圆，背躬有低到高形，线纹平滑、细密、连续，有明显的侧线，很少有线纹通过侧线，也有些种群的侧 线不明显；雄虫线型，头冠宽，前端圆，有2条不完全环纹，头区与体部分界不明显，口针锥体
18、向渐粗， 基杆圆拄形，中食道球明显，瓣门大。侧区有4条侧线。尾端阔圆。 其他特征：年轻雌虫同工酶试验表明其苹果酸脱氢酶电泳带谱型为N1，酯酶电泳带谱型为J3型。 用引物C2F3和1108扩增线粒体DNA的COII和LrRNA基因间序列，其片段长度为1.7kb。引物序列同 上。 形态和鉴定特征见图A、图B、图C、图D、图E。 B.6 花生根结线虫 雌虫：体长705.8(589.0885.0)m；最大体宽465.5(425.0601.3)m；口针长15.1(13.516.3)m； DEGO4.8(4.55.0)m；口针基部球高2.2(2.02.5)m；基部球宽4.7(4.55.0)m；中食道球高5
19、1.5(32.0 60.2)m；中食道球宽40.5(29.048.5)m。 雄虫：体长1340.0(1007.51674.0)m；最大体宽35.1(33.240.0)m；口针长24.5(22.540.0)m； DEGO2.2 (1.53.0)m；口针基部球高2.9(2.53.5)m；口针基部球宽3.8(3.45.0)m。 2龄幼虫：体长412.2(352.6478.9)m；最大体宽16.3(13.517.0)m；口针长11.9(9.512.0)m； DEGO2.7(2.03.9)m；尾长48.6(43.050.2)m；透明尾长15.5(11.521.5)m。 形态描述：雌雄异形，雌虫膨大、呈球
20、形；唇区稍突起，略呈帽状；会阴花纹变异较大，花纹明显 呈椭圆形，一般背躬扁平到圆形，大多时候弓上的线纹在侧线处分叉，有明显的侧线，有线纹通过侧线， 背面和侧面的花纹从波浪形至锯齿形，侧纹常分叉，有时纹断续并分叉；有些种群没有侧线。雄虫线形， 唇区平至凹，不缢缩，常有12条不完整的环纹；口针圆锥体部尖端钝圆，杆状部常为圆柱形，靠近基 部球位置较窄，口针基球为圆球形。 其他特征：年轻雌虫同工酶试验表明其苹果酸脱氢酶电泳带表型为 N1，酯酶电泳带表型为 A1 型 或A2型。用引物C2F3和1108扩增线粒体DNA的COII和LrRNA基因间序列，其片段长度为1.1kb 或1.7kb。引物序列同上。
21、形态和鉴定特征见图A、图B、图C、图D、图E。 B.7 象耳豆根结线虫 DB46/T 1902010 7 雌虫：体长732(552.0995.0)m；最大体宽435.5(315.0702.3)m；口针长12.1(9.113.2)m； DEGO4.9(4.25.7)m；口针基部球高2.4(1.72.9)m；基部球宽4.9(4.25.7)m；中食道球高42.5(29.4 56.7)m；中食道球宽38.2(26.052.6)m。 雄虫：体长1449.2(1107.61659.0)m；最大体宽31.6(28.239.0)m；口针长19.3 (18.526.4)m； DEGO2.2 (1.53.0)m；
22、口针基部球高2.1(1.82.5)m；口针基部球宽4.1(3.55.2)m。 2龄幼虫：体长412.5(388.6436.9)m；最大体宽15.3(14.116.6)m；口针长11.9(11.612.9)m； DEGO3.6(2.65.0)m；尾长53.5(41.966.5)m；透明尾长16.2(12.722.1)m。 形态描述：象耳豆根结线虫雌虫腹面线纹通常纤细并平滑，尾端可见。口针锥部稍向背面弯曲。干 部圆柱形，末端加宽。口针基球同干部界限明显，每个球均有一条纵沟纹，所以看起来如同有两个球。 会阴花纹通常呈卵圆形，线纹平滑到粗糙。弓高中度，通常呈圆形。无明线侧线。阴门周围通常无线纹。 雄虫
23、头部唇盘和中唇融合形成一个长形的头冠。唇盘稍高于中唇，中唇月牙形。头部无环纹。口针粗壮， 锥体尖，不弯曲。干部圆柱形。基球大而圆，同干部有明显界限。有些雄虫口针的基球也有纵纹。 其他特征：年轻雌虫同工酶试验表明其苹果酸脱氢酶电泳带表型为N1a，酯酶电泳带表型为VS1-S1 型。用引物C2F3和1108扩增线粒体DNA的COII和LrRNA基因间序列，其片段长度为0.7kb。引物序 列同上。 形态和鉴定特征见图A、图B、图C、图D、图E。 DB46/T 1902010 8 A. 卵 B. 雄虫前端 C. 雄虫 D. 2龄幼虫 E. 2龄幼虫前端 F. 2龄幼虫尾部 G. 雌虫 H. 雌虫头部 图
24、A 蔬菜根结线虫的外部形态 DB46/T 1902010 9 A. 南方根结线虫会阴花纹 B. 爪哇根结线虫会阴花纹 C. 花生根结线虫会阴花纹 D. 象耳豆根结线虫会阴花纹 图B 常见4种蔬菜根结线虫雌虫会阴花纹 A图：1为对照爪哇根结线虫；2和3为爪哇根 结线虫（M.javanica）；4、5、9、12和13为南 方根结线虫（M.incognita）；10、11、14 和 15 为象耳豆根结线虫（M. enterolobii）；6为西班 牙根结线虫（M.hispanica）；7为花生根结线虫 （N1、A2）（M.arenaria）；8 为花生根结线虫 （N1、A1）（M.arenaria）
25、. B图：1为对照爪哇根结线虫；3、6、7和 10 为南方根结线虫（M.incognita）；2、4 和5为象耳豆根结线虫（M. enterolobii）；8 为爪哇根结线虫（M.javanica）；9为花生根 结线虫（M.arenaria）. DB46/T 1902010 10 图C 4种常见蔬菜根结线虫种群同工酶电泳图谱 图D 4种常见蔬菜根结线虫mtDNA的COII和LrRNA基因间序列扩增结果 图A：M为Marker； 1、2和3为爪哇根结线虫（1.7kb）； 4和5为花生根结线虫（N1、A2）(1.1kb)； 6和7为象耳豆根结线虫(0.7kb). 图B：M为Marker； 1、2和
26、3为南方根结线虫（1.7kb）； 4和5为象耳豆根结线虫(0.7kb)； 6为西班牙根结线虫（1.7kb）； 7为花生根结线虫（N1、A2）(1.1kb)； 8为花生根结线虫（N1、A1）(1.7kb). C图：1为对照爪哇根结线虫；2、3、4、 7、8、9 和 14 为南方根结线虫 （M.incognita）；5 和 6 为西班牙根结线 虫（M.hispanica）；13 为爪哇根结线虫 （M.javanica）；10、11和12为象耳豆根 结线虫（Meloidogyne enterolobii）. D图：1为对照爪哇根结线虫2、3、5和 6 为爪哇根结线虫（M.javanica）；4、11
27、 和 12 为象耳豆根结线虫（Meloidogyne enterolobii）；7、8、9、10 和 13 为南方 根结线虫（M.incognita）. DB46/T 1902010 11 图E 4种常见蔬菜根结线虫mtDNA的COII和LrRNA基因间序列扩增结果和HinfI酶切结果 _ 图A：M为Marker； 1为爪哇根结线虫（1.7kb）； 2为南方根结线虫（1.7kb）； 3为象耳豆根结线虫(0.7kb)； 4为西班牙根结线虫（1.7kb）； 5为花生根结线虫（N1、A2）(1.1kb)； 6为花生根结线虫（N1、A1）(1.7kb). 图B：M为Marker； 1为爪哇根结线虫（1.7kb）； 2为南方根结线虫（1.3和0.4kb）； 3为象耳豆根结线虫(0.7kb)； 4为西班牙根结线虫（1.7kb）； 5为花生根结线虫（N1、A2）(1.1kb)； 6为花生根结线虫（N1、A1）(1.7kb).
