1、I CS 备案号： 21201-2007 青 海 省 地 方 标 准 DB63 DB6 3 / T 6 6 8 2 0 0 7 实验 室冬虫 夏草寄 主幼虫 的 人工 饲养技 术规程 2 0 0 7 - 0 9 - 1 1 发布 2 0 0 7 - 1 1 - 0 1 实施 青 海 省 质 量 技 术 监 督 局发布发布发布发布 DB63/ 6682007 I 目 次 前言 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
2、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . II 1 范围 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 2 名词解释 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
3、. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 养虫室环境条件 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 4 养虫室的组成 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
4、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 5 养虫室的设计 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 6 常用设备 . . . . . . . . . . . . .
5、 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 7 饲养技术 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 8
6、日常管理 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 9 减少幼虫死亡率需要注意的主要环节 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2 附录 A （资料
7、性附录） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3 附录 B （资料性附录） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4 DB63/ 6682
8、007 I I 前 言 本规程依据 GB/T1.1-2000标准化工作导则 ， 在 参阅有关资料， 结合多年来的实践经验， 本着 科 学、实用、先进的原则特制定青海冬虫夏草寄主幼虫人工饲养技术规程。 本 规程 由青海省畜牧兽医科学院提出并归口 本 规程 由青海省畜牧兽医科学院草原所负责起草 本 规程 起草人 : 徐海峰、 李玉玲、张宗豪、 马少丽、 刘兆红、索昂文江、 杨青英、 王晓燕、 蒋 卫平 本规程自 2007年 11月 1 日起实施。 DB63/ 6682007 1 实验室冬虫夏草 寄主幼 虫的 人工饲养技术规 程 范围 本规程规定了冬虫夏草寄主卵的收集、 孵 化、 人工饲养幼虫的环境
9、条件、 饲 养密度、 饲料和日常 管 理等技术措施。 本规程适用于实验室人工培养冬虫夏草研究寄主幼虫的饲养。 名词解释 饲养密度：指单位面积上饲养幼虫的头数。 饲料：饲喂幼虫的食物消毒：通常采用高压灭菌消毒和 84 消毒水浸泡两种方法，以达到减少杂菌的目 的。 消毒：通常采用高压灭菌消毒和 84 消毒水浸泡两种方法，以达到减少杂菌的目的。 无菌操作：指采用经过一定消毒措施处理之后的环境、器具及人为操作的工作方式。 养虫室环境条件 养虫室应选择在干净、安静、无污染的地方建立。 养虫室的组成 养虫室由幼虫室、蛹室、成虫室、操作间、消毒室和缓冲间组成。（见附录 A ） 养虫室的设计 养虫室必须设有缓
10、冲间，人员从外边进入，先进入缓冲间，再进入养虫室。 成虫室应建在北面，除南边外，其他三边都应有窗户，养虫室和蛹室不应有窗户 养虫室各房间都应有地漏，消毒室必须设有上下水。 幼虫室 应制作一些木制或铁制的饲养架和塑料质地的中转箱。中转箱不宜太大，并且要轻，便于操作和清 洗。 饲养器皿：饲养幼虫使用 9cm的玻璃或陶瓷器皿。 蛹室 要制作一些饲养架和中转箱。中转箱的大小应能容纳 10 个 15 个蛹缸即可。 饲养蛹的器皿：饲养蛹使用蛹缸（ 12cm 8 cm 20cm），也可以使用自制的玻璃器皿大小一般 12cm 8 cm 20cm。 成虫室：设有成虫笼。 成虫笼的制作：成虫笼为 50cm 40c
11、m 60cm 的木制框架，其中一侧为可以自由开启的门，除了用木板 或纤维板封底外，其余各面均用细纱网封面。笼底铺有干净白纸，便于收集卵粒。 操作间 操作间要有工作台、药品柜、显微镜、天平和冰箱等常规设备。 消毒室 消毒室要有电热干燥箱、高压蒸汽灭菌锅、蒸馏水发生器等消毒设备。 缓冲间 缓冲间要有经过消毒处理的白大褂、拖鞋、帽子及口罩。 DB63/ 6682007 2 常用设备 幼虫室、 蛹室和成虫室都应有恒温恒湿设备， 各 室还应设有换气扇、 常规杀菌设备。 幼虫室、 蛹 室 和成虫室内应使用 45W以下的红灯泡用于照明。 饲养技术 卵的孵化 卵的孵化 1.1.1.1 野外采集受精卵 在虫草蝠
12、蛾交配产卵的季节，用捕虫网将刚交配过的雌蛾捕到成虫笼中产 卵，然后将卵收集起来带回幼虫室。 1.1.1.2 室内采集受精卵 从野外将蛹挖回，放在蛹室的蛹缸内，给于适宜的温、湿度，待蛹羽化后 移入成虫笼内让其成虫交配后产卵，然后将卵收集起来。 去除未受精卵 收集的卵其中混有未受精的卵，在孵化之前应将未受精卵除去。从卵的外部形态上进 行区分（见附录 B ）。 卵的消毒 将受精卵用 1 升汞溶液浸泡 3min后，用无菌蒸馏水冲洗 3 次，再用消过毒的滤纸吸干卵 表面的水分。 卵的孵化 虫草蝠蛾卵的孵化期为 28 天 34 天，相对湿度 70% 80，温度 15 18 。要做好孵 化 室的消毒工作，当
13、孵化 25 天时，应在培养皿中加入经过消毒处理的饲料如胡萝卜等。 幼虫的饲养 饲料的消毒 将饲料表面消毒后用无菌蒸馏水冲洗 3 次，阴干或吸干饲料表面的水分，之后切成 2 mm 3 mm 厚的片状或块状放入培养皿中饲喂幼虫。 饲养密度 1 龄 3 龄的幼虫适合群体饲养，每皿以 20 条 25 条幼虫为宜。 4 龄以上的幼虫需要单体 饲养。 温、湿度 虫草蝠蛾幼虫最佳生长温度是 10 15 ，空气相对湿度为 70% 80。 日常管理 每天分早、中、晚三次开换气扇通风 30min。 饲养器械消毒，做到饲养器皿及饲养用具在使用前、后都要进行彻底的消毒。 工作人员进入观察室工作时，必须更换消过毒的白大
14、褂并在紫外灯（紫外线波长 2 80 3 1 5 饲料的消毒 将饲料表面消毒后用无菌蒸馏水冲洗 3 次，阴干或吸干饲料表面的水分，之后切成 2 mm 3 mm 厚的片 状或块状放入培养皿中饲喂幼虫。）下照射 3min 5min左右，并应严格执行无菌操作。 每隔 7 天 10 天要更换饲料。当发现有幼虫死亡时，要及时将其去除。 幼虫期内应处于黑暗状态。 观察时， 可 打开红色照明灯。 光线不足， 观察不清楚时， 使用蒙着红 布 的手电筒照亮、观察。 减少幼虫死亡率需要注意的主要环节 操作过程要小心仔细，以免碰伤幼虫。 严格执行无菌操作，注重防治细菌性和真菌性病害。 DB63/ 6682007 3 附 录 A （资料性附录） 图 养虫室房间分布图 DB63/ 6682007 4 附 录 B （资料性附录） 表 受精卵与未受精卵在外部形态上的区分 卵粒 受精卵 未受精卵 颜 色 黑色 大多为黑色，部分为乳白色 形 状 圆形或椭圆形 两端细尖 饱满程度 饱满 不 饱满且蜕裂线明显下凹 松散程度 松散，不粘连 大多粘连成小团
