1、ICS备案 号： 26483-2010青 海 省 地 方 标 准 DB63 DB63 DB63/T864 209实验室冬虫夏草蝙蝠蛾卵的孵化 技术规程 209-12-07发布 201-01-0实施青 海 省 质 量 技 术 监 督 局发布发布发布 发布 DB63/T864 2009 I 目 次前言 .II1范围 .12规范 性引 用文 件 .1 3术语 与定 义 .14常用 设备 .15虫草 蝙蝠 蛾卵 的采 集 .16虫草 蝙蝠 蛾卵 的清 选 .27虫草 蝙蝠 蛾受 精卵 的孵 化 .2 DB63/T864 2009 I 前 言本规 程由 青海 省畜 牧兽 医科 学院 提出 并归 口。 本
2、规 程起 草单 位： 青海 省畜 牧兽 医科 学院 草原 研究 所。 本规 程起 草人 :徐海 峰、 张宗 豪、 刘欣 、马 少丽 、李 玉玲 。 DB63/T864 2009 1 实验室冬虫夏草蝙蝠蛾卵的孵化技术规程1范围 本规 程规 定了 实验 室冬 虫夏 草寄 主 虫草 蝙蝠 蛾卵 的采 集、 清选 、孵 化和 日常 管理 等技 术措 施。 本规 程适 用于 实验 室人 工饲 养冬 虫夏 草寄 主昆 虫 虫草 蝙蝠 蛾卵 的孵 化，也 适 用于 实验 室人 工 饲养分 布于 青藏 高原 的其 它冬 虫夏 草寄 主昆 虫卵 的孵 化。 2规范 性引 用文 件 下列 文件 中的 条款 通过
3、本标 准的 引用 而成 为本 标准 的条 款。凡 是 注日 期的 引用 文件 ，其 随 后所 有 的修改 单 （ 不 包括 勘误 的内 容） 或 修 订版 均不 适用 于本 标准 ， 然 而 ， 鼓 励 根据 本标 准达 成协 议的 各方 研 究 是否 可使 用这 些文 件的 最新 版本 。凡 是不 注日 期的 引用 文件 ，其 最新 版本 适用 于本 标准 。 DB63/T668-2007实 验室 冬虫 夏草 寄主 幼虫 的人 工饲 养技 术规 程3术语 与定 义 下列 术语 与定 义适 用于 本规 程。3.1 虫草 蝙蝠 蛾（ HepialusarmoricanusOberthur）虫草
4、蝙蝠 蛾隶 属鳞 翅目 （ Lepidoptera）蝙 蝠蛾 科（ Hepialidae）蝠 蛾属 (HepialusFabricius)昆虫， 是冬 虫夏 草的 主要 寄主 昆虫 之一 。 3.2受精 卵 是指 虫草 蝙蝠 蛾雌 雄成 虫交 配后 雌虫 所产 的虫 卵。 3.3未受 精卵 是指 虫草 蝙蝠 蛾雌 雄成 虫未 交配 而雌 虫产 的虫 卵。3.4成虫 笼 是指 一种 自制 的用 于虫 草蝙 蝠蛾 成虫 交配 、产 卵的 木制 或铁 制笼 子。 3.5继代 饲养 是指 在人 工饲 养条 件下 ，进 行从 卵 幼虫 蛹 成虫 卵的 驯化 饲养 。3.6培育 密度 是指 在 9cm培养
5、 皿中 摆放 受精 卵的 数量 。 3.7孵化 期 是指 受精 卵开 始孵 化到 孵出 幼虫 所经 历的 时间 。4常用 设备 控温 控湿 设备 、常 规杀 菌和 消毒 设备 、昆 虫捕 虫网 、成 虫笼 、羊 毫细 毛笔 、 9cm培养 皿等 。 DB63/T864 2009 2 成虫 笼的 尺寸 按照 DB63/T668-2007实 验室 冬虫 夏草 寄主 幼虫 的人 工饲 养技 术规 程 执行 。5虫草 蝙蝠 蛾卵 的采 集5.1野外 直接 采集 虫草 蝙蝠 蛾虫 卵每年 七月 ，在 野外 虫草 蝙蝠 蛾成 虫交 配产 卵的 季节 ，用 昆虫 捕虫 网将 其雌 雄成 虫捕 到成 虫笼 中
6、交 配 、产卵 ，然 后将 卵收 集起 来带 回室 内。 5.2室内 采集 虫草 蝙蝠 蛾虫 卵从野 外挖 回虫 草蝙 蝠蛾 的蛹 或继 代饲 养的 蛹， 在室 内羽 化后 ，将 雌雄 成虫 按 1:2.5比例 的放 入成 虫笼中 进行 交配 、产 卵。 6虫草 蝙蝠 蛾卵 的清 选 孵化 前剔 除虫 卵中 的未 受精 卵、 成虫 的残 翅或 断腿 ， 清选 后的 受精 卵应 及时 进行 孵化 。 受精 卵与 未受 精卵 在外 部形 态上 的区 别见 表 1。表 1表 1受精 卵与 未受 精卵 在外 部形 态上 的区 别 7虫草 蝙蝠 蛾受 精卵 的孵 化7.1受精 卵的 消毒在无菌的环境中，
7、将受精卵放入 1 升汞溶液（ HgCl2）中浸泡 3分钟，取出后，用无菌水冲洗 3次 ，再用 无菌 细纱 布或 无菌 吸水 纸吸 干卵 表面 的水 分。随 后 用柔 软、纤 细 的羊 毫细 毛笔 沾少 许无 菌水 将卵 粘在笔 尖上 ，摆 放在 铺有 潮湿 滤纸 的无 菌培 养皿 （ 9cm）中 。 7.2培育 密度每个 培养 皿（ 9cm）内 摆放 100粒 150粒卵 。7.3孵化 环境孵化 环境 为无 菌黑 暗环 境， 应 保持 环境 温、 湿度 相对 恒定 。环境 温度 15 18 空气 相对 湿度 70% 80%7.4日常 管理 7.4.1认真 做好 孵化 室的 日常 消毒 工作 ，
8、严 格执 行无 菌操 作， 杜绝 杂菌 污染 。7.4.2工作 人员 进入 孵化 室， 必须 穿戴 经消 毒的 衣、 帽、 鞋及 口罩 。7.4.3每天 分早 、中 、晚 三次 检查 培养 皿中 滤纸 的湿 度， 添加 无菌 水保 持滤 纸潮 湿 ，其 湿润 程度 以不能见 明水 为原 则。 7.4.4孵化 用的 培养 皿、 羊毫 细毛 笔、 蒸馏 水等 器具 都要 进行 灭菌 处理 ，做 到所 用器 具在 使用 前、 后都要 进行 彻底 的灭 菌。 7.5孵化 期虫草 蝙蝠 蛾受 精卵 的孵 化期 为 28d 34d，当 孵化 进行 到第 25d时， 应在 培养 皿中 加入 经消 毒处 理的饲料 。 或 者 孵化 出幼 虫后 ， 每 天 把刚 孵化 出的 幼虫 用羊 毫细 毛笔 尖沾 少许 无菌 水将 幼虫 粘在 笔尖 上， 移入事 先准 备好 的放 有饲 料及 潮湿 滤纸 的培 养皿 中。 移动 初孵 幼虫 时， 应尽 量让 其自 己爬 上、 爬下 笔尖 ，避免 笔尖 戳伤 幼虫 。 幼虫 饲养 按照 DB63/T668-2007实 验室 冬虫 夏草 寄主 幼虫 的人 工饲 养技 术规 程 执行 。 外观 受精卵 未受精卵颜色 黑色 大多为黑色，部分为乳白色形状 圆形或椭圆形 两端细尖饱满程度 饱满 不 饱满且蜕裂线明显下凹松散程度 松散，不粘连 大多粘连成小团
