1、I ICS 65.150CCS B 52 DB4407江 门 市 地 方 标 准DB4407/T 65 2020弯 口 吸 虫 病 防 治 技 术 规 程 Technical regulation for controlling of clinostomiasis 2020-09-07发 布 2020-10-07实 施江 门 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布 DB4407/T 652020 1 前 言本 文 件 按 照 GB/T1.1-2020 标 准 化 工 作 导 则 第 1部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起草 。 请 注 意 本 文 件
2、的 某 些 内 容 可 能 涉 及 专 利 。 本 文 件 的 发 布 机 构 不 承 担 识 别 这 些 专 利 的 责 任 。本 文 件 由 江 门 市 市 场 监 督 管 理 局 、 江 门 市 农 业 农 村 局 归 口 管 理 。本 文 件 起 草 单 位 ： 江 门 市 畜 牧 兽 医 技 术 推 广 站 、 江 门 市 渔 业 技 术 推 广 站 、 蓬 江 区 丰 昇 野 生 动 物 驯 养繁 殖 实 验 场 。本 文 件 主 要 起 草 人 ： 冯 开 容 、 李 万 荣 、 陈 明 波 、 邓 乐 平 、 罗 嘉 轩 、 丘 倬 希 、 汪 海 涛 、 黄 晓 东 、 曹
3、建伟 、 陈 凤 团 、 李 劲 丰 。 DB4407/T 652020 2 弯 口 吸 虫 病 防 治 技 术 规 程1 范 围本 文 件 规 定 了 弯 口 吸 虫 病 防 治 技 术 的 术 语 和 定 义 、 弯 口 吸 虫 病 的 诊 断 、 防 控 措 施 以 及 病 害 动 物 和 病害 动 物 产 品 的 处 理 。本 文 件 适 用 于 规 模 化 水 产 和 水 禽 养 殖 单 位 弯 口 吸 虫 病 的 监 测 、 诊 断 和 预 防 控 制 。2 规 范 性 引 用 文 件下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必
4、 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ，仅 注 日 期 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件 。 GB 11607 渔 业 水 质 标 准GB 13078 饲 料 卫 生 标 准GB 16548 病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 生 物 安 全 处 理 规 程NY/T 1167 畜 禽 场 环 境 质 量 及 卫 生 控 制 规 范NY 5027 无 公 害 食 品 畜 禽 饮 用 水 水 质NY/T 5030 无 公 害
5、农 产 品 兽 药 使 用 准 则NY/T 5038 无 公 害 食 品 家 禽 养 殖 生 产 管 理 规 范NY 5051 无 公 害 食 品 淡 水 养 殖 用 水 水 质3 术 语 和 定 义3.1 弯 口 吸 虫 病 clinostomiasis 弯 口 吸 虫 病 由 中 华 弯 口 吸 虫 （ Clinostomum sinensis） 或 扁 弯 口 吸 虫 (Clinostomum complanatum)侵 入 机 体 引 起 的 禽 类 或 鱼 类 的 寄 生 虫 病 。 弯 口 吸 虫 还 可 侵 入 人 、 两 栖 和 爬 行 类 机 体 ， 引 起 相 应 的 寄
6、生 虫病 。3.2 生 活 史 life history生 活 史 是 指 弯 口 吸 虫 的 完 成 一 个 世 代 的 生 长 、 发 育 和 繁 殖 的 过 程 。 主 要 包 括 卵 、 毛 蚴 、 胞 蚴 、 雷 蚴 、尾 蚴 、 囊 蚴 、 成 虫 阶 段 。3.3 临 床 诊 断 clinical diagnosis临 床 诊 断 是 指 兽 医 工 作 者 对 疑 似 患 病 动 物 进 行 疾 病 检 查 ， 并 对 病 因 、 发 病 机 理 作 出 鉴 别 。 DB4407/T 652020 3 3.4 剖 检 necropsy剖 检 是 动 物 解 剖 后 ， 通 过
7、肉 眼 和 显 微 镜 观 察 ， 检 查 其 组 织 或 器 官 病 变 。3.5 实 验 室 诊 断 laboratory diagnosis通 过 物 理 、 化 学 、 生 物 等 实 验 室 检 测 方 法 对 动 物 样 本 进 行 检 验 ， 检 验 结 果 作 为 确 诊 参 考 指 标 。4 弯 口 吸 虫 病 的 诊 断4.1 流 行 特 点该 病 全 国 各 地 均 有 发 现 ， 流 行 季 节 为 （ 3 9） 月 份 。 弯 口 吸 虫 胞 蚴 、 雷 蚴 阶 段 主 要 寄 生 于 淡 水 螺 ； 囊 蚴 阶 段 主 要 寄 生 于 淡 水 鱼 类 ， 也 可 寄
8、 生 于 两 栖 类 和 爬 行 类 ； 童 虫 、 成 虫 阶 段 阶 段 主 要 感 染 禽 类 ， 国 外也 有 记 录 曾 感 染 人 类 。 弯 口 吸 虫 病 在 淡 水 鱼 类 中 流 行 广 ， 传 播 快 ， 感 染 率 高 ， 养 殖 场 可 在 不 到 两 周 时 间 ，90 的 苗 种 池 均 感 染 此 病 ， 发 病 的 主 要 是 规 格 较 小 的 鱼 种 ， 尤 以 体 长 （ 4 7） cm的 淡 水 鱼 苗 种 感 染 率 最高 ， 致 死 率 可 达 100%。4.2 临 床 症 状4.2.1 禽 类 主 要 表 现 精 神 不 振 ， 食 欲 下 降
9、,逐 渐 消 瘦 ,羽 毛 松 乱 、 光 泽 减 少 ， 皮 肤 苍 白 。 口 腔 内 特 别 是咽 喉 表 皮 上 、 舌 基 部 、 下 颌 等 处 ， 有 柚 子 肉 粒 样 小 虫 寄 生 ， 并 引 起 继 发 或 并 发 症 状 。4.2.2 鱼 类 早 期 症 状 不 明 显 ， 后 期 可 出 现 狂 游 、 暗 浮 、 体 表 及 尾 鳍 尖 端 发 黑 等 症 状 ， 生 长 发 育 受 阻 。4.3 剖 检 变 化4.3.1 禽 类 一 般 可 见 咽 喉 表 皮 上 、 舌 基 部 、 下 颌 、 食 道 内 等 处 有 柚 子 肉 粒 样 小 虫 寄 生 ， 可
10、见 局 部 创 伤 、化 脓 病 灶 等 病 理 变 化 。 4.3.2 鱼 类 头 部 及 躯 干 部 可 见 橘 黄 色 胞 囊 ， 腹 鳍 、 臀 鳍 的 浅 肌 层 、 体 侧 浅 层 肌 肉 中 或 可 见 胞 囊 。4.4 实 验 室 诊 断4.4.1 成 虫 检 查成 虫 呈 米 黄 色 ， 大 小 为 约 6mm 2mm； 在 400 显 微 镜 下 ， 虫 体 顶 端 有 1个 口 吸 盘 ， 下 为 肌 质 的 咽 ， 无食 道 ， 肠 的 二 盲 支 直 至 虫 体 后 端 ， 伸 延 之 中 分 出 侧 支 ； 腹 吸 盘 位 于 虫 体 1/4处 ， 大 于 口 吸
11、盘 ； 睾 丸 1对 ，纵 列 、 分 叶 ， 两 睾 丸 之 间 有 1卵 巢 原 基 。4.4.2 囊 蚴 检 查胞 囊 呈 橘 黄 色 ， 圆 形 或 长 圆 形 ， 直 径 约 2.5mm； 胞 囊 中 的 囊 蚴 体 长 约 4mm。 初 期 似 尾 蚴 ， 消 化 系 统 保持 从 口 经 管 状 通 道 到 达 囊 状 的 原 肠 ； 后 期 身 体 珊 状 组 织 形 成 复 杂 网 状 构 造 ， 并 充 满 黄 色 的 物 质 ， 整 体 呈浅 黄 色 。 4.4.3 虫 卵 检 查4.4.3.1 检 查 对 象 DB4407/T 652020 4 对 禽 类 口 腔 内
12、容 物 或 呕 吐 物 作 虫 卵 检 查 。4.4.3.2 饱 和 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 漂 浮 法操 作 过 程 如 下 ：a) 将 口 腔 内 容 物 或 呕 吐 物 置 于 小 烧 杯 中 , 加 入 (10 20)倍 体 积 饱 和 硫 代 硫 酸 钠 溶 液 ,充 分 混 匀 ；b) 用 孔 径 0.450mm 的 铜 纱 网 过 滤 , 将 滤 液 置 平 底 试 管 内 ， 静 置 30 min左 右 ， 则 虫 卵 上 浮 ；c) 用 直 径 (0.5 1.0)cm 的 金 属 圈 平 着 接 触 滤 液 表 面 , 提 起 后 将 粘 于 金 属 圈 上 的 液 膜
13、抖 落 于 载 玻片 上 ， 加 盖 玻 片 镜 检 。4.4.3.3 蒸 馏 水 沉 淀 法操 作 过 程 如 下 ：a) 水 洗 沉 淀 法 将 粪 样 (10 20)倍 体 积 蒸 馏 水 充 分 搅 拌 成 混 悬 液 ；b) 用 孔 径 0.450mm 的 铜 纱 网 过 滤 ,于 锥 形 瓶 , 用 水 反 复 冲 洗 ， 直 至 上 层 液 清 晰 透 明 为 止 ；c) 取 沉 渣 涂 片 镜 检 。 4.4.4 分 子 生 物 学 检 查采 用 聚 合 酶 链 反 应 (Polymerase Chain Reaction, PCR)检 测 技 术 通 过 扩 增 方 法 检
14、测 弯 口 吸 虫 基 因 组中 特 异 性 的 DNA。4.4.5 水 体 尾 蚴 检 查4.4.5.1 用 38 m 孔 径 的 尼 龙 过 滤 网 制 成 直 径 14cm, 高 25cm的 圆 椎 形 袋 ， 在 待 检 水 体 中 打 捞 10次 ，然 后 将 过 滤 袋 卷 起 插 入 盛 有 浓 度 为 10%甲 醛 溶 液 试 管 中 , 浸 泡 (20 30) min。4.4.5.2 取 出 过 滤 袋 ,取 下 回 形 针 ， 把 过 滤 袋 放 入 装 有 (600 800)ml 无 氯 的 自 来 水 的 量 杯 中 荡 洗 , 翻过 袋 面 再 荡 洗 ,沉 淀 (5
15、0 60)min。4.4.5.3 弃 去 2/3上 清 液 体 ,剩 余 液 体 通 过 滤 板 上 放 有 快 速 定 量 滤 纸 的 平 底 漏 斗 自 然 过 滤 。4.4.5.4 用 酸 性 品 红 溶 液 染 色 ,盐 酸 溶 液 脱 色 ， 取 出 滤 纸 ,用 铝 制 的 等 距 离 样 板 划 线 ,用 15 解 剖 镜在 白 色 背 景 下 观 察 ,尾 蚴 呈 红 色 ,再 用 (25 40) 的 解 剖 镜 确 认 。 4.5 结 果 判 定4.5.1 怀 疑 病 例符 合 指 标 4.2。4.5.2 疑 似 病 例怀 疑 病 例 符 合 指 标 4.3、 4.4.1、
16、4.4.2、 4.4.3之 一 。4.5.3 确 诊 病 例疑 似 病 例 符 合 指 标 4.4.4。5 防 控 措 施 5.1 环 境 控 制5.1.1 禽 舍 保 持 干 燥 ,温 度 适 宜 ,并 适 度 通 风 ,提 供 良 好 的 生 活 环 境 。 按 NY/T 1167 操 作 并 符 合 其 要 求 。 DB4407/T 652020 5 5.1.2 池 塘 投 苗 前 ， 应 彻 底 消 灭 淡 水 螺 类 。 进 水 时 使 用 筛 孔 （ 0.180 0.250） mm的 过 滤 网 过 滤 。 每 （ 1020） d 换 水 一 次 。 溶 解 氧 保 持 （ 5 8
17、） mg/L。5.1.3 使 用 防 鸟 网 隔 离 野 鸟 。5.2 避 免 交 叉 传 播带 水 上 运 动 场 的 禽 舍 ,避 免 与 其 他 水 体 交 叉 传 播 。5.3 饲 养 密 度 控 制5.3.1 禽 类 饲 养 密 度 应 符 合 NY/T 5038 的 要 求 。5.3.2 鱼 类 应 按 不 同 品 种 和 规 格 ， 科 学 投 放 。5.4 饲 料 质 量 控 制 应 饲 喂 符 合 GB 13078要 求 的 全 价 饲 料 ,禁 止 使 用 冰 鲜 杂 鱼 。5.5 饮 水 质 量 控 制禽 类 饮 用 水 应 符 合 NY 5027-2008 的 要 求
18、。 养 鱼 水 源 水 质 应 符 合 GB 11607的 规 定 。 养 殖 池 塘 水 质 应符 合 NY 5051的 规 定 。5.6 消 毒 控 制 。5.6.1 鱼 苗 、 鱼 种 应 用 (3% 5%)食 盐 水 浸 泡 消 毒 5 10min投 放 。 半 月 后 ， 每 m水 体 使 用 （ 1 2） g漂 白 粉 （ 28%有 效 氯 ） 泼 洒 一 次 ； 每 （ 15 30） d 用 （ 1.0 1.5） mg/L漂 白 粉 全 池 泼 洒 ， 进 行 池 塘 消 毒 。病 鱼 池 中 使 用 过 的 鱼 具 须 用 聚 维 酮 碘 浸 泡 （ 1 2） h 进 行 消
19、毒 ， 药 物 浓 度 为 10%聚 维 酮 碘 稀 释 500倍 。病 鱼 池 水 未 经 消 毒 不 得 排 放 。 聚 维 酮 碘 对 金 属 制 品 有 腐 蚀 性 ， 对 金 属 器 械 不 宜 长 期 浸 泡 消 毒 。5.6.2 禽 场 应 定 期 消 毒 。 禽 场 内 应 设 置 净 道 和 污 道 , 禽 场 和 禽 舍 门 口 应 设 立 消 毒 池 , 消 毒 池 放 0.5%百毒 杀 溶 液 。 对 场 内 道 路 的 地 面 和 明 沟 表 面 可 用 生 右 灰 消 毒 药 进 行 消 毒 ， 平 时 预 防 消 毒 建 议 每 月 两 次 ,发 病 时 消 毒
20、可 1次 /d。 控 制 人 员 出 入 ,定 期 更 换 消 毒 药 水 。5.7 尾 蚴 控 制全 池 泼 洒 精 制 敌 百 虫 ， 每 隔 24h泼 1次 ， 连 续 用 2次 ， 用 药 24h后 换 水 ,根 据 池 水 体 PH值 决 定 用 药 浓 度 ，PH值 （ 6.5 7） 时 用 0.4ppm， 而 PH值 （ 8 9） 时 用 0.3ppm。 休 药 期 500度 日 。5.8 淡 水 螺 控 制池 中 如 发 现 淡 水 螺 ， 可 在 傍 晚 将 草 扎 成 数 小 捆 放 入 池 中 诱 捕 ， 于 翌 日 清 晨 把 草 捆 捞 出 ， 将 其 消 灭 ，连
21、续 7d。 也 可 用 烟 酸 苯 胺 杀 灭 淡 水 螺 ， 浓 度 为 0.4g/m水 体 ， 休 药 期 500度 日 。 本 品 对 皮 肤 有 强 烈 刺 激 ，使 用 时 要 避 免 与 裸 露 皮 肤 接 触 。5.9 定 期 监 测在 流 行 期 应 加 强 定 期 监 测 ， 具 体 按 4.2、 4.3和 4.4操 作 。 禽 类 感 染 监 测 每 半 个 月 一 次 ， 水 体 尾 蚴 监 测 每 半 个 月 一 次 ， 鱼 类 感 染 监 测 每 2个 月 一 次 。5.10 药 物 防 治 措 施 DB4407/T 652020 6 5.10.1 患 禽 按 体 重
22、 内 服 阿 苯 达 唑 （ 10 20） mg/kg， 1次 /d， 连 用 2 次 。 休 药 期 30d。 对 发 病 池 塘 全 池泼 洒 精 制 敌 百 虫 溶 液 ， 具 体 操 作 参 考 5.7。5.10.2 上 述 方 法 治 疗 后 经 过 14d， 参 考 4.5结 果 判 定 ， 阴 性 为 治 愈 ， 阳 性 为 未 治 愈 。5.10.3 用 药 符 合 NY/T 5030无 公 害 农 产 品 兽 药 使 用 准 则 。6 病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 处 理病 害 动 物 和 病 害 动 物 产 品 应 按 照 GB 16548病 害 动 物 和
23、病 害 动 物 产 品 生 物 安 全 处 理 规 程 进 行 处 理 。 DB4407/T 652020 7 AA附 录 A（ 资 料 性 附 录 ）引 物 序 列Primer pairs for ITS: F 5 -GTAACAAGGTTTCCGTAGGTGAA-3 ,R 5 -CCTGGTTAGTTTCTTTTCCTCCGC-3 ITS sequences in GenBank (MK7 9 6 8 2 6 2 8 )1 ttgtgtgcta attgcatgca tatgaattta tataaatgcg ccaccgccct ggcgtaatac6 1 atatccgtga atac
24、ggaaat atttaaatac acttttgtgt atggaattga cggaatctgg1 2 1 ccgtacctat ggtgcggtac agcctacccg tatctgttgc tcatatgggc ttcggttcat 1 8 1 ttgtagcaca gtactaagta ggcttaattg accggggaac ctcactgtca gatgctctga2 4 1 tggtattctt ttgattttcg aatcatttgt tttgccagga gcgacagaaa gtgcatagct3 0 1 ctagggttat gtgcaaggtt caatgaag
25、gg tgcagattat tatctgcatt ctccccccgg3 6 1 gctgtttcac cccggtagta ttattctgcc atttttacat tgttcaagca atctgagtca4 2 1 gttattctgg ttcggaaagc tgccataaca tgcacctggt tgttgatcaa ctggactgca4 8 1 tgaacgttcg cctggcggtg ctctatcctg ggctagaacg gtaaccctag tttctgtgca5 4 1 ttcgggtaac cgggtgtata gaacatacaa ctctgagcgg tg
26、gatcactc ggctcgtgtg6 0 1 tcgatgaaga gtgcagccaa ctgtgtgaat taatgtgacc tgcatactgc tttgaacatc6 6 1 gacctcttga acgcatattg cggccgcagg atatcctgtg gccacgcctg gccgagggtc7 2 1 ggcttataat ctatcacgac gcacaataag tcgtggcttg gatgtgtgcc agctggcgtg7 8 1 atttcccgct tacttaaagt ggggtgccgg atctatggct ccttcctaat gtgtcca
27、gct8 4 1 acactcaagt ccaaagatga tatttgatgg acagggttgt ggtggtggag aatgctcggg9 0 1 tcgtggctta atgagaatgt gataaacgtt cacgcctgat gtcattgtct atcattgcac 9 6 1 ccatgttcgg gcttgttctg taactgatga ttatatataa taPrimer pairs for COI: F 5 -ATTCG(R)TTAAAT(Y)TKTGTGA-3 , R 5 -CCAAACYAACACMGACAT-3 CO1 sequences in Gen
28、Bank (MK8 0 1 7 1 1 1 7 )1 tattaggtgt gtgaggcggg ttcttaggtt tatctttaag tttacttatt cgattaaatt6 1 tgtgtgatcc gtattataaa ttgatttcta cagaggttta taaatttgtt attactaatc1 2 1 atggtattgc tatgatattc ttttttttaa tgccagtctt aataggcggg tttggtaatt1 8 1 atttacttcc tttacttttg ggtttagttg atttgaattt acctcggttg aaagctt
29、taa2 4 1 gtgcatgatt aatgttgcct tctattgtct gtttaagatt gagaatgtat catggtgccg3 0 1 ggataggttg aactttttat ccccccttat ctggttttgg ttattcgggg gtaggtactg3 6 1 attttttaat gtttgcttta catttagcag gtgtttctag gttgttaggt tcaataaatt4 2 1 ttatttgtac tataatgggt cgtatggatc agtggtttag aatgcgtatg tcggtgatag 4 8 1 tttgggctta tttgtttact tctatattat tggtattgtc tttgcctgtt ttagctgctg5 4 1 ctataacaat gttattattt gatcgtaaat ttagagct_
