1、 ICS 65.020.40 CCS B 61 44 广东 省 地方 标准 DB44/T 2284 2021 互叶白千层 组培育苗 技术规程 Code of practice on Melaleuca alternifolia propagation via tissue culture 2021 - 03 - 06 发布 2021 - 06 - 06 实施 广东 省市场监督管理局 发 布 DB44/T 2284 2021 I 前 言 本文件按照 GB/T 1.1 2020标准化工作导则 第 1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 本文件由广东省林业局 提出、归口并组织实施。 本文件
2、起草单位： 广东省林业科学研究院 、 广东尚善环境建设有限公司 、广东森霖造绿有限公司 。 本文件主要起草人： 张谦、周丽华、汪迎利、何波祥、连辉明、蔡燕灵、白青松、谢佩吾、梁东成、 侯晨、尧俊、陈春如、林什全、邱文霞、陈一群、蓝燕群。 DB44/T 2284 2021 1 互叶白千层组培育苗技术规程 1 范围 本文件规定了互叶白千层（ Melaleuca alternifolia (Maiden & Betche) Cheel） 组织培养育苗技术的外 植体、接种、瓶苗移植、苗木管理、苗木出圃和档案管理等技术要求。 本文件适用于互叶白千层组织培养育苗。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过
3、文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6001 育苗技术规程 GB/T 26514 互叶白千层（精）油，松油烯 -4-醇型 茶树（精）油 LY/T 1000 容器育苗技术 LY/T 1770 桉树无性系组培快繁技术规程 LY/T 1882 林木组织培养育苗技术规程 DB44/T 1142 互叶白千层栽培技术规程 DB44/T 1914 枫香组培育苗技术规程 3 术语和定义 LY/T 1770和 LY/T 1882界定的术语和定义适用于本文件。 4 外植体
4、 材料采集 选取符合 GB/T 26514给定 的精油质量标准 的 无性系 中 健壮、无病虫害的单株。在连续 3 d晴好天气 后，采集嫩枝作为外植体材料。 消毒 采用超声波清洗仪，用 0.2%灭菌净处理外植体 10 min15 min，并用无菌水清洗 6次；再在无菌条件 下，用每 100 ml添加 1滴（ 0.05 ml）吐温 -80的 70%酒精溶液浸没外植体材料，轻微摇动 3 min5 min后， 用无菌水冲洗 6次。 5 瓶苗培育 培养基 DB44/T 2284 2021 2 采用改良 DCR和 MS为基本培养基，添加不同的激素，分别配置初代培养基、增殖培养基和生根培 养基，培养基用 H
5、Cl调整 pH值为 5.8。 培养基配方参照附录 A执行 。 培养条件 培养温度 25 C30 C，相对湿度 65%70%，光照强度 1500 lx3000 lx，每天光照时间 12 h16 h。及 时清除污染材料。 初代培养 在无菌环境下，将消毒好的外植体切成 2.0 cm2.5 cm长的带芽茎段，接种在初代培养基中，每瓶接 种 1段；培养 6 d15 d，诱导出芽。 增殖培养 在无菌环境下，切割 初代或继代培养诱导的幼芽或丛生芽，切割成每丛 3个 4个小芽丛，按 250 ml 培养瓶接种 6丛 8丛芽的方式转接至增殖培养基中，培养 15 d25 d；外殖体培养时间超过 3 a，或继代培 养
6、 36代 40代后，更新培养材料。 生根培养 切割长 1.5 cm2.0 cm的继代培养芽，转移至生根培养基中培养 7 d10 d，诱导生根。 6 瓶苗移植 炼苗 在培养室生根培养 7 d10 d后，转移至遮光度为 70%的大棚内炼苗 25 d35 d。 移植 6.2.1 芽苗出瓶 炼苗室芽苗平均高达 3 cm以上时，将瓶苗和培养基同时倒出，用清水洗净培养基，保持幼根完整， 不受损伤。选择根系发达、植株挺立、生长健壮的芽苗备用。 6.2.2 容器与基质 以 4 cm 10 cm的营养袋作容器时，黄心土为基质；以 28孔（ 4 cm 10 cm）育苗穴盘作容器时，泥 炭土、珍珠岩、椰糠和枯枝落叶
7、腐熟质按 60： 25： 10： 5比例混合均匀作基质 。 基质填充入育苗容器中 备用。芽苗定植前 2 d，用 0.5 g/L的多菌灵溶液淋透育苗基质，消毒完全。 6.2.3 芽苗移植 将备用的芽苗移植到准备好的容器中，保持根系舒展。 7 苗木管理 湿度与光照 移植后 3 w4 w内，保持基质持水率在 60%80%，遮光度在 70%80%；之后揭去遮荫设施，保持基 质持水率。 DB44/T 2284 2021 3 施肥 待小苗长出新叶后，用含 1 浓度氮磷钾的复合肥水溶液喷施，每 2 w喷 1次；移植 4 w后，用 3 浓 度氮磷钾的复合肥水溶液喷施，每 2 w喷 1次。 病菌控制 用多菌灵
8、1000倍液、甲基托布津 1000倍液和百菌清 800倍液交替喷洒苗木，移苗当天 1次，以后每 2 w喷 1次，共施 2次 3次。 8 苗木出圃 检疫 检疫宜在苗圃进行，由植物检疫部门完成，并签发检疫合格证后方可出圃。 检验 采取随机抽样方法检验， 1000株 以下按 10%比例抽样检验； 1000株以上的，先完成 1000株 10%抽样 检验，再对超出 1000株部分按 2%比例抽样检验。 苗木质量 出圃前应进行苗木调查和分级，生长正常、无病虫害、无机械损伤、主干粗壮的为合格苗；苗木高 35 cm以上、地径 0.45 cm以上的为 级苗；苗木高 25 cm35 cm、地径 0.35 cm0.
9、45 cm的为 级苗。 出圃 选择 级苗以上苗木，出圃造林。 9 档案管理 按照 GB/T 6001和 LY/T 1770的要求执行。 DB44/T 2284 2021 4 A A 附录 A （资料性） 互叶白千层组织培养的培养基配方 表 A.1给出了互叶白千层组织培养中培养基的配方。 表 A.1 互叶白千层组织培养的培养基配方 培养基成份 初代 /增殖培养基（ mg/L） 生根培养基（ mg/L） KNO3 510 950 NH4NO3 600 825 KH2PO4 255 85 Ca(NO3)24H2O 834 CaCl22H2O 128 220 MgSO47H2O 555 185 FeS
10、O47H2O 27.8 27.8 Na2-EDTA 37.3 37.3 MnSO44H2O 22.3 22.3 ZnSO47H2O 8.6 8.6 H3BO3 6.2 6.2 KI 0.83 0.83 Na2MoO42H2O 0.25 0.25 CuSO45H2O 0.025 0.025 CoCl26H2O 0.025 0.025 甘氨酸 2.0 2.0 VB1 0.1 0.1 VB6 0.5 0.5 VB3 0.5 0.5 肌醇 100 100 VC 2 2 L-半胱氨酸 5 5 PVPK30 500 500 蔗糖 30,000 15,000 6-BA 0.52.5 KT 0.52.5 IBA 1.02.0 NAA 0.050.1 0.050.5
