1、以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 0337 2019 代替 SN/T 00371995 中华人民共和国海关总署发 布 ICS 67.050 C 53 2019-12-27 发布 2020-07-01 实施 出口植物源性食品中克百威及其代谢物 残留量的测定 液相色谱-质谱 / 质谱法 Determination of carbofuran and its metabolite residues in plant-derived food for export null HPLC-MS/MS method 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 I SN/T 00
2、37 2019 前 言 本标准按照 GB/T 1.12009 给出的规则起草。 本标准代替 SN 033795出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法。 本标准与 SN 033795 相比，主要技术性变化如下： 标准名称由出口水果和蔬菜中克百威残留量检验方法修改为出口植物源性食品中克百 威及其代谢物残留量的测定 液相色谱-质谱 / 质谱法； 增加了克百威代谢物 3-羟基克百威的检测； 扩大了标准检测的适用范围； 删减了抽样部分； 改进了样品前处理技术； 仪器方法由气相色谱法变更为液相色谱-质谱 / 质谱法。 降低了定量限，针对不同样品基质给出了克百威及其代谢物的添加回收率范围。 请注意本文件的某些
3、内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：李晓娟、吴玉平、张洋、施鹏斐、王超、李淑娟。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： SN 03371995。 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 1 SN/T 0037 2019 出口植物源性食品中克百威及其代谢物残留量的测定 液相色谱 - 质谱 / 质谱法 1范围 本标准规定了出口植物源性食品中克百威及其代谢物 3- 羟基克百威残留量的测定方法。 本标准适用于大米、小麦、大豆、花生、洋葱、油菜、菠菜、番茄、黄瓜、马铃薯、橙
4、子、苹 果、香蕉和茶叶中克百威及其代谢物 3- 羟基克百威残留量的检测和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 2763-2016食品安全国家标准食品中农药最大残留量 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法 3原理 试样加酸化乙腈振荡提取，经 QuEChERS 方法对提取液进行净化，采用液相色谱-质谱/质谱法测 定，外标法定量。 4试剂和材料 除非另有说明，所有试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 4.1乙腈 :
5、 色谱纯。 4.2甲酸：色谱纯。 4.3乙酸。 4.4氯化钠。 4.5无水硫酸镁。 4.6乙二胺 -N- 丙基硅烷化硅胶（PSA）：40 m 60 m 。 4.7十八烷基硅烷键合硅胶（C18）：40 m 60 m。 4.8石墨化炭黑（GCB）：40 m 120 m。 4.90.5% 乙酸 - 乙腈溶液：准确量取 2.5 mL 乙酸于 500 mL 容量瓶中，加入乙腈（4.1）定容，混匀。 4.100.5% 甲酸溶液：准确量取 2.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入一级水定容，混匀。 4.110.1% 甲酸溶液：准确量取 0.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入一级水定容，
6、混匀。 4.12乙腈 - 水溶液（30+70, 体积比）：取 30 mL 乙腈（4.1）和 70 mL 一级水混合均匀。 4.130.1% 甲酸 - 乙腈溶液：准确量取 0.5 mL 甲酸于 500 mL 容量瓶中，加入乙腈（4.2）定容，混匀。 4.14克百威标准物质： C 12 H 15 NO 3 ，CAS 号：1563-66-2，纯度大于等于 90%。 4.153- 羟基克百威标准品：C 12 H 15 NO 4 ，CAS 号：16655-82-6，纯度大于等于 90%。 4.16 克百威标准储备液：准确称取 10 mg （精确至 0.1mg) 克百威标准品于 10 mL 容量瓶中，用乙
7、腈 以正式出版文本为准 2 SN/T 0037 2019 （4.2）溶解并定容，配制成浓度约为 1 mg/ mL 的标准储备液，于 0 4 冰箱内避光保存。 4.173- 羟基克百威标准储备液：准确称取 10 mg （精确至 0.1mg) 克百威标准品于 10 mL 容量瓶中，用 乙腈（4.1）溶解并定容，配制成浓度约为 1 mg/ mL 的标准储备液，于 0 4 冰箱内避光保存。 4.18 克百威标准中间液：准确吸取适当体积的克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制成浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 0 4 冰箱内避光保存。 4.193- 羟基克百威标准中间液：准确吸取适当体积的
8、3- 羟基克百威标准储备液，用乙腈（4.1）配制 成浓度为 10.0 mg/L 的标准中间液，于 0 4 冰箱内避光保存。 4.20 克百威和 3- 羟基克百威混合标准工作液：取适量的克百威标准中间液（4.18）和 3- 羟基克百威 （4.19）标准中间液，用乙腈 - 水溶液（4.12）配制成标准工作液，该工作液需现用现配。 5仪器设备 5.1液相色谱-质谱 / 质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 5.2电子天平：感量 0.01 mg 和 0.01 g。 5.3振荡器。 5.4旋涡混合器。 5.5离心机：最高转速不低于 10 000 r/min。 5.6氮吹浓缩仪。 5.7高速离心管：规格为
9、 50 mL 和 5 mL。 6试样制备与保存 6.1试样制备 粮谷、油料及茶叶类样品：取代表性样品约 500 g , 用粉碎机全部粉碎并通过 20 目筛；水果及蔬 菜类样品：取代表性样品约 500 g，用匀浆机或组织捣碎机均质。样品制备后分别装入洁净的盛样瓶 内，密封并标明标记。 6.2试样保存 粮谷、油料及茶叶类试样于 0 4 保存；水果及蔬菜类试样于 -18 以下冷冻保存。在抽 样及制样的过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 7测定步骤 7.1提取 7.1.1蔬菜和水果类：称取 5 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 0.5% 乙酸
10、- 乙腈溶 液（4.9），涡旋混匀后振荡提取 30 min，加入约 2 g 氯化钠和约 2 g 无水硫酸镁，涡旋混匀，20 000 r/min 条件下离心 3 min，取上清液待净化。 7.1.2粮谷、油料类和茶叶类：称取 2 g 试样（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管中，加入 5 mL0.5% 乙酸溶 液（4.10），涡旋混匀静置 30min，加入 10 mL 0.5% 乙酸 - 乙腈溶液（4.9），涡旋混匀后振荡提取 30 min， 加入约 2 g 氯化钠和约 2 g 无水硫酸镁，涡旋混匀，于 10 000 r/min 条件下离心 3 min，取上清液待净化。 7.2净化 准确
11、称取 250 mg 无水硫酸镁、100 mg PSA、100 mg C18 和 50 mg GCB 净化材料加入 5 mL 高速 以正式出版文本为准 3 SN/T 0037 2019 离心管中。准确移取 2mL 上清液（7.1）加入 5 mL 高速离心管中，涡旋混匀，于 10 000 r/min 离心 3 min，取 1 mL 上清液置于玻璃管中，于 40 下氮气吹至近干，再加入 1.0 mL 乙腈 - 水溶液（4.12） 充分溶解定容，过 0.2 m 尼龙滤膜，待 LC-MS/MS 测定。 7.3液相色谱 - 质谱 / 质谱测定 7.3.1液相色谱条件 7.3.1.1色谱柱：C 18 ，10
12、0 mm2.1 mm1.7 m ，或性能相当者。 7.3.1.2柱温： 45 。 7.3.1.3进样量：5 L。 7.3.1.4流动相及梯度洗脱条件见表 1。 表 1流动相及梯度洗脱条件 时间 /min 流速 /mL/min 流动相 A/%（0.1% 甲酸 - 乙腈） 流动相 B/%（0.1% 甲酸溶液） 0.00 0.4 5.0 95.0 0.50 0.4 5.0 95.0 2.00 0.4 95.0 5.0 3.00 0.4 95.0 5.0 3.50 0.4 5.0 95.0 7.3.2质谱条件 仪器质谱条件参见附录 A。 7.3.3定性测定 按照 7.3.1 的条件测定标准溶液及样液，
13、如果样液与标准溶液质量色谱峰保留时间相差不超过 2.5%，在扣除背景后的质谱图中，所选择的监测离子全部出现，且定性离子的相对丰度（用相对 于最强离子丰度的强度百分比表示）与浓度相当的标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差 不超过表 2 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。 表 2定性确证时相对离子丰度最大容许误差 相对离子离子（基峰） 50 20 50 10 20 10 允许的相对偏差 20 25 30 50 7.3.4定量测定 在 7.3.1 仪器最佳工作状态下，对标准工作溶液进样，以待测物色谱峰峰面积为纵坐标，标准工 作溶液浓度为横坐标绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品进
14、行定量，样品溶液中待测物的响应 值应在仪器测定的线性范围内；如果超出线性范围，应进行适当稀释后进样测定。在上述色谱条件下， 克百威和 3- 羟基克百威的保留时间分别约为 2.2 min 和 1.9 min，克百威和 3- 羟基克百威标准品的选 以正式出版文本为准 4 SN/T 0037 2019 择离子色谱图参见附录 B 中的图 B.1 和图 B.2。 7.4空白试验 除不加试样外，均按上述 7.1 7.3 步骤进行。 8结果计算和表述 液相色谱-质谱/质谱测定采用标准曲线法定量，按式（1）分别计算试样中克百威和 3- 羟基克百 威的残留量： 1000 1000 mf = Vc X （1） 式
15、中： X 试样中克百威和 3- 羟基克百威残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c 从标准工作曲线得到的试样溶液中被测组分的浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； f 稀释倍数； V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）； m 试样的质量，单位为为克 (g)。 计算结果应扣除空白值。 克百威在 GB 27632016 中定义的残留物为克百威及 3- 羟基克百威之和，以克百威表示。因此 按式（2）计算试样中克百威的总残留量： 93.0 3 += 羟基克百威克百威总 XXX （2） 式中： X 总 试样中以克百威表示的总残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； X 克百威 试样中克百威的残留量
16、，单位为毫克每千克（mg/kg）； X 3- 羟基克百威 试样中 3- 羟基克百威的残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）； 0.93 3- 羟基克百威换算为克百威的系数。 9定量限与回收率 9.1定量限 液相色谱-质谱/质谱检测方法对大米、小麦、大豆、花生、洋葱、油菜、菠菜、番茄、黄瓜、马 铃薯、橙子、苹果、香蕉和茶叶中克百威和 3- 羟基克百威的定量限均为 0.005 mg/kg。 9.2添加浓度和回收率 回收率数据参见附录 C。 以正式出版文本为准 5 SN/T 0037 2019 附录A （资料性附录） 质谱 / 质谱参考条件 A.1电离方式：ESI+。 A.2毛细管电压：3.0 kV
17、。 A.3源温度 : 150 。 A.4去溶剂温度 : 450 。 A.5锥孔气流 : 氮气，40 L/h。 A.6碰撞气 : 氩气。 A.7监测模式 : 多反应监测 (MRM)。 A.8多反应监测离子对、锥孔电压和碰撞能量见表 A.1。 表 A.1监测离子对、锥孔电压和碰撞能量 化合物 英文名称 母离子 子离子 锥孔电压 /V 碰撞能量 /eV 驻留时间 克百威 carbofuran 222.1 123.0* 20 21 AUTO 165.1 20 16 AUTO 3- 羟基克百威 carbofuran-3-hydroxy 238.0 181.0* 25 10 AUTO 163.0 25 1
18、6 AUTO 注： 对于不同质谱仪器，仪器参数可能存在差异，测定前应将质谱参数优化到最佳。 以正式出版文本为准 6 SN/T 0037 2019 附录B （资料性附录） 标准物质色谱图 1） 1） 图 B.1 克百威 1.0 ng/mL 标准溶液质谱图 1） 1） 图 B.2 3- 羟基克百威 1.0 ng/mL 标准溶液质谱图 以正式出版文本为准 7 SN/T 0037 2019 附录C （资料性附录） 添加回收率 表 C.1不同基质中克百威添加水平及回收率范围 基质名称 添加浓度 /(mg/kg) 回收率范围 /% 大米 0.005 72 83 0.01 77 87 0.1 83 89 0
19、.5 81 84 小麦 0.005 69 85 0.01 70 75 0.1 71 92 0.5 72 95 大豆 0.005 62 90 0.01 71 78 0.1 74 88 0.5 72 94 花生 0.005 66 87 0.01 97 108 0.1 91 104 0.5 83 97 洋葱 0.005 77 116 0.01 65 88 0.1 76 88 0.5 77 83 1.0 81 101 油菜 0.005 62 105 0.01 73 76 0.1 73 93 0.5 99 108 菠菜 0.005 71 106 0.01 73 78 以正式出版文本为准 8 SN/T 0
20、037 2019 基质名称 添加浓度 /(mg/kg) 回收率范围 /% 菠菜 0.1 80 87 0.5 97 107 番茄 0.005 63 108 0.01 74 77 0.1 75 95 0.5 98 104 黄瓜 0.005 78 99 0.01 65 78 0.1 76 86 0.5 98 111 马铃薯 0.005 67 93 0.01 65 80 0.1 74 94 0.5 97 105 橙子 0.005 70 85 0.01 70 91 0.1 72 92 0.5 92 98 苹果 0.005 62 91 0.01 77 85 0.1 76 83 0.5 103 114 香蕉
21、 0.005 63 90 0.01 74 86 0.1 82 95 0.5 80 104 茶叶 0.005 61 90 0.01 76 108 0.1 90 107 0.5 79 98 表 C.1 续 以正式出版文本为准 9 SN/T 0037 2019 表 C.2不同基质中 3- 羟基克百威添加水平及回收率范围 基质名称 添加浓度 (mg/kg) 回收率范围 (%) 大米 0.005 64 86 0.01 85 96 0.1 85 98 0.5 74 96 小麦 0.005 69 85 0.01 71 75 0.1 76 99 0.5 72 93 大豆 0.005 62 90 0.01 88
22、 119 0.1 101 115 0.5 87 96 花生 0.005 66 87 0.01 99 115 0.1 105 115 0.5 74 86 洋葱 0.005 77 116 0.01 71 75 0.1 70 91 0.5 93 116 1.0 77 101 油菜 0.005 62 105 0.01 78 88 0.1 74 93 0.5 92 115 菠菜 0.005 71 106 0.01 91 102 0.1 83 91 0.5 92 113 番茄 0.005 63 108 0.01 83 91 以正式出版文本为准 10 SN/T 0037 2019 基质名称 添加浓度 (mg
23、/kg) 回收率范围 (%) 番茄 0.1 76 95 0.5 91 116 黄瓜 0.005 78 99 0.01 81 96 0.1 79 85 0.5 98 113 马铃薯 0.005 67 93 0.01 85 94 0.1 76 97 0.5 96 116 橙子 0.005 66 90 0.01 79 87 0.1 73 93 0.5 94 115 苹果 0.005 62 91 0.01 77 88 0.1 77 96 0.5 92 112 香蕉 0.005 74 90 0.01 75 91 0.1 71 93 0.5 81 93 茶叶 0.005 61 90 0.01 91 112
24、 0.1 95 112 0.5 71 91 表 C.2 续 以正式出版文本为准 以正式出版文本为准 中华人民共和国出入境检验检疫 开本 8801230 1/16 印张 1 字数 22 千字 2020 年 3 月第一版 2020 年 3 月第一次印刷 印数 1500 书号：155175157 定价 18.00 元 出口植物源性食品中克百威及其代谢物 残留量的测定液相色谱 - 质谱 / 质谱法 行 业 标 准 SN/T 03372019 * * * SN/T 2574 2019 北京市朝阳区东四环南路甲 1 号（100023） 编辑部：（010）65194242-7509 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 中国海关出版社有限公司出版发行 网址 SN/T 03372019
