1、 ICS 65.020.01 CCS B05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 24452021 向日葵黄 萎病田间 抗性鉴定 技术规程 Technical code of practice for resistant identification to sunflower Verticillium wilt in field 2021-11-15 发布 2021-12-15 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 24452021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.12020 标准 化工 作导则 第1 部分： 标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定
2、起草。 本文件 由内 蒙古 自治 区农 牧厅提 出。 本文件 由内 蒙古 自治 区农 业标准 化技 术委 员会 （SAM/TC 20 ）归 口。 本文件 起草 单位 ：内 蒙古 农业大 学、 内蒙 古自 治区 科学技 术战 略研 究中 心。 本文件 主要 起草 人： 周洪 友、王 东、 张键 、赵 君、 孟焕文 、张 笑宇 、乔 旭。 DB15/T 24452021 1 向 日葵黄 萎病田间 抗性鉴 定技术规 程 1 范围 本文件 规定 了向 日葵 黄萎 病抗性 鉴定 的前 期准 备 、 鉴定程 序 、 结 果的 计算 、 黄 萎病抗 性评 价等 技术 要求。 本文件 适用 于内 蒙古 自治
3、区向日 葵产 区。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于本 文件。 GB 4407.2 经济 作物 种子 第2部分 ：油 料类 。 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。 3.1 向日葵 黄萎 病 sunflower Verticillium wilt 由大丽 轮枝 孢菌 引起 的一 种土传 病害 。 田 间的 症状 多 从植
4、株 下层 叶片 显症 ， 叶 尖 叶肉部 分呈 现褪 绿、 黄化的 症状 。 随 后， 病部 边缘向 叶内 的脉 间组 织发 展导致 整个 叶片 的叶 肉组 织褪绿 ， 变 褐， 干 枯 。 发 病 重的植 株下 部叶 片全 部枯 死，中 位叶 片呈 斑驳 状。 剖开病 茎观 察， 可见 茎部 的维管 束变 褐。 4 前期准 备 4.1 病原菌 的选 择与 培养 4.1.1 病原菌 的选 择 根据所 鉴定 品种 推广 应用 区域选 择能 代表 该区 域病 原菌致 病力 水平 的优 势菌 系。 4.1.2 病原菌 的培 养 在超净 台上， 将分 离纯化 的向日 葵黄萎 病菌 ，从PDA平板上 的
5、菌落 边缘 挑取直 径5 mm 的新鲜 菌块 ， 接种到 查比 克液 体培 养基 （NaNO3 ：2.0 g ；K2HPO4 ：1.0 g；KCl ：0.5 g ；MgSO47H2O：0.50 g；FeSO4:0.01 g； 蔗糖:30.0 g ；用 水定 容至1000 mL）中 ，置 于25 下，150 r/min，黑 暗培 养6 d备用 。 制作麦 麸培养 基， 加入适 量的水 ，装入 三角 瓶,0.1 MPa，高 压湿 热灭菌30 min ，冷却 到室温 备用； 吸取上述 液体 培养的 向日 葵黄萎病 菌菌 液15 mL 转 接至装有 麦麸 沙粒培 养基 的三角瓶 中， 随后放 入 到
6、25 培 养箱 中静 置培 养7 d ，待 黄萎 病菌 的菌 丝布 满 后，将 培养 物掏 出， 自然 条件下 风干 备用 。 DB15/T 24452021 2 4.2 病圃的 建立 向日葵 黄萎 病病 圃应 建立 在有利 于黄 萎病 发生 的地 区， 选 择具 有一 定隔 离条 件的地 块建 立病 圃 ， 病 圃地势 平坦， 土壤 以沙 壤 土为宜 。 按每 平方 米45 g的 接 种量 ， 将培 养好 的菌种 均 匀地 撒入 病圃 ， 再翻耕 23遍 ，使 病菌 与土 壤混 合均匀 ，使 正常 年份 感病 对照的 病情 指数 达到35.0 以上。 4.3 对照品 种的 选择 鉴定中 选
7、用一 个感 病对 照和 一 个抗 病对 照。 感病 对照 要 求高 度感 病， 选择 标准 为 正常 年份 病情指数 能达到35.0 左右 ，且 感病 性稳定 ；抗 病对 照选 用已 推广应 用的 抗黄 萎病 品种 ，且抗 病性 稳定 。 5 鉴定程 序 5.1 材料的 处理 鉴定的 向日 葵品 种或 材料 应为未 包衣 的种 子， 发芽 率应符 合GB 4407.2 。 5.2 材料的 种植 鉴定材 料种 植在 病圃 中， 随机区 组设 计，3 次重 复， 每小区2垄4 行、 行长 不少 于5 m、 株 数不 少于50 株，适 当提 早播 种。 5.3 鉴定圃 田间 管理 播种后 ，确 保全
8、 苗， 保持 田间的 适宜 湿度 ，以 利于 黄萎病 的发 生， 各项 田间 管理保 持一 致。 5.4 病情的 调查 记载 向 日 葵出 苗后， 实时 监测感 病 对照 的发 病情 况， 当感 病 对照 病情 指数 高于35.0 时， 进行 第一 次全 面 调查， 每10 d 左右 调查一 次，整 个生育 期调 查次数 不少于3 次。 感病对 照病 情 指数低 于35.0时 ，鉴 定无 效。在 病情调 查记 载中 采 用5级法 表述 病情。 根据 植 株黄萎 病发生 严重 程度 分 成15 五个病 级， 代表 值 分别为04 ： a) 1 级 （代 表值 0 ）： 植株 健 康，无 病叶 ，
9、生 长正 常； b) 2 级 （代 表值 1 ） ：植 株三分 之 一以 下叶 片表 现病 状； c) 3 级 （代 表值 2 ）： 植株 三 分之一 以上 ，三 分之 二以 下叶片 表现 病状 ； d) 4 级 （代 表值 3 ） ：植 株三分 之 二以 上叶 片表 现病 状； e) 5 级（代 表值 4 ） ：植 株枯死 。 6 结果的 计算 6.1 病株率 （Ri ） 见公式 （1 ）： 式中： DB15/T 24452021 3 ni 发 病株 数； nt 总株 数。 6.2 病情指 数（DI） 见公式 （2 ）： 式中： dc 相 应病 级； nc 各 病级 病株 数； nt 总株
10、数。 6.3 相对病 情指 数 将感病 对照 病情 指数 进行 标准化 ， 以 标准 病情 指数 （50.0 ） 对试 验品 种病 情指 数 进行 校正 ， 校正结 果即为 相对 病情 指数 。 感 病对照 病情 指数 在35.165.0之间 可采 用相 对病 情指数 ， 超出 范围 不宜 采用 相 对病情 指数 。 校正系 数（K）： 式中： 50.0 感病 对照 标准 病情 指 数； DICK 本次 鉴定 感病 对照病 情 指数 。 相对病 情指 数（RDI ）： 式中： DI 被鉴 定品 种病 情指 数； K 校 正系 数。 7 黄萎病 抗性 评价 7.1 相对病 情指 数均 值 整个生
11、 育期每 次（ 不少于3 次）调 查结果 的相 对病情 指数算 术平均 值， 作为供 试品种 的最终 相对 病 情指数 。 相对病 情指 数均 值（ARDI ）： 式中： RDIi 第 i 次相 对病 情 指数； n 整 个生 育期 计算 相对病 情 指数 的次 数。 DB15/T 24452021 4 7.2 抗性鉴 定结 论 根据被 鉴定 品种 的相 对病 情指数 均值 （ARDL ） 的大 小 评定品 种的 抗性 级别 ， 抗 性级别 的划 分标 准见 附录A 。 DB15/T 24452021 5 A A 附录A （规范 性） 向日葵 品种 抗性 级别 的划 分标准 向日葵 品种 抗性 级别 的划 分标准 见表A.1 。 表A.1 向日 葵品 种抗 性级 别的 划 分标准 级别 抗性类别 英文缩写 相对病情指数均值 1 免疫 I ARDI=0 2 高抗 HR 0 ARDI 10.0 3 抗病 R 10.1ARDI 20.0 4 耐病 T 20.1ARDI 35.0 5 感病 S ARDI 35.0
