1、 ICS 65.020.20 CCS B05 23 黑龙江省地方标准 DB 23/T 3109 2022 大豆对菌 核病田间 抗性鉴定 技术规程 Technical specification for the resistance identification of soybean cultivars against Sclerotinia sclerotii in field 2022 - 03 - 03 发布 2022 - 04 - 02 实施 黑龙江省 市场监 督 管理局 发 布 DB 23/T 3109 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则
2、第1 部分： 标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定 起草。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由黑 龙江 省农 业农 村厅提 出。 本文件 起草 单位 ：黑 龙江 省农业 科学 院大 豆研 究所 、黑龙 江省 农业 科学 院植 物保护 研究 所。 本文件 主要 起草 人 ： 王 家 军、 孟庆 林 、 李 易初 、 张 瑞萍 、 马 立功 、 于佰 双 、 王广金 、 张必 弦 、 马 云 凤、李 进荣 、高 明杰 、刘 秀林、 王雪 扬、 刘鑫 磊、 王金生 、任 洪雷 、张 丰屹 、何雯 瑾。 DB
3、23/T 3109 2022 1 大 豆对菌 核病田间 抗性鉴 定技术规 程 1 范围 本文件 规定 了大 豆对 菌核 病田间 抗性 鉴定 技术 规程 的术语 和定 义、 技术 流程 、 评价标 准和 技术 档 案 。 本文件 适用 于大 豆种 质资 源（品 种/ 品系 ）对 菌核 病 抗性 筛 选。 2 规 范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本
4、 文件。 GB 4404.2 粮食 作物 种子 豆类 GB 5084-2005 农田 灌溉 水 质标准 农 用地 土壤 污染 风 险管控 标准 （试 行） 3 术 语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。 3.1 菌种纯 化 挑取分 离的 大豆 菌核 病菌 的菌丝 尖端 ，将 其放 置于 新鲜PDA 平 板上 ，以 获得 新 生菌落 的方 法。 3.2 活化培 养 将中、 长期 低温 保存 的菌 种，重 新在 新鲜 的PDA 平 板 上培养 的过 程。 3.3 马铃薯 改良 培养 基 将新鲜的 马铃薯和胡萝卜去皮，切 成1cm 3 小块，按1:1 比例混 匀，装入硫酸纸封口的玻 璃瓶
5、2/3处， 121 高压 灭菌20分 钟。 3.4 菌种扩 繁 将活化 的菌 种接 种在 马铃 薯改良 培养 基上 暗培 养， 获得大 量菌 核的 过程 。 3.5 鉴定圃 DB 23/T 3109 2022 2 按不同 试验 目的 和要 求设 计的， 供试 大豆 材料 排布 的试验 小区 。 3.6 抗病性 植 物体 所具 有的 能够 减轻或 克服 病原 物致 病作 用的可 遗传 性状 。 3.7 严重度 发病植 株或 器官 单元 上发 病面积 或体 积占 该单 元总 面积或 总体 积的 百分 率， 亦可用 分级 法表 示 ， 即 将发病 的严 重程 度由 轻到 重划分 出几 个级 别， 分
6、别 用一些 代表 值表 示， 表明 病害发 生的 严重 程度 。 3.8 病情指 数 通过对 植株个 体发 病程度 （病情 级别） 数值 的综合 计算所 获得的 群体 发病程 度的数 值化描 述形 式 。 病情指 数计 算公 式如 下： 病情指 数= 各 级病 株数 相应的 发病 级别 / 调查总 株数 最大级 别 4 技 术流 程 4.1 选地 选择地势平坦的田块，周围设置1m 保护行。依据供试材料的数量设置若干个小区，小区内采取 垄 作栽培 ，垄 距65cm ，行 长5m ， 每份 材料 种3 行， 株 距7cm ，3 次重 复， 随机 区 组排列 。 4.2 田间 管理 大豆种 植全 过
7、程 采用 常规 田间管 理， 其间 可防 虫、 除草， 但不 应施 用任 何杀 菌剂。 在大 豆生 长 的 中 后期， 若发 生倒 伏， 需及 时搭架 。 4.3 接种 4.3.1 接 种体 制备 菌核体 的制 备 ： 先 将保 存 的菌核 表面 消毒 后置 于新 鲜的PDA 平 板上 培养 ，7d 后 移至新 鲜的 马铃 薯改 良培养 基上 ，在18 20 的培 养箱 中暗 培养4 周 ， 待产生 黑色 坚硬 菌核 后 ， 用清水 洗出 其中 菌核 ，阴 干，常 温 通 风处 保存 备用 。 子囊孢 子悬 浮液 制备 ： 将 菌核埋 入潮 湿的 灭菌 沙中 置于4 冰箱 低温 处理， 4 周
8、后取 出置 于装 有湿 沙 的发芽 盒中 ，20 下 黑暗 培养 ， 待 产生 子囊 盘柄 后 添加200Lux 光照 ， 待 子囊 盘弹 射 子囊 孢子 时 ， 收 集 子 囊孢子 ，并 用无 菌水 稀释 成浓度 为1.0 10 5 个子 囊孢 子/mL ， 用于 喷雾 接种 。 4.3.2 接 种方 法 DB 23/T 3109 2022 3 田 间菌 核接 种法 ： 按 当地 播期进 行小 区播 种， 种子 质量符 合GB 4404.2 标准 。 播种后7d 内按 每延 长 米0.5g ，将菌核均匀施于试验区地表， 覆土2-3cm ，试验区免中耕。 若遇大豆花期气候干旱， 应对试验 区进
9、行 微喷 灌， 保持 土壤 湿润。 子囊孢 子悬 浮液 接种 法： 在大豆 盛花 期对 大豆 茎秆 及花进 行喷 雾接 种， 接种 时间应 选在 傍晚 或 阴 雨 天， 接种 量以 雾滴 均匀 分 布在茎 秆 、 花 上不 滑落 为 宜， 接种 后对 试验 区进 行 微喷灌 ， 灌溉 水符 合GB 5084 标准。 以上两 种接 种方 法可 以任 选其一 。 4.4 病情 调查 4.4.1 调 查时 间 田间菌 核接 种区 于发 病盛 期进行 病情 调查 ； 子 囊孢 子悬浮 液接 种区 于接 种 20d 后调 查病 情。 并 在 收 获前统 一调 查 1 次 茎秆 病 斑长度 和瘪 荚率 。
10、 4.4.2 调 查方 法 选取行 中部 的植 株调 查 50 株，记 录每 株的 病级 ，结 果记入 表 A.1 。 4.4.3 大 豆菌 核病 病情 分 级指标 1 级 ：全 株无 症状 或茎 上 有微小 点状 病斑 ，植 株生 长正常 ； 3 级 ：前 期叶 腋处 及侧 枝 轻度感 病， 后期 主茎 上病 斑长度 小 于 3cm ，瘪 荚率 低于 10 ； 5 级 ： 前 期主 茎及 侧枝 均生 有菌丝 并呈 水浸 状腐 烂， 后 期主茎 上病 斑长 度 3cm 6cm ， 病斑 处苍 白， 瘪荚率 为 10% 30 ； 7 级： 前期 主茎 和侧 枝均 生 长大量 菌丝 ， 呈 严重水
11、 浸 状腐烂 ， 后 期病 斑处苍 白， 主茎内 外密 生菌 核， 病斑长 度 6cm 15cm ， 瘪 荚率 为 30% 50 ； 9 级 ：前 期严 重感 病， 基 本上达 到枯 死程 度， 后期 主茎上 病斑 超过 15cm ， 病 茎内外 密生 菌核 ，瘪 荚率 达 50 以上 。 5 评 价标 准 5.1 调查 数据 整理 将大豆 菌核 病的 田间 调查 数据、 鉴定 圃农 事操 作及 相关情 况进 行电 子数 据登 记。 计 算每 个大 豆 材 料 的病情 指数 ，登 记到 表 A.1 中。 5.2 抗病 性评 价标 准 依据大 豆材 料的 病情 指数 评价其 抗病 性， 评价 标
12、准 见表 A.2 ， 并记录 在 表 A.1 中。 5.3 重复 鉴定 初次鉴 定中 表现 为抗 病、 中抗的 材料 ，次 年需 进行 重复鉴 定。 DB 23/T 3109 2022 4 6 技 术档 案 建立大 豆菌 核病 人工 接种 鉴定技 术档 案， 内容 包括 环境条 件、 技术 流程 、评 价标准 及试 验数 据等。 DB 23/T 3109 2022 5 附录 A 资料性 大豆菌 核病 田间 调查 表 表A.1 大 豆菌 核病 病株 田 间调查 记录 表 调查时 间： 供试材料编号 1 级 3 级 5 级 7 级 9 级 病情指数 抗性评价 表A.2 大 豆菌 核病 抗性 评 价标准 病情指 数 抗性评 价 10% 抗病 Resistant 10.1% 30.0% 中抗 Moderately resistant 30.1% 50.0% 中感 Moderately susceptible 50.1% 75.0% 感病 Susceptible 75.1% 100.0% 高感 Highly susceptible
