DB35 T 2015-2021 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及高敏荧光免疫分析操作规程.pdf
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1、 ICS 11.220 CCS B 41 35 福建省地方标准 DB35/T 20152021 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及 高敏荧光免疫分析操作规程 The preparation of CSFV antibody hypersensitive fluorescence detection reagent card and operating procedures for hypersensitive fluorescence immunoassay 2021 - 09 - 28发布 2021 - 12 - 28实施 福建省市场监督管理局 发布DB35/T 20152021 I 目次
2、 前言 . II 1 范围 . 1 2 规范性引用文件 . 1 3 术语和定义 . 1 4 缩略语 . 1 5 仪器与试剂 . 1 6 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备 . 2 7 检测 . 3 8 判定标准 . 4 附录 A(规范性) 试剂的配制 . 5 附录 B(资料性) 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡装配示意图 . 6 DB35/T 20152021 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由福州海关提出并归口。 本文件起草单位: 福州海
3、关技术中心、 厦门市翰均科检测科技有限公司、 成都微瑞生物科技有限公司、 上海德雨航生物科技有限公司、一品一码检测(福建)有限公司。 本文件主要起草人:郑腾、张体银、章键、吴俊清、吴冠英、谢向机、张志灯、唐寰宇、林杰、 王武军、庄锴、李宋钰、邱金生。 DB35/T 20152021 1 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备及高敏荧光免疫分析操作 规程 1 范围 本文件规定了猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡的制备及高敏荧光免疫分析技术免疫分析操作规 程。 本文件适用于猪瘟病毒抗体水平的监测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中, 注日期的引用文
4、件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 GB 19489 实验室 生物安全通用要求 NY/T 541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 PVC:聚氯乙烯(Polyvinylchloride) 5 仪器与试剂 5.1 仪器 5.1.1 高敏荧光分析仪。 5.1.2 移液器(0.5 L10 L和10 L100 L)。 5.1.3 恒温培养箱(20 25
5、 和 37 1 )。 5.1.4 离心机(3 000 r/min和18 000 r/min)。 5.1.5 切条机。 5.1.6 划膜喷金机。 DB35/T 20152021 2 5.2 试剂 5.2.1 除另有规定外,所有试剂均为分析纯,实验用水应符合 GB/T 6682 一级水的要求。 5.2.2 高敏荧光纳米微球。 5.2.3 N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐。 5.2.4 猪瘟病毒重组 E2 蛋白。 5.2.5 1%聚乙烯醇。 5.2.6 牛血清白蛋白(BSA)。 5.2.7 鸡卵黄抗体(IgY)。 5.2.8 山羊抗鸡卵黄抗体/免疫球蛋白 G 抗体(IgY/IgG抗体)。 5.2.9 碳二
6、亚胺(EDC)。 5.2.10 硝酸纤维素膜。 5.2.11 2-N-吗啡啉乙磺酸(MES)。 5.2.12 三羟甲基氨基甲烷(Tris)。 6 猪瘟病毒抗体高敏荧光检测试剂卡制备 6.1 检测线和质控线的包被 把硝酸纤维素膜粘贴在PVC底板上,采用划膜喷金机在硝酸纤维素膜上喷涂已经稀释成0.5 mg/mL 的山羊抗鸡IgY/IgG抗体形成质控线(C线),喷涂已经稀释成1.0 mg/mL的猪瘟病毒重组蛋白E2形成检 测线(T线),喷量均为1 L/cm,然后在37 1 的温度下烘制8 h。 6.2 硝酸纤维素膜的处理 用封闭液(配制方法按照附录A的A.1规定)封闭硝酸纤维素膜30 min,用10
7、 mmol/L磷酸盐缓冲液 (pH7.5,配制方法按照附录A的A.2规定)清洗硝酸纤维素膜30 min,室温(20 25 )干燥2 h 后备用。 6.3 高敏荧光纳米微球标记鸡 IgY 将50 mg的高敏荧光纳米微球加入到5 mL的2-N-吗啡啉乙磺酸缓冲液(0.1 mol/L,pH7.0)中,再 加入10 mg碳二亚胺和10 mg N-羟基琥珀酰亚胺磺酸钠盐搅拌溶解,室温(20 25 )反应30 min 后在4 下,18 000 r/min离心10 min,取离心沉淀物用50 mL的0.05 mol/L硼酸缓冲液(pH8.2,配制 方法按照附录A的A.3规定)重悬,加入2 mg透析过的鸡Ig
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