1、 ICS 13.080 CCS Z 18 37 山东省地方标准 DB37/T 4481.1 2021 土壤中农 药残留 量 的测定 液相色谱- 串联 质谱法 第 1 部分：9 种三唑 类杀菌剂 残留 量的测定 Determination of pesticides residues in soil Liquid chromatography-mass spectrometry Part 1:Determination of 9 triazole fungicides residues 2021-12-29 发布 2022-01-29 实施 山东省市 场监督 管 理局 发 布 DB37/T 44
2、81.1 2021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分： 标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定 起草。 本文件 是DB37/T 4481 土 壤中农 药残 留 量 的测 定 液相色 谱- 串联 质谱 法 的 第1部 分。 DB37/T 4481 已经发 布了 以下 部分 ： 第1 部 分：9 种 三唑 类杀 菌剂残 留量 的测 定； 第2 部 分： 六种 除草 剂残 留量的 测定 ； 第3 部 分： 壬基 酚二 氧乙 烯醚、 壬基 酚 和4- 正壬 基 酚残留 量的 测定 ； 第4 部 分： 霜脲 氰残 留量 的测定 。 请注意 本文 件
3、的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由山 东省 农业 农村 厅提出 并组 织实 施。 本文件 由山 东省 农业 标准 化技术 委员 会归 口。 DB37/T 4481.1 2021 II 引 言 作为土 壤中 农药 残留 分析 的一部 分， 本文 件规 定了 土 壤中9 种杀 菌剂 残留 量液 相 色谱- 串联 质谱 测定 方法， 方法 的检 出限 、 精 密 度等均 能 满 足土 壤样 品检 验的要 求， 对产 地环 境的 保 护、 农 产品 产业 的健 康、 可持续 发展 有积 极和 深远 的意义 。DB37/T 4481.1
4、 2021 1 土 壤中农 药残留量 的测定 液相色 谱- 串联质 谱法 第 1 部分：9 种 三 唑类杀 菌剂残留 量的测 定 1 范围 本文件 规定了 土壤 中戊唑 醇、氟 硅唑、 丙环 唑、己 唑醇、 腈菌唑 、苯 醚甲 环 唑、三 唑酮、 腈苯 唑 、 烯唑醇9种 杀菌 剂残 留量 液 相色谱-串 联质 谱测 定方 法 。 本文件 适用于 土壤 中戊唑 醇、氟 硅唑、 丙环 唑、己 唑醇、 腈菌唑 、苯 醚甲环 唑、三 唑酮、 腈苯 唑 、 烯唑醇9种 杀菌 剂残 留量 的 测定。 注： 本文件测定土壤中上述9 种杀菌剂定量限为0.01 mg/kg ，线性 范围0.005 mg/L 0
5、.5 mg/L 。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分 析实 验室 用 水规格 和试 验方 法 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。 4 原理 试样用 乙腈 提取 、固 相萃 取柱净 化， 用液 相色 谱- 串 联质谱 仪检 测， 外标 法定 量。 5 试剂与 材料 除非另 有说
6、明， 在分 析中 仅使用 分析 纯试 剂和GB/T 6682 中 规定 的一 级水 。 5.1 试剂 5.1.1 甲醇（CH3OH ，65-56-1） ：色谱 纯。 5.1.2 乙酸铵 （CH3COONH4 ，631-61-8） ：色 谱纯 。 5.1.3 乙腈（CH3CN ，75-05-8）。 5.1.4 氯化钠 （NaCl ，7647-14-5 ）：140 烘烤4 h 。 5.2 材料 5.2.1 固相萃 取柱 ：Oasis PRiME HLB ，150 mg/3 mL， 或相 当者。 5.2.2 滤膜： 有机 系，0.22 m 。 5.3 溶液配 制 DB37/T 4481.1 2021
7、 2 乙酸铵 溶液（1 mmol/L ） ：准确 称取0.077 g 乙酸 铵 于1 000 mL容 量瓶 中，用 水 定容至 刻度， 现配 现 用。 5.4 农药标 准品 9种农 药标 准品 ，纯 度95 %。 5.5 标准溶 液配 制 5.5.1 标准储 备溶 液（1 000 mg/L ）：准 确称 取 10 mg （精 确 至 0.1 mg ）各 农药 标准 品 ，用甲 醇溶 解并 定容 至10 mL ， 避光-18 以下保 存， 有效 期 1 年。 5.5.2 混合标 准溶 液： 吸取 一定 量标准 储备 液 于 50 mL 容 量瓶中 ，用 甲醇 定容 至刻 度。混 合 标 准溶 液
8、 避光0 4 保存 ，有 效期 1 个月 。 6 仪器和 设备 6.1 液相色 谱- 质谱/ 质谱 仪： 配有电 喷雾 离子 源（ESI ）。 6.2 电子天 平， 感 量0.01 g 和0.0 001 g。 6.3 多管漩 涡混 匀器 。 6.4 快速混 匀器 。 6.5 离心机 ：3 000 r/min 。配 备100 mL 具塞 塑料 离心 管 。 6.6 刻度试 管：15 mL 。 6.7 土壤筛 ：2 mm 孔 径。 7 试样制 备 土壤鲜 样， 除去 石块、 动植 物残体 等杂 物， 风干 后过2 mm 孔径 筛， 装入 洁净 容器， 密封， 标明 标记 ， -18 以下 保存 备
9、用 。 8 分析步 骤 8.1 提取 称取10 g试 样 （精 确至0.01 g），于100 mL 塑 料离 心 管中， 加入10 mL 水和10 mL 乙腈， 于多 管漩 涡混 匀器振 荡10 min 后， 加入5 g7 g 氯 化钠 ，振 荡1 min 后，3 000 r/min 离心5 min 。 8.2 净化 取3.0 mL上 清液 直接 上样 固相萃 取柱 ，收 集全 部滤 液。吸 取1.0 mL 滤液 过0.22 m 滤膜 后待 测。 8.3 测定 8.3.1 液相色 谱参 考条 件 色谱柱 ：C18 ，100 mm 2.1 mm 1.9 m， 或相 当者 。 柱温箱 温度 ：40
10、 。 进样量 ：1.0 L。 流速：0.2 mL/min DB37/T 4481.1 2021 3 流动相 组成 和梯 度洗 脱程 序见表1。 表1 流动相 组成 和梯 度洗 脱程 序 时间 min 流动相A （1 mmol/L 乙酸铵水溶 液） % 流动相B( 甲醇) % 0.00 90 10 4.00 5 95 7.00 5 95 7.20 90 10 8.3.2 质谱参 考条 件 离子源 ：电 喷雾 离子 源（ESI ）； 扫描方 式： 正离 子扫 描； 加热模 块温 度：400 ； DL 管温 度：250 ； 碰撞气 （氩 气） 压力 ：230 kPa； 干燥气 （氮 气） 流速 ：1
11、5 L/min ； 检测方 式： 多反 应监 测（MRM ）； 多反应 监测 条件 和保 留时 间（见 表2 ）。 表2 9 种杀 菌剂 的保 留时 间和 多反应 监测 条件 序号 中文名称 保留时间 min 定量离子对 碰撞能 v 定性离子对 碰撞能 v 1 三唑酮 5.78 294.1/197.1 -18 294.1/225.1 -30 2 腈菌唑 5.77 289.1/70.1 -23 289.1/125.1 -30 3 腈苯唑 5.89 337.2/70.2 -19 337.2/125.1 -28 4 氟硅唑 5.91 316.1/247.1 -35 316.1/165.1 -39 5
12、 戊唑醇 6.01 308.1/70.0 -16 308.1/124.9 -13 6 丙环唑 6.06 342.0/159.1 -30 342.0/205.1 -18 7 烯唑醇 6.17 326.1/70.0 -25 326.1/159.0 -30 8 苯醚甲环唑 6.18 406.1/251.0 -25 406.1/337.0 -17 9 己唑醇 6.09 314.0/70.2 -21 314.0/159.1 -29 8.4 标准工 作曲 线的 制备 准确吸 取一 定量 的混 合标 准溶液 （4.5.2 ） ， 用甲醇 逐级稀 释成 质量 浓度 为0.005 mg/L 、0.01 mg/L
13、 、 0.05 mg/L 、0.1 mg/L 和0.5 mg/L 的 混合 标准工 作溶液 。空白 基质溶 液氮气 吹干 ，加入1 mL上 述混合 标 准 工作溶 液复 溶， 过滤 膜 （4.2.2 ） 配制 成系 列基 质混 合标准 工作 溶液 ， 供 液相 色谱- 串联 质谱 仪测 定。 以 测得峰 面积 为纵 坐标 、对 应的标 准溶 液质 量浓 度为 横坐标 ，绘 制标 准工 作曲 线。 8.5 定性及 定量 8.5.1 保留时 间 DB37/T 4481.1 2021 4 被 测 试 样中 目 标化 合 物色谱 峰 的 保留 时 间与 相 应标准 色 谱 峰的 保 留时 间 相比较
14、， 相 对误 差 应在 2.5 % 之内 。 8.5.2 定量离 子、 定性 离子 及子 离子丰 度比 在相同 实验 条件 下进 行样 品测定 时， 如果 检出 的色 谱峰的 保留 时间 与标 准样 品相一 致， 并且 在 扣 除 背景后 的样 品质 谱图 中， 目 标化合 物的 质谱 定量 和定 性离子 均出 现， 而 且同 一检 测批次， 对同 一化 合 物 ， 样品中 目标 化合 物的 定性 离子和 定量 离子 的相 对丰 度比与 质量 浓度 相当 的基 质标准 溶液 相比 ， 其 允 许 偏 差不超 过表3规 定的 范围 ， 则可判 断样 品中 存在 目标 农药。9种 农药 多反 应监
15、 测 的色谱 图参 见附 录A 。 表3 定性测 定时 相对 离子 丰度 的最大 允许 偏差 相对离子丰度 50 % 20 % 50 % 10 % 20 % 1 0 % 允许的相对偏差 2 0 % 2 5 % 3 0 % 5 0 % 8.5.3 定量 外标法 定量 。 8.6 试样溶 液的 测定 将基质 混合 标准 工作 溶液 和试样 溶液 依次 注入 液相 色谱- 串联 质谱 仪中 ， 保 留 时间和 定性 离子 定性 ， 测得定 量离 子峰 面积 ， 待 测样液 中农 药的 响应 值应 在仪器 检测 的定 量测 定线 性范围 之内 ， 超 过 线 性 范 围 时应根 据测 定浓 度进 行适
16、 当倍数 稀释 后再 进行 分析 。 8.7 空白试 验 除不称 取试 样外 ，均 按上 述步骤 进行 。 8.8 平行试 验 按以上 步骤 对同 一试 样进 行平行 测定 。 9 数据处 理 试样中 各农 药残 留量 以质 量分数 i 计， 单位 以毫 克 每千克 （mg/kg ）表 示， 按 式（1 ）计 算： = (1) 式中： i 试 样中 被测 物残 留 量，单 位为 毫克 每千 克（mg/kg）； i 基 质混 合标 准工 作 溶液中 被测 物的 质量 浓度 ，单位 为毫 克每 升（mg/L ）； v1 提取 有机 溶剂 总体 积，单 位为 毫升 （mL ）； m 试样 的质量 ，
17、单 位 为克（g）。 注： 计算结果应扣除空白值， 测定结果用平行测定的算术平均值表示， 保留两位有效数字， 当 含量超过1 mg/kg 时保 留三位有效数字。 10 精密度 DB37/T 4481.1 2021 5 10.1 在重复 性条 件下 ， 两 次独 立测试 结果 的绝 对差 不大 于重复 性限 （r ） ， 重复 性 限 （r） 的数 据应 按 附录B 执行 。 10.2 在再现 性条 件下 ， 两 次独 立测定 结果 的绝 对差 不大 于再现 性限 （R ） ， 再现 性 （R） 的 数据 应按 附 录C 执 行。 11 回收率 本方法 的添 加水 平和 回收 率范围 见附 录D
18、 。 DB37/T 4481.1 2021 6 附录A （资料 性） 9 种农 药多 反应 监测 （MRM ）色谱 图 9种农 药多 反应 监测 （MRM ）色谱 图见 图A.1图A.9 。 图A.1 三唑酮 图A.2 腈菌唑 图A.3 腈苯唑 DB37/T 4481.1 2021 7 图A.4 氟硅唑 图A.5 戊唑醇 图A.6 丙环唑 DB37/T 4481.1 2021 8 图A.7 烯唑醇 图A.8 苯醚甲 环唑 图A.9 己唑醇 DB37/T 4481.1 2021 9 附录B （规范 性） 重复性 限 重复性 限见 表B.1 。 表B.1 实验室 重复 性限 （r ）数 据 表 序
19、号 农药名称 含量 mg/kg 重复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 1 三唑酮 0.01 1 . 4 1 0 -3 0.05 7.6 1 0 -3 0.5 4.5 1 0 -2 2 腈菌唑 0.01 1.3 1 0 -3 0.05 5.9 1 0 -3 0.5 5.8 1 0 -2 3 腈苯唑 0.01 1.2 1 0 -3 0.05 8.2 1 0 -3 0.5 2.9 1 0 -2 4 氟硅唑 0.01 1.4 1 0 -3 0.05 3.6 1 0 -3 0.5 3.9 1 0 -2 5 戊唑醇 0.01 1.1 1 0 -3 0.05 6.7
20、1 0 -3 0.5 4.4 1 0 -2 6 丙环唑 0.01 1.2 1 0 -3 0.05 5.8 1 0 -3 0.5 4.0 1 0 -2 7 烯唑醇 0.01 2.0 1 0 -3 0.05 5.9 1 0 -3 0.5 4.9 1 0 -2 8 苯醚甲环唑 0.01 1.5 1 0 -3 0.05 5.9 1 0 -3 0.5 3.1 1 0 -2 9 己唑醇 0.01 1.3 1 0 -3 0.05 8.0 1 0 -3 0.5 3.3 1 0 -2 DB37/T 4481.1 2021 10 附录C （规范 性） 再现性 限 再现性 限见 表C.1 。 表C.1 实验室 再现
21、 性限 （R ）数 据 表 序号 农药名称 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 1 三唑酮 0.01 2.1 1 0 -3 0.05 8.7 1 0 -3 0.5 6.0 1 0 -2 2 腈菌唑 0.01 2.1 1 0 -3 0.05 7.0 1 0 -3 0.5 5.9 1 0 -2 3 腈苯唑 0.01 1.7 1 0 -3 0.05 1.0 1 0 -2 0.5 3.8 1 0 -2 4 氟硅唑 0.01 1.5 1 0 -3 0.05 6.4 1 0 -3 0.5 4.1 1 0 -2 5 戊唑醇 0.01 2.7 1 0
22、 -3 0.05 7.3 1 0 -3 0.5 4.5 1 0 -2 6 丙环唑 0.01 2.2 1 0 -3 0.05 5.8 1 0 -3 0.5 4.3 1 0 -2 7 烯唑醇 0.01 2.8 1 0 -3 0.05 6.2 1 0 -3 0.5 5.1 1 0 -2 8 苯醚甲环唑 0.01 1.7 1 0 -3 0.05 6.1 1 0 -3 0.5 5.5 1 0 -2 9 己唑醇 0.01 2.2 1 0 -3 0.05 8.2 1 0 -3 0.5 4.4 1 0 -2 DB37/T 4481.1 2021 11 附录D （资料 性） 加标回 收率 加标回 收率 见表D.1 。 表D.1 9 种三 唑类 农药 加标 回收 率情况 添加水平 mg/kg 三唑酮 % 腈菌唑 % 腈苯唑 % 氟硅唑 % 戊唑醇 % 0.01 97 115 89110 85110 86 102 98113 0.05 81 107 9098 79 95 82 92 8593 0.5 83 96 8089 75 89 76 90 7490 添加水平 mg/kg 丙环唑 % 烯唑醇 % 苯醚甲环唑 % 己唑醇 % 0.01 84 103 86109 79 99 84 112 0.05 76 91 7285 84 92 81 93 0.5 78 88 8291 77 86 85 90
