1、 ICS 13.080 CCS Z 18 37 山东省地方标准 DB37/T 4481.4 2021 土壤中农 药残留 量 的测定 液相色谱- 串联 质谱法 第4 部分：霜脲氰 残留量的 测定 Determination of pesticide residues in soil Liquid chromatography-tandem mass spectrometry Part 4:Determination of cymoxanil residues 2021 - 12 - 29 发布 2022 - 01 - 29 实施 山东省市 场监督 管 理局 发 布 DB37/T 4481.4 2
2、021 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标准 化工 作导则 第1 部分： 标准化 文件 的结构 和起草 规则 的规 定 起草。 本文件 是DB37/T 4481 土 壤中农 药残 留 量 的测 定 液相色 谱- 串联 质谱 法 的 第4部 分。 DB37/T 4481 已经发 布了 以 下 部分 ： 第1 部 分：9 种 三唑 类杀 菌剂残 留量 的测 定； 第2 部 分： 六种 除草 剂残 留量的 测定 ； 第3 部 分： 壬基 酚二 氧乙 烯醚、 壬基 酚 和4- 正壬 基 酚残留 量的 测定 ； 第4 部 分： 霜脲 氰残 留量 的测定 。 请注意 本文 件的 某些
3、内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由山 东省 农业 农村 厅提出 并组 织实 施。 本文件 由山 东省 农业 标准 化技术 委员 会 归 口。 DB37/T 4481.4 2021 II 引 言 作为土 壤中农 药残 留分析 的一部 分，本 文件 规定了 土壤中 霜脲氰 残留 量液相 色谱-串 联质 谱测定方 法，方 法的检 出限 、精密 度等均 能 满足 土壤 样品检 验的要 求，对 产地 环境的 保护、 农产品 产业 的健 康 、 可持续 发展 有积 极和 深远 的意义 。DB37/T 4481.4 2021 1 土 壤中农 药残留
4、量 的测定 液相色 谱- 串联质 谱法 第 4 部 分： 霜脲 氰 残留量 的测定 1 范围 本文件 规定 了土 壤中 霜脲 氰残留 量液 相色 谱- 串联 质 谱测定 方法 。 本文件 适用 于土 壤中 霜脲 氰残留 量的 测定 。 注： 本标准的方法定量限为0.01 mg/kg ，线性范围为0.01 mg/L 0.5 mg/L 。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注 日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有
5、 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 6682 分 析实 验用 水 规格和 实验 方法 3 术语和 定义 本文件 没有 需要 界定 的术 语和定 义。 4 原理 试样经 乙腈 提取 ，提 取液 经净化 后， 用液 相色 谱串 联质谱 仪检 测， 外标 法定 量。 5 试剂与 材料 除非另 有说 明， 在分 析中 仅使用 分析 纯的 试剂 ，水 为GB/T 6682 规 定的 一级 水。 试剂 5.1 5.1.1 乙腈（CH3CN ，CAS 号：75-05-8）。 5.1.2 甲醇（CH3OH ，CAS 号：65-56-1） ：色 谱纯 。 5.1.3 乙酸铵 （CH3COONH4
6、 ，CAS 号：631-61-8） ：色 谱纯 。 5.1.4 氯化钠 （NaCl ，CAS 号：7647-14-5）：140 烘烤4 h。 5.1.5 无水硫 酸镁 （MgSO4 ，CAS 号：7487-88-9 ）：650 灼烧4 h， 置干 燥器 中贮 存 备用。 5.1.6 甲酸（HCOOH ，CAS 号：64-18-6 ）： 色谱 纯。 溶液配 制 5.2 0.05 % 甲酸+2 mmol/L 乙 酸 铵水溶液 ：准 确吸取0.5 mL 甲酸于1 000 mL容 量瓶中 ，准确称 取0.154 g 乙 酸铵于 上述1 000 mL 容量 瓶 中，用 水定 容至 刻度 ，然 后将其 置
7、于 超声 波中 超声15 min ，现 配现 用。 标准品 5.3 DB37/T 4481.4 2021 2 霜脲氰 标准 品(cymoxanil,C7H10N4O3 ，CAS号：57966-95-7)： 纯度 96 %。 标准溶 液配 制 5.4 5.4.1 霜脲氰 标准 储备 溶液 （100 mg/L ）： 准确 称取 10 mg （精确 至 0.1 mg ） 霜脲氰 标准品 于 10 mL 容 量瓶中 ， 用 甲醇 溶解 并转 移至 100 mL 容 量瓶 中， 用 甲醇定 容至 刻度 ， 混 匀，-18 冷冻 避光 保存 ， 有 效 期6 个 月。 5.4.2 霜脲氰 标准 工作 溶液
8、 （10 mg/L ） ： 准确 吸取1 mL 标 准储备 溶液 于 10 mL 容量 瓶中， 用甲醇 稀释 至刻度 ，混 匀，4 下保 存，有 效 期 1 个 月。 材料 5.5 5.5.1 乙二胺-N- 丙基 硅烷 化硅 胶 （PSA ）：40 m60 m 。 5.5.2 十八烷 基硅 烷键 合硅 胶(C18)：50 m 。 5.5.3 微孔滤 膜（ 有机 相） ：0.22 m 。 6 仪器和 设备 液相色 谱- 串联 质谱 ：配 备 电喷雾 离子 源（ESI ）。 6.1 天平： 感 量0.00 001 g 和 感量0.01 g 。 6.2 恒温水 浴振 荡器 （往 复式 ）。 6.3
9、瓶口分 液器 。 6.4 旋涡混 匀器 。 6.5 氮吹仪 。 6.6 离心机 ：5 000 r/min 。 6.7 离心管 ：50 mL 、15 mL 。 6.8 土壤筛 ：2 mm 孔 径。 6.9 7 试样制 备 土壤鲜 样， 除去 石块、 动植 物残体 等杂 物， 风干 后过2 mm 孔径 筛， 装入 洁净 容器， 密封， 标明 标记 ， 于-18 条 件下 保存 备用 。 8 分析步 骤 提取 8.1 称取 混匀后的 试样10 g （精确 至0.01 g）， 于50 mL 具塞 离心管中 ，加入10 mL水浸 泡1 h，然后 准确 加入乙 腈10.0 mL，于 40 水浴振 荡器 上
10、振 荡提 取30 min 后 ， 加入5 g氯 化钠 ， 涡 旋振荡1 min ， 5 000 r/min 离心5 min ，待 净化 。 净化 8.2 取上清 液2.0 mL 于15 mL 离 心管中 ， 分别 加入100 mg 无 水硫酸 镁 、100 mg PSA 、100 mg C18 ， 涡旋1 min ， 过0.22 m 滤膜 后上 机测 定。 仪器参 考条 件 8.3 DB37/T 4481.4 2021 3 8.3.1 液相色 谱参 考条 件 色谱柱 ：C18 ，100 mm 2.1 mm （i.d.），1.9 m， 或 性能相 当者 。 柱温：40 。 流速：0.2 mL/m
11、in 。 进样量 ：1.0 L。 流动相 组成 及梯 度洗 脱程 序见表1。 表1 流动相 及梯 度洗 脱程 序 时间 min 流动相 A （甲醇） % 流动相 B （0.05 % 甲酸+2 mmol/L 乙 酸铵水溶液） % 0 10 90 4.0 95 5 7.0 95 5 7.2 10 90 8.3.2 质谱参 考条 件 离子化 模式 ：电 喷雾 离子 源（ESI）。 去溶剂 气（N2 ）：15 mL/min 。 碰撞气 ：3 mL/min 。 碰撞气 类型 ：氩 气。 DL 管温 度：250 。 加热模 块温 度：400 。 扫描方 式： 正离 子模 式。 质谱扫 描模 式： 多反 应
12、监 测(MRM) ， 监测 条件 见表2 。 表2 霜脲氰 多反 应监 测(MRM) 的 条件 中文名称 保留时间 电离模式 定量离子对 碰撞能 V 定性离子对 碰撞能 V 霜脲氰 5.75 + 199.1/128.1 -8 199.1/111.1 -18 标准工 作曲 线 8.4 准确吸 取适 量4.4.2 中配 制 的系列 标准 溶液 ， 用 基质 空 白提取 液稀 释， 配制 成质 量 浓度为0.005 mg/L 、 0.01 mg/L 、0.05 mg/L 、0.1 mg/L 、0.5 mg/L 系列基 质 匹配标 准溶液 ，供液 相色 谱- 串联 质谱仪 测定 。以 测得峰 面积 为
13、纵 坐标 、 对 应的标 准溶 液质 量浓 度为 横坐标 ， 绘制 标准 工作 曲 线。 基质 匹配 标准 溶液 现 配 现用。 定性及 定量 测定 8.5 8.5.1 定性及 定量 测定 被 测 试 样中 目 标化 合 物色谱 峰 的 保留 时 间与 相 应标准 色 谱 峰的 保 留时 间 相比较 ， 相 对误 差 应在 2.5 % 之内 。 8.5.2 定量离 子、 定性 离子 及子 离子丰 度比 DB37/T 4481.4 2021 4 在相同 实验 条件 下进 行样 品测定 时， 如果 检出 的色 谱峰的 保留 时间 与标 准样 品相一 致， 并且 在 扣 除 背景后 的样 品质 谱图
14、 中， 目标化 合物 的质 谱定 性离 子应出 现， 而且 同一 检测 批次， 对同 一化 合 物 ， 样 品 中目标 化合物 的2个 离子 的 相对丰 度比与 浓度 相当 的 标准溶 液相比 ，其 相对 偏 差不超 过表3 规定的 范围 ， 则可判 断样 品中 存在 霜脲 氰。本 文件 的霜 脲氰 标准 物质多 反应 监测 色谱 图和 质谱图 参照 附录A。 表3 定性测 定时 时相 对离 子丰 度的最 大允 许偏 差 相对离子丰度 50 % 20 % 至 50 % 10 % 至 20 % 10 % 允许相对偏差 20 % 25 % 30 % 50 % 测定 8.6 将标准 工作溶 液与 待
15、测溶 液分别 注入液 相色 谱-串 联 质谱仪 中，以 保留 时间和 定性离 子定性 ，样 品 中霜脲 氰质量 浓度 应在标 准工作 曲线质 量浓 度范围 内，超 过工作 曲线 最高点 时则应 稀释后 再进 行分 析 ， 采用外 标法 定量 。 平行试 验 8.7 按8.1 8.6 的规 定对 同一 试样进 行平 行试 验测 定。 空白试 验 8.8 除不加 试样 外， 按照8.1 8.6的 规定 进行 平行 操作 。 9 数据处 理 试样中 霜脲 氰残 留含 量， 按式（1） 计算 ： X = 1 3 2 (1) 式中： X 试样 中霜 脲氰 残留 量，单 位为 毫克 每千 克(mg/kg)
16、 ； 霜脲 氰标 准工 作溶 液的质 量浓 度， 单位 为毫 克每升(mg/L) ； As 霜脲 氰标 准工 作溶 液的峰 面积 ； A 样品 中霜 脲氰 的峰 面积； V1 提取 溶剂 总体 积， 单位为 毫升(mL) ； V2 吸取 出用 于检 测的 提取溶 液的 体积 ，单 位为 毫升(mL) ； V3 样品 定容 体积 ，单 位为毫 升(mL) ； m 样品 质量 ，单 位为 克(g) 。 注： 计算结果应扣除 空白值， 测定 结果用平行测定 的算术平 均值 表示，保留2 位有效 数字，当结 果大于1 mg/kg 时， 保留3 位有效数字。 10 精密度 在重复 性条件 下，2 次独
17、立 测定结 果的绝 对差 不大于 重复性 限（r ），重 复性 限 （r）的 数据 应按 照 附录B 执行 。 在再现 性条件 下，2 次独 立 测定结 果的绝 对差 不大于 再现性 限（R ），再 现性 （R）的数 据应 按照 附 录C执 行。 DB37/T 4481.4 2021 5 11 回收率 本文件 的添 加水 平和 回收 率范围 应符 合附 录D 的要 求 。 DB37/T 4481.4 2021 6 附录A （资料 性） 霜脲氰 标准 溶液 多反 应监 测（MRM ） 色谱 图及 质谱 图 霜脲氰 标准 溶液 多反 应监 测（MRM ） 色谱 图见 图A.1 。 图A.1 霜脲氰
18、 标准 溶液（0.1 mg/L ）多 反应 监测 （MRM ）色 谱图 霜脲氰 标准 溶液 质谱 图见 图A.2 。 图A.2 霜脲氰 标准 溶液 （0.1 g/mL ） 质谱 图 DB37/T 4481.4 2021 7 附录B （规范 性） 实验室 重复 性限 （r ）数 据 实验室 重复 性限 （r ）数 据 见B.1 。 表B.1 实验室 重复 性限 （r ）数 据 名称 含量 mg/kg 重复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 含量 mg/kg 重复性限 r 霜脲氰 0.01 1 . 7 1 0 -3 0.05 8.1 1 0 -3 0.5 5.3 1 0 -2 DB37/T
19、4481.4 2021 8 附录C （规范 性） 实验室 再现 性限 （R ）数 据 实验室 再现 性限 （R ）数 据 见表C.1 。 表C.1 实验室 再现 性限 （R ）数 据 名称 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 含量 mg/kg 再现性限 R 霜脲氰 0.01 1.8 1 0 -3 0.05 8.7 1 0 -3 0.5 5.9 1 0 -2 DB37/T 4481.4 2021 9 附录D （规范 性） 土壤中 霜脲 氰的 回收 率数 据 土壤中 霜脲 氰的 回收 率数 据见表D.1 。 表D.1 三个添 加水 平下 土壤 中霜 脲氰的 回收 率和 变异 系数 化合物 添加水平 mg/kg 回收率 % 平均回收率 % RSD % 1 2 3 4 5 霜脲氰 0.01 96.0 84.0 74.0 80.0 96.0 86.0 11.4 0.05 86.7 83.4 99.1 82.6 92.8 88.9 7.8 0.5 81.9 85.4 86.4 84.5 85.0 84.6 2.0
