1、 ICS 13.020.40 CCS Z 10 44 广东 省 地方标准 DB44/T 2340.3 2021 诸氏鲻虾 虎鱼 毒理学评价 第 3 部分：生长抑 制 Mugilogobius chulae Toxicology evaluation Part 3: Growth inhibition 2021 - 10 - 18 发布 2022 - 01 - 18 实施 广东省市 场监督 管 理 局 发 布 DB44/T 2340.3 2021 I 目 次 前言 . II 1 范围 . 1 2 规 范性 引用 文件 . 1 3 术 语和 定义 . 1 4 原理 . 1 5 方法 . 2 6 器
2、材 . 2 7 评 价步 骤 . 2 8 质 量控 制 . 3 9 结 果与 报告 . 4 10 诸 氏鲻 虾虎 鱼安 乐死 . 5 11 实 验室 废弃 物处 理 . 5 附录A （资 料性 ） 诸氏 鲻虾虎 鱼生 长抑 制评 价原 始记录 表 . 6 DB44/T 2340.3 2021 II 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分： 标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定 起草。 DB44/T 2340 诸氏 鲻虾 虎 鱼 毒 理学 评价 分 为四 个 部分： 第1 部 分： 急性 毒性 ； 第2 部 分： 摄食 抑制 ； 第3 部 分
3、： 生长 抑制 ； 第4 部 分： 生殖 毒性 。 本文件 是DB44/T 2340的第3部分 。 请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。 本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任 。 本文件 由 广 东省 科学 技术 厅 提出 并组 织实 施。 本文件 由 广 东省 实验 动物 标准化 技术 委员 会（GD/TC 93 ） 归口 。 本文件 起草 单位 ： 广 东省 实验动 物监 测所 。 本文件 主要 起草 人： 李建 军 、黄韧 、 朱才 毅 、 余露 军 、 赖 素群 、林 忠婷 、陈 小曲 、 曾进 、蔡磊 。 DB44/T 2340.3 2021 1 诸 氏鲻
4、虾 虎鱼 毒 理学评 价 第 3 部 分：生 长抑制 1 范围 本文件 规定 了诸 氏鲻 虾虎 鱼 毒理 学评 价中 生长 抑制 的 原理 、 方 法 、 器材 、 评 价步骤 、 质 量控 制 、 结 果与报告 、 安乐 死和 实验 室废弃 物处 理 等 要求 。 本文件 适用 于直 接或 间接 排入海 洋、 入海 河口 的 污 染物 及 受纳 水体 的 生 长抑 制 毒性 评价 。 2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款 。 其 中 ， 注日 期的 引用 文件 ， 仅该日 期对 应的 版本 适用 于本文 件； 不注
5、日期 的引 用文件 ， 其 最新 版本 （包 括所有 的修 改单 ） 适 用 于 本 文件。 GB/T 18420.2-2009 海 洋 石油勘 探开 发污 染物 生物 毒性 第2 部分 ：检 验方 法 SN/T 3592 实 验室 化学 药 品和样 品废 弃物 处理 的标 准指南 DB44/T 2340.1-2021 诸 氏鲻虾 虎鱼 毒 理学 评价 第1 部 分： 急性 毒性 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。 生长抑 制 growth inhibition 实验 鱼 接触 外源 物质 后， 在一定 期间 内其 生长 受到 抑制的 毒性 效应 。 特定生 长率 spe
6、cific growth rate ，SGR 实验鱼 在试 验期 间的 日增 重速率 。 最低可 观察 效应 浓度 lowest observed effect concentration, LOEC 与空白 对照 相比 ，对 受试 生物产 生显 著(p0.05) 效 应的最 低受 试物 浓度 。 来源 ：GB/T 21828-2008 ，2.4 无可见 效应 浓度 no observed effect concentration, NOEC 实验生 物暴 露在 一组 不同 浓度的 试验 溶液 一定 时间 后， 通 过观 察实 验生 物的 不良影 响， 并比 较 试 验 组与对 照组 统计 分
7、析 结果 ，判定 出对 实验 生物 无显 著影响 （p 0.05 ） 的最 大 浓度。 来源 ：GB/T 18420.2 2009 ，3.2 4 原理 一定浓 度的 有毒 物质 暴露 下， 诸 氏鲻 虾虎 鱼的 摄食 行为和 代谢 水平 会受 到影 响， 从 而对 其生 长 速 度 产生不 同程 度的 抑制 效应 。 将幼 鱼期 的诸 氏鲻 虾虎 鱼暴露 于亚 致死 浓度 范围 的受试 物溶 液中 ， 试 验 周 期DB44/T 2340.3 2021 2 为14 d ，测量试验开始 和结束时的 诸氏鲻虾虎鱼体重，通过 回归模型来估计抑制x% 生 长率的浓度（ 如 ECx ） ， 并 统计 分
8、析最 低可 观察效 应浓 度 （LOEC ） 以 及无可 见效 应浓 度 （NOEC ） ， 以 评价 受试 物 对 诸 氏 鲻 虾虎鱼 的生 长抑 制效 应。 5 方法 分为静 态毒 性试 验、 半静 态毒性 试验 和流 水毒 性试 验。 试验期 间受试 物实 测浓度 与配制 浓度偏 差超 过20% 或 受试物 稳定性 不明 确时， 宜采用 半静态 毒性 试 验或流 水毒 性试 验。 6 器材 主要仪 器设 备 6.1.1 饲养诸 氏鲻 虾虎 鱼以 及饵 料生物 的养 殖箱 、水 处理 设备等 。 6.1.2 测定环 境因 子的 溶氧 仪、 盐度计 、pH 计 、温 度计 等 。 6.1.3
9、 电子天 平、 高速 搅拌 器、 生物显 微镜 、 游 标卡 尺 、 惰性材 料容 器、 量筒 、 胶 头滴管 、 手 抄 网 等 。 诸氏鲻 虾虎 鱼 宜采 用45日 龄75日 龄诸 氏鲻虾 虎鱼 ，其 质量 应符 合DB44/T 2340.1-2021 中6.2.1 的 规定 。 受试物 按照DB44/T 2340.1 2021 中6.3 的规 定执 行。 饵料 卤虫无 节幼 体， 质量 应符 合DB44/T 2340.1-2021中6.2.3.2 的规 定。 7 评价步 骤 样品准 备 7.1.1 稀释水 按照DB44/T 2340.1-2021 中7.1.1 的 规定 执行 。 7.1
10、.2 贮备液 配制 按照DB44/T 2340.1-2021 中7.1.2 的 规定 执行 。 预试验 设置5 个 等比 浓度组 和一 个 空白对 照组。 若使 用助溶 剂应增 设助溶 剂对 照组， 助溶剂 的浓度 应与 试 验组中 助溶 剂最 高浓 度一 致， 助 溶剂 的最 高浓 度不 超 过0.1 。 可采 用较 大的 等 比系数 ， 可 不设 平行 组。 每个容器 放5尾 10 尾诸 氏 鲻虾虎 鱼。 观 察并 记录 诸 氏鲻虾 虎鱼96 h 的死 亡情 况， 确 定 死亡 率不 超过10% （LC10 ） 的 受试 物浓 度范围 。 DB44/T 2340.3 2021 3 正式试
11、验 7.3.1 试验浓 度设 定 根据预 试验 或受 试物 毒性 数据， 设置 至少5个 等比 浓 度组和1个 空白 对照 组 ， 等 比系数 不宜 大于2.0 ， 最高浓 度 不 大于96 h LC10 。 若使用 助溶 剂应 增设 助溶 剂对照 组 ， 助 溶剂 的浓 度 应与试 验组 中助 溶剂 的最 高浓度 一致 ，助 溶剂 的最 高浓度 不超 过0.1 。各 试 验组设3个 平行 。 7.3.2 诸氏鲻 虾虎 鱼的 测量 和移 入 7.3.2.1 试验开 始 前5 h 24 h 应 停止投 喂 驯 养鱼 。 7.3.2.2 随机抽取 30 尾 实验 鱼， 逐 尾测量 体长 （精 度
12、：0.1 mm ） ， 测 量结 果记 录于 附录A 中的 表A.3 ， 体长变 异系 数应 小 于15% ；并称 量其 总 湿 重， 测量 结果记 录于 附 录 A 中的表A.4 。 7.3.2.3 用手抄 网在驯 养箱 中随机 捞取诸 氏鲻虾 虎鱼 ，从低 浓度组 开始依 次向 高浓度 组 分放 ，每个容 器10 尾， 在30 min 内完 成。 7.3.3 试验周 期 试验周 期为14 d 。 7.3.4 试验环 境条件 养殖密 度每 升不 超过10 尾 ，其它 要求 按DB44/T 2340.1-2021 中7.4.3 的规 定执 行。 7.3.5 诸氏鲻 虾虎 鱼投 喂 每天投喂2
13、次卤 虫无 节幼 体 ， 每 次过 量投 喂 （ 每尾 鱼 投喂200个300 个卤 虫 ） ， 投 喂1 h 后捞 出剩 余 卤虫无 节幼 体 。 7.3.6 试验溶 液更 换 静态毒 性试 验不 更换 试验 溶 液。 半静态 毒性 试验 每48 h 至 少更换 一次 试液 ， 每 次更 换量不 少于 原试 液体 积的3/4 。宜 采用 虹吸 方式 吸出原 液， 缓慢 加入 新液 ， 操作 过程 中 应 避免 触碰 诸氏鲻 虾虎 鱼 。 流水毒 性试 验应 根据 受试 物的稳 定性 ， 每24 h 至少 更换一次 贮 备液 。 一个试 验容器24 h 的流 量 至 少 为该容 器内 试验 溶
14、液 体积 的5倍 。试 验期 间流 速变 幅 不大于10% 。 7.3.7 观察和 记录 试验开始 和 试验 结束 时分 别测 量 水温 、 溶 解氧 、pH 值、盐 度 ， 测定 结果 记录 于附录A的表A.2 中。 每24 h 至少 观察 一次 诸氏 鲻虾虎 鱼的 体色 、 体形 、 活动状 态 、 死 亡等 毒性 效 应， 观察 结果 记录 在 附 录A的表A.2 中。 用胶 头滴 管轻吹 诸氏 鲻虾 虎鱼 无反 应的判 为死 亡个 体。 应及 时移出 死亡 个体 。 流水毒性 试 验每24 h 至少 应测量 一次 流速 ，测 定结 果记录 于附 录A 的表A.2 中 。 试验结 束前2
15、4 h 停 止投喂，称量 各试验组存活鱼 的总湿重 或逐尾称量湿重 ，记录于 附录A的表A.4 中。 8 质量控 制 DB44/T 2340.3 2021 4 有效的 试验 应符 合以 下条 件： 试验结 束时 对照 组的 诸氏 鲻虾虎 鱼死 亡率 不超 过 10% ； 试验结 束时 对照 组实 验鱼 的平均 增重 应超过 100% ； 原始记 录应 完整 ，包 括样 品名称 、编 号、 试验 时间 、评价 依据 、驯 养记 录等 。 9 结果 与 报告 结果计 算 9.1.1 特定生 长率 的计 算 试验期 间各 试验 组的 特定 生长率 （SGR ）按 式（1） 计算。 SGR=（lnWt
16、-lnW0 ）/t 100% (1) 式中： Wt 终末 体重 ； W0 初始 体重 ； t 试验 天数 。 死亡率 超过10% 的试 验组 不 计算特定 生 长率 。 9.1.2 生长抑 制率 的计 算 试验期 间各 试验 组 的 生长 抑制率H 按 式（2） 计算 。 100 0 t 0 R R R H (2) 式中： R0 对照 组诸 氏鲻 虾虎 鱼的特 定生 长率 ； Rt 试验 组诸 氏鲻 虾虎 鱼的特 定生 长率 。 9.1.3 NOEC 和 LOEC 的 计算 按照GB/T 18420.2-2009 中9.2.2.3 规 定的 方法 计算 。 9.1.4 ECx 的计 算 按照G
17、B/T 18420.2-2009 中9.2.3 规定 的方 法计 算。 评价报告 评价 报 告应 包括 下列 内容 ： a) 受试样品 的 名称 、来 源、 保存方 法、 保存 时间 等 ； b) 诸氏鲻 虾虎 鱼来 源、 日龄 、体长 、驯 养情 况 ； c) 试验条 件： 1) 试验方 式， 如半 静态 毒性 试验或 流水 式毒 性试 验， 以及曝 气、 密度 等； 2) 贮备液 和试 验溶 液配 制方 法、浓 度； 3) 各试验 容器 诸氏 鲻虾 虎鱼 的数量 ； DB44/T 2340.3 2021 5 4) 试验溶 液配 制后 和试 验结 束时的 环境 指标 ，如 水温 、溶氧 、盐
18、 度、pH 等。 d) 结果： 1) 对照组 和各 浓度 组诸 氏鲻 虾虎鱼 的死 亡率 ； 2) 试验期 间 受 试物 对诸 氏鲻 虾虎鱼 的毒 性效 应 ； 3) 生长抑 制 ECx 、NOEC 和LOEC ，及 其计 算方 法； 4) 试验期 间可 能会 影响 试验 结果的 因素 。 10 诸氏鲻 虾虎 鱼安 乐死 按照DB44/T 2340.1-2021 中第10 章的 规定 执行 。 11 实验室 废弃 物处 理 按照SN/T 3592 的规 定执 行 。 DB44/T 2340.3 2021 6 A A 附录A （资料 性） 诸氏鲻 虾虎 鱼生 长抑 制评 价原始 记录 表 A.1
19、 试验溶 液配 制记 录表 试验溶 液配 制记 录见 表A.1 。 表A.1 试验溶 液配 制记 录表 样品名 称： 样品 编号 ： 评 价日 期： 样品表 观性 状： 评价 依据 ： 记 录时 间： 稀释水 ： 曝气24 h 以上 的 自来水 ，pH 值： ； 天然 海水 ，盐 度： ， pH 值： 。 称量 样 品 g ； 加入 mL 稀 释水溶解，定容至 mL ；配制成 浓度为 mg/L 的 贮备液。 组别 浓度 mg/L 总体积 mL 贮备液 mL 稀释水 mL 对照组 试验组1 试验组2 试验组3 试验组4 试验组5 评价人 （签 名） ： 复核 人（签 名） ： A.2 试验观 察
20、和 环境 因子 测定 原始记 录表 试验观 察和 环境 因子 测定 原始记 录见 表A.2 。 DB44/T 2340.3 2021 7 表A.2 试验观 察 和 环境 因子 测定 原始记 录表 样品名 称： 样品 编号 ： 评 价日 期： 样品表 观性 状： 评价 依据 ： 记 录时 间： 毒性效 应 （a） 毒 性效 应 （b ） 毒性效 应 （c） 毒 性效 应 （d ） 注： 根据观察结果，可增加毒性效应编号。 组别 存活数 水温 pH 盐度 DO mg/L 流速 L/s 毒性效应 对照组 A B C 组 1 ： mg/L A B C 组 2 ： mg/L A B C 组 3 ： mg
21、/L A B C 组 4 ： mg/L A B C 组 5 ： mg/L A B C 注： “毒性效应”列填入的数字和字母分别表示出现死亡以外的毒性效应的鱼数及该效应的编号。 评价人 （签 名） ： 复 核 人（签 名） ： A.3 体长测 量原 始记 录表 体长测 量原 始记 录见 表A.3 。 DB44/T 2340.3 2021 8 表A.3 体长测 量原 始记 录表 样品名 称： 样品 编号 ： 评 价日 期： 样品表 观性 状： 评价 依据 ： 记 录时 间： 序号 体长 mm 序号 体长 mm 序号 体长 mm 1 11 21 2 12 22 3 13 23 4 14 24 5 1
22、5 25 6 16 26 7 17 27 8 18 28 9 19 29 10 20 30 评价人 （签 名） ： 复 核 人（签 名） ： A.4 体重测 量原 始记 录表 体重测 量原 始记 录见 表A.4 。 DB44/T 2340.3 2021 9 表A.4 体重测 量原 始记 录表 样品名 称： 样品 编号 ： 评 价日 期： 样品表 观性 状： 评价 依据 ： 记 录时 间： 指标 示例1 ： 对 照组 示例2 ：试 验组1 试验组 2 试验组 3 试验组 4 试验组 5 示例3 ：A 示例4 ：B 示例5 ：C 示例6 ：A 示例7 ：B 示例8 ：C 示例9 ：A 示例10：B
23、 示例11：C 示例12：A 示例13 ：B 示例14：C 示例15 ：A 示例16：B 示例17：C 示例18：A 示例19：B 示例20：C 初始平均湿 重/g 14 d 个 体 湿 重 /g 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 14 d 平均湿 重/g 评价人 （签 名） ： 复 核 人（签 名） ： DB44/T 2340.3 2021 10 广东省地方标 准 诸氏鲻虾虎鱼 毒理 学评 价 第 3 部分：生长抑制 DB44/T 2340.3 2021 * 广东省 标准 化研 究院 组织 印刷 广州市 海珠 区南 田 路563 号 1304 室 邮政编 码：510220 电话：020-84250337 DB44/T 2340.3 2021
