1、I C S 6 5 . 1 2 0 C C S B 4 6 DB50 重 庆 市 地 方 标 准 猪 用 液 态 发 酵 饲 料 生 产 技 术 规 程 2 0 2 1 1 1 0 1 发 布 2 0 2 2 0 2 0 1 实 施 重 庆 市 市 场 监 督 管 理 局 发 布 D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1 I 前 言 本 文 件 按 照 G B / T 1 . 1 - 2 0 2 0 标 准 化 工 作 导 则 第 1 部 分 ： 标 准 化 文 件 的 结 构 和 起 草 规 则 的 规 定 起 草 。 本
2、文 件 由 重 庆 市 农 业 农 村 委 员 会 提 出 并 归 口 。 本 文 件 起 草 单 位 ： 重 庆 市 畜 牧 科 学 院 、 生 物 饲 料 开 发 国 家 工 程 研 究 中 心 。 本 文 件 主 要 起 草 人 员 ： 刘 志 云 、 钟 晓 霞 、 官 小 凤 、 周 晓 容 、 杨 飞 云 、 姚 焰 础 、 黄 健 、 黄 金 秀 、 王 琪 、 刘 世 杰 、 邓 雪 娟 。D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1 1 猪 用 液 态 发 酵 饲 料 生 产 技 术 规 程 1 范 围 本 文 件 规 定 了 猪 用 液 态 发 酵 饲 料 生 产
3、 中 涉 及 的 原 料 选 择 、 生 产 环 境 、 主 要 设 备 、 工 艺 流 程 、 存 储 和 使 用 等 要 求 。 本 文 件 适 用 于 猪 用 液 态 发 酵 饲 料 的 生 产 。 2 规 范 性 引 用 文 件 下 列 文 件 中 的 内 容 通 过 文 中 的 规 范 性 引 用 而 构 成 本 文 件 必 不 可 少 的 条 款 。 其 中 ， 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 仅 该 日 期 对 应 的 版 本 适 用 于 本 文 件 ； 不 注 日 期 的 引 用 文 件 ， 其 最 新 版 本 （ 包 括 所 有 的 修 改 单 ） 适 用 于 本 文 件
4、 。 G B 3 0 9 5 环 境 空 气 质 量 标 准 G B / T 1 0 4 6 8 水 果 和 蔬 菜 产 品 p H 值 的 测 定 方 法 G B 1 3 0 7 8 饲 料 卫 生 标 准 N Y / T 1 4 4 4 微 生 物 饲 料 添 加 剂 技 术 通 则 N Y / T 5 0 2 7 无 公 害 食 品 畜 禽 饮 用 水 水 质 饲 料 原 料 目 录 （ 农 业 农 村 部 公 告 第 4 5 9 号 ） 饲 料 添 加 剂 品 种 目 录 （ 2 0 1 3 ） （ 农 业 农 村 部 公 告 第 4 5 9 号 ） 3 术 语 和 定 义 下 列 术
5、 语 和 定 义 适 用 于 本 文 件 。 3 . 1 液 态 发 酵 饲 料 f e r m e n t e d l i q u i d f e e d 使 用 饲 料 添 加 剂 品 种 目 录 （ 2 0 1 3 ） 允 许 使 用 的 微 生 物 菌 种 ， 通 过 发 酵 工 程 技 术 对 符 合 饲 料 原 料 目 录 的 饲 料 原 料 进 行 发 酵 所 得 到 的 总 水 分 不 低 于 7 0 % 的 饲 料 。 4 原 料 选 择 4 . 1 饲 料 原 料 发 酵 所 用 的 饲 料 原 料 应 符 合 饲 料 原 料 目 录 和 G B 1 3 0 7 8 的 规
6、 定 。 主 要 包 括 玉 米 、 大 麦 、 豆 粕 、 麦 麸 等 为 代 表 的 大 宗 饲 料 原 料 ； 以 土 豆 皮 、 豆 渣 、 柑 橘 渣 、 酒 糟 等 为 代 表 的 地 源 性 饲 料 原 料 。 4 . 2 添 加 剂 宜 选 用 抑 制 杂 菌 增 殖 ， 促 进 发 酵 菌 快 速 生 长 的 添 加 剂 。D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1 2 4 . 3 发 酵 菌 种 应 符 合 饲 料 添 加 剂 品 种 目 录 （ 2 0 1 3 ） 和 N Y / T 1 4 4 4 的 规 定 。 发 酵 菌 种 宜 选 用 乳 酸 菌 ，
7、其 有 效 活 菌 数 不 低 于 1 0 8 C F U / g 。 5 生 产 环 境 5 . 1 空 气 发 酵 车 间 的 空 气 应 符 合 G B 3 0 9 5 中 4 . 2 的 规 定 。 5 . 2 水 应 符 合 N Y / T 5 0 2 7 的 规 定 。 5 . 3 车 间 包 含 但 不 限 于 ： 1 ） 相 对 隔 离 的 发 酵 菌 种 培 养 室 ； 2 ） 饲 料 原 料 库 ； 3 ） 液 态 发 酵 设 备 间 ； 4 ） 检 验 室 6 主 要 设 备 包 含 但 不 限 于 ： 1 ） 粉 碎 设 备 ； 2 ） 搅 拌 混 合 设 备 ； 3
8、） 液 体 发 酵 设 备 ； 4 ） 消 毒 或 灭 菌 设 备 ； 5 ） 菌 种 培 养 设 备 7 工 艺 流 程 7 . 1 操 作 流 程 见 图 1 。 图 1 工 艺 流 程 图 菌 液 制 备 接 种 存 储 和 使 用 原 料 预 处 理 配 料 发 酵 发 酵 终 点 判 断 水 分 调 节D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1 3 7 . 2 饲 料 原 料 预 处 理 玉 米 、 大 麦 、 豆 粕 、 麦 麸 等 大 宗 饲 料 原 料 宜 进 行 4 0 0 m 1 5 0 0 m 的 粉 碎 。 土 豆 皮 、 豆 渣 、 柑 橘 渣 、 酒 糟
9、 等 地 源 性 饲 料 原 料 根 据 原 料 特 性 进 行 筛 分 、 粉 碎 、 酶 解 或 加 热 等 预 处 理 ， 使 之 处 于 易 发 酵 状 态 。 7 . 3 配 料 按 照 饲 料 配 方 需 求 ， 先 将 预 处 理 后 的 饲 料 原 料 投 入 发 酵 容 器 中 ， 再 投 入 添 加 剂 混 合 均 匀 。 7 . 4 发 酵 7 . 4 . 1 发 酵 菌 液 制 备 商 用 干 粉 状 发 酵 剂 宜 活 化 后 使 用 ； 非 商 用 发 酵 剂 宜 活 化 、 扩 繁 后 使 用 。 7 . 4 . 2 接 种 将 制 备 好 的 发 酵 菌 液 或
10、 菌 粉 与 发 酵 原 料 混 合 均 匀 ， 置 于 发 酵 容 器 中 密 封 ， 混 合 后 活 菌 数 宜 1 0 5 C F U / m L 。 7 . 4 . 3 水 分 调 节 根 据 原 料 特 性 调 节 加 水 量 ， 混 合 后 总 含 水 量 宜 高 于 7 0 % 。 7 . 4 . 4 发 酵 温 度 一 般 物 料 温 度 控 制 在 1 5 4 0 。 7 . 4 . 5 发 酵 时 间 发 酵 时 间 一 般 为 2 4 h 7 2 h 。 7 . 4 . 6 发 酵 方 式 兼 性 厌 氧 或 厌 氧 液 态 发 酵 。 7 . 4 . 7 发 酵 终 点
11、 判 断 发 酵 终 点 的 判 定 宜 同 时 满 足 下 列 条 件 ： 1 ） 外 观 色 泽 一 致 ； 2 ） 发 酵 酸 香 味 ， 无 异 味 ； 3 ） p H 在 3 . 7 4 . 5 之 间 ， 检 测 方 法 按 照 G B / T 1 0 4 6 8 规 定 执 行 ； 4 ） 乳 酸 菌 活 菌 数 1 1 0 7 C F U / m L ， 检 测 方 法 按 照 附 录 A 的 规 定 执 行 。 8 存 储 和 使 用 制 备 好 的 液 态 发 酵 饲 料 ， 密 封 存 储 。 使 用 前 应 注 意 调 制 ， 确 保 营 养 均 衡 ， 然 后 进 入
12、 饲 喂 端 。D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1 4 附 录 A （ 规 范 性 ） 乳 酸 菌 计 数 A . 1 设 备 和 材 料 除 微 生 物 实 验 室 常 规 灭 菌 及 培 养 设 备 外 ， 其 他 设 备 和 材 料 如 下 ： 1 ) 恒 温 培 养 箱 ： 3 6 1 ； 2 ) 冰 箱 ： 2 5 ； 3 ) 均 质 器 及 无 菌 均 质 袋 、 均 质 杯 或 灭 菌 乳 钵 ； 4 ) 天 平 ： 感 量 0 . 0 1 g ； 5 ) 无 菌 试 管 ： 1 8 m m 1 8 0 m m 、 1 5 m m 1 0 0 m m ； 6
13、) 无 菌 吸 管 ： 1 m L （ 具 0 . 0 1 m L 刻 度 ） 、 1 0 m L （ 具 0 . 1 m L 刻 度 ） 或 微 量 移 液 器 及 吸 头 ； 7 ) 无 菌 锥 形 瓶 ： 5 0 0 m L 、 2 5 0 m L 。 A . 2 试 剂 所 用 试 剂 包 含 但 不 限 于 ： 1 ) 氯 化 钠 ： 分 析 纯 ； 2 ) 磷 酸 氢 二 钾 （ 七 水 ） ： 分 析 纯 ； 3 ) 醋 酸 钠 （ 三 水 ） ： 分 析 纯 ； 4 ) 柠 檬 酸 三 铵 ： 分 析 纯 ； 5 ) 硫 酸 镁 （ 七 水 ） ： 分 析 纯 ； 6 ) 硫
14、酸 锰 （ 四 水 ： 分 析 纯 ； 7 ) 琼 脂 粉 ； 8 ) 牛 肉 粉 ； 9 ) 酵 母 粉 ； 1 0 ) 葡 萄 糖 ； 1 1 ) 吐 温 8 0 。 A . 3 溶 液 及 培 养 基 的 制 备 A . 3 . 1 生 理 盐 水 的 制 备 称 取 氯 化 钠 9 g 加 入 到 1 0 0 0 m L 蒸 馏 水 中 ， 加 热 溶 解 ， 分 装 后 1 2 1 高 压 灭 菌 1 5 m i n 2 0 m i n 。 A . 3 . 2 M R S 培 养 基 的 制 备 A . 3 . 2 . 1 称 取 蛋 白 胨 1 0 . 0 g 、 牛 肉 粉 5
15、. 0 g 、 酵 母 粉 4 . 0 g 、 葡 萄 糖 2 0 . 0 g 、 吐 温 8 0 1 . 0 m L 、 磷 酸 氢 二 钾 2 . 0 g 、 醋 酸 钠 5 . 0 g 、 柠 檬 酸 三 铵 2 . 0 g 、 硫 酸 镁 0 . 2 g 、 硫 酸 锰 0 . 0 5 g 、 琼 脂 粉 1 5 . 0 g 。 A . 3 . 2 . 2 将 上 述 成 分 加 入 到 1 0 0 0 m L 蒸 馏 水 中 ， 加 热 溶 解 ， 调 节 p H 至 6 . 2 0 . 2 ， 分 装 后 1 2 1 高 压 灭 菌 1 5 m i n 2 0 m i n 。 A
16、. 4 操 作 步 骤D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1 5 A . 4 . 1 样 品 匀 液 的 制 备 液 态 发 酵 饲 料 样 品 应 先 将 其 充 分 混 匀 后 ， 以 无 菌 吸 管 吸 取 样 品 2 5 m L 放 入 装 有 2 2 5 m L 生 理 盐 水 的 无 菌 锥 形 瓶 （ 瓶 内 预 置 适 当 数 量 的 无 菌 玻 璃 珠 ） 中 ， 充 分 振 摇 ， 制 成 1 1 0 的 样 品 匀 液 。 A . 4 . 2 稀 释 A . 4 . 2 . 1 用 1 m L 无 菌 吸 管 或 微 量 移 液 器 吸 取 1 1 0 样
17、 品 匀 液 1 m L ， 沿 管 壁 缓 慢 注 于 装 有 9 m L 生 理 盐 水 的 无 菌 试 管 中 （ 注 意 吸 管 尖 端 不 要 触 及 稀 释 液 ） ， 振 摇 试 管 或 换 用 1 支 无 菌 吸 管 反 复 吹 打 使 其 混 合 均 匀 ， 制 成 1 1 0 0 的 样 品 匀 液 。 A . 4 . 2 . 2 另 取 1 m L 无 菌 吸 管 或 微 量 移 液 器 吸 头 ， 按 上 述 操 作 顺 序 ， 做 1 0 倍 递 增 样 品 匀 液 ， 每 递 增 稀 释 一 次 ， 即 换 用 1 次 1 m L 灭 菌 吸 管 或 吸 头 。 A
18、 . 4 . 3 乳 酸 菌 计 数 根 据 待 检 样 品 活 菌 总 数 的 估 计 ， 选 择 2 个 3 个 连 续 的 适 宜 稀 释 度 ， 每 个 稀 释 度 吸 取 1 m L 样 品 匀 液 于 灭 菌 平 皿 内 ， 每 个 稀 释 度 做 两 个 平 皿 。 稀 释 液 移 入 平 皿 后 ， 将 冷 却 至 4 8 的 M R S 琼 脂 培 养 基 倾 注 入 平 皿 1 5 m L ， 转 动 平 皿 使 混 合 均 匀 。 3 6 1 厌 氧 培 养 7 2 h 2 h 。 从 样 品 稀 释 到 平 板 倾 注 要 求 在 1 5 m i n 内 完 成 。 A
19、 . 4 . 4 菌 落 计 数 A . 4 . 4 . 1 菌 落 计 数 以 菌 落 形 成 单 位 （ c o l o n y - f o r m i n g u n i t s ， C F U ） 表 示 。 每 个 稀 释 度 的 菌 落 数 应 采 用 两 个 平 板 的 平 均 数 。 可 用 肉 眼 观 察 ， 必 要 时 用 放 大 镜 或 菌 落 计 数 器 ， 记 录 稀 释 倍 数 和 相 应 的 菌 落 数 量 。 A . 4 . 4 . 2 选 取 菌 落 数 在 3 0 C F U 3 0 0 C F U 之 间 、 无 蔓 延 菌 落 生 长 的 平 板 计 数
20、 菌 落 总 数 。 低 于 3 0 C F U 的 平 板 记 录 具 体 菌 落 数 ， 大 于 3 0 0 C F U 的 可 记 录 为 多 不 可 计 。 每 个 稀 释 度 的 菌 落 数 应 采 用 两 个 平 板 的 平 均 数 。 A . 4 . 4 . 3 其 中 一 个 平 板 有 较 大 片 状 菌 落 生 长 时 ， 则 不 宜 采 用 ， 而 应 以 无 片 状 菌 落 生 长 的 平 板 作 为 该 稀 释 度 的 菌 落 数 ， 若 片 状 菌 落 不 到 平 板 的 一 半 ， 而 其 余 一 半 中 菌 落 分 布 又 很 均 匀 ， 即 可 计 算 半 个
21、 平 板 后 乘 以 2 ， 代 表 一 个 平 板 菌 落 数 。 A . 4 . 4 . 4 当 平 板 上 出 现 菌 落 间 无 明 显 界 线 的 链 状 生 长 时 ， 则 将 每 条 单 链 作 为 一 个 菌 落 计 数 。 A . 5 结 果 表 述 A . 5 . 1 若 只 有 一 个 稀 释 度 平 板 上 的 菌 落 数 在 适 宜 计 数 范 围 内 ， 计 算 两 个 平 板 菌 落 数 的 平 均 值 ， 再 将 平 均 值 乘 以 相 应 稀 释 倍 数 ， 作 为 每 克 或 每 毫 升 中 菌 落 总 数 结 果 。 A . 5 . 2 若 有 两 个 连
22、 续 稀 释 度 的 平 板 菌 落 数 在 适 宜 计 数 范 围 内 时 ， 按 下 列 公 式 计 算 ： 式 中 ： 样 品 中 菌 落 数 ； 平 板 （ 含 适 宜 范 围 菌 落 数 的 平 板 ） 菌 落 数 之 和 ； 稀 释 度 （ 低 稀 释 倍 数 ） 平 板 个 数 ； 第 二 稀 释 度 （ 高 稀 释 倍 数 ） 平 板 个 数 ； 稀 释 因 子 （ 第 一 稀 释 度 ） 。 A . 5 . 3 若 所 有 稀 释 度 的 平 板 上 菌 落 数 均 大 于 3 0 0 C F U ， 则 对 稀 释 度 最 高 的 平 板 进 行 计 数 ， 其 他 平 板
23、 可 A . 5 . 4 记 录 为 多 不 可 计 ， 结 果 按 平 均 菌 落 数 乘 以 最 高 稀 释 倍 数 计 算 。 A . 5 . 5 若 所 有 稀 释 度 的 平 板 菌 落 数 均 小 于 3 0 C F U ， 则 应 按 稀 释 度 最 低 的 平 均 菌 落 数 乘 以 稀 释 倍 数 计 算 。D B 5 0 / T 1 1 4 7 2 0 2 1 6 A . 5 . 6 若 所 有 稀 释 度 （ 包 括 液 体 样 品 原 液 ） 平 板 均 无 菌 落 生 长 ， 则 以 小 于 1 乘 以 最 低 稀 释 倍 数 计 算 。 A . 5 . 7 若 所 有 稀 释 度 的 平 板 菌 落 数 均 不 在 3 0 C F U 3 0 0 C F U 之 间 , 其 中 一 部 分 小 于 3 0 C F U 或 大 于 3 0 0 C F U 时 ， 则 以 最 接 近 3 0 C F U 或 3 0 0 C F U 的 平 均 菌 落 数 乘 以 稀 释 倍 数 计 算 。 _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _
