1、 ICS 65.020.01 CCS B05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 2544 2022 大球盖菇 菌种制作 技术规程 Regulation of strain manufacture for stropharia rugosoannulata 2022-04-25 发布 2022-05-25 实施 内蒙古自 治区市 场 监督管理 局 发 布 DB15/T 2544 2022 I 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化 工作 导则 第1 部分：标准 化文 件的 结构 和起草 规则 的 规 定起草。本文件由内蒙古自治区果蔬标准化技术委员会（SAM/TC 25）
2、归口。本文件起草单位：内蒙古自治区农牧业科学院。本文件主要起草人：王海燕、孙国琴、李亚娇、庞杰、于传宗、王永、韩凤英、扈顺、薛国萍、慕宗杰、付崇毅、康立茹。DB15/T 2544 2022 1 大 球盖菇 菌种制作 技术规 程 1 范围 本文件 规定 了大 球盖 菇菌 种生产 要求、母 种生 产、原 种和栽 培种 生产、检 验、入 库等技 术流 程要 点。本文件 适用 于大 球盖 菇母 种、原 种、栽培 种菌 种制 作要求。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期对 应的 版本
3、适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 4806.7 食 品安 全国 家 标准食 品接 触用 塑料 材料 及制品 NY/T 528 食用 菌菌 种生 产技术 规程 NY/T 1731 食 用菌 菌种 良 好作业 规范 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。菌种 spawn 通过生 产试 验验 证具 有特 异性、均一 性和 稳定 性，丰产性 好、抗性 强的 大球 盖菇 菌 株或 品种，培 养生长在 适宜 基质 上具 结实 性的菌 丝培 养物，包 括母 种、原 种和 栽培 种。母种 stock culture
4、经 各 种 方法 选 育得 到 的具有 结 实 性的 菌 丝体 纯 培养物 及 其 继代 培 养物，以玻璃 试 管 或培 养 皿为 培养容器 和使 用单 位，也称 为一级 种、试管 种。原种 pre-culture spawn 由母种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物。常 以菌种 瓶（玻璃 菌种 瓶或 塑料菌 种瓶）或（12 17）cm（2228）cm（0.04 0.05）mm聚 丙烯 塑料袋 为容 器。也称 为二 级种。栽培种 spawn DB15/T 2544 2022 2 由原种 移植、扩 大培 养而 成的菌 丝体 纯培 养物。常 以菌种 瓶（玻璃 瓶或 塑料 瓶）或（15
5、17）cm（33 35）cm（0.04 0.05）mm聚丙烯塑料袋为容器。栽培种只能 用于扩大到栽培出菇袋或 直接出菇，不 可以 再次 扩大 繁殖 菌种。也称 为三 级种。4 菌种生 产要 求 人员 生 产 所 需要 的 技术 人 员和检 验 人 员应 经 过专 业 培训、掌 握 基础 知 识及 菌 种生产 技 术 规程 要 求的 相应专业 技术 人员。场地、厂房 菌种生 产应 选择 地势 高，通风良 好，空气 清新，水 源近，排水 通畅，交 通便 利的场 所。场地 环境条件符 合NY/T 528规定。菌种生 产厂 房要 求有 各自 隔离的 摊晒 场、原材 料库、配料分 装库。配 套有 配料
6、室、搅拌 室、装袋（瓶）室、灭 菌室、冷 却室、接 种 室、培 养室（通 风好，有 纱 窗）、菌种 检测 室及 菌种 冷 藏库等 各环 节的 设施。冷却室、接 种室，培 养室 都要有 离子 净化 设施。菌 种生产 厂房 条件 应符 合NY/T 1731 规定。生产设 备 菌种生 产需要 粉碎 机、电 子秤、搅拌机、装 袋（瓶）机、高压灭 菌锅 或常压 灭菌锅、离子 净化 器、超净工 作台 或接 种箱、恒 温培养 箱、培养 架、摇床、液体 菌种 灌（30 L 250 L）、显 微镜 等设 备。菌种生产 设备 应符 合NY/T 1731 规定。5 母种生 产 培养基 马铃薯200 g、葡萄 糖20
7、 g、蛋白 胨1.5 g、琼 脂18 g、加水 至1000 mL。容器 试管规 格18 mm 180 mm 或者20 mm 200 mm；培 养皿直 径7 cm 9 cm；三 角瓶规 格300 mL 500 mL。分装和 灭菌 5.3.1 斜面培 养基 分装 和灭 菌 分装培 养基至 试管1/4 处，用棉塞 或硅胶 塞封 闭试管 口，每5 支试 管为1 把，牛 皮纸包 棉塞，橡皮 筋扎紧，棉塞 向上 放置。棉 塞应采 用梳 棉，不能 使用 脱脂棉。在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭菌25 min。灭菌后 温度降 到（65 5）时，在空气 清洁 的室内 摆斜面，要求 斜面
8、 长度不 超过试 管长度 的2/3。从摆好 的试 管中 抽取3%5%的 试管，在28 下培 养48 h，无 微生 物长 出为 灭菌合 格。5.3.2 平板培 养基 分装 和灭 菌 DB15/T 2544 2022 3 培养基 装入300 mL 500 mL 三角 瓶至 刻度 的2/3 处，用带滤 膜的 封口 膜封 口后 放入灭 菌锅；玻 璃 培养皿用 报纸 包好，放 入灭 菌锅。在温 度升 至102 105 排净 冷空 气后 升 压，升 至121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）恒温灭 菌25 min。灭菌后 温度降 到（65 5）时，在超净 工作 台内将 三角瓶 中的培 养基 分
9、装至 无菌培 养皿中，培 养基占培 养皿 高度 的1/3 1/2。接种 超净工 作台 或接 种箱 紫外 灯照射30 min 后 吹风，之 后用75%酒 精进 行表 面消 毒。接菌 过程 严格 执 行无菌操 作，接种 后及 时贴 好标签 并做 好记 录。将3 mm 5 mm 菌 块接 种在 培养皿 或试 管培 养基 的中 部，培 养皿 需用 石腊 封口 膜密封。菌丝长 满培 养基 表面 即可 使用。培养 在通风 避光、18 28 下培 养。接种后 每隔2 d 3 d 检验 一次，挑出 菌种 未活、污 染和生 长不 良的 不合 格培 养物。6 原种、栽培 种生 产 培养基 谷粒或 麦粒90%，柠条
10、粉、麦麸、棉 籽壳、玉 米芯 粉 或豆秸 粉9%，石膏1%。水 分含量60%65%，pH值调 至6 7。容器 原种采 用850 ml 以下、瓶 口直径 小于 等于4 cm、耐126 高温 的 菌 种瓶，也 可 以采用（12 17）cm（2228）cm（0.04 0.05）mm 的 聚丙 烯塑 料 袋。栽培种 采用 同原 种要 求相 同的瓶子，也可 采用（15 17）cm（33 35）cm（0.04 0.05）mm的聚丙 烯塑 料袋。以上聚 丙烯 塑料 袋均 要求 符合GB 4806.7 规定。装袋（瓶）采用装 袋（瓶）机 或人 工进 行装袋（瓶），人工 装袋（瓶）需 用打 孔器 在袋 口处 打
11、孔，孔直 径1 cm 1.5 cm、深度 为8 cm 12 cm，每 袋（瓶）装培 养基 质500 g 600 g，塑料 袋 用无棉 盖体 套环 或窝 口 海绵塞封 口，培养 基质 装袋（瓶）后4 h 内 进行 灭菌。灭菌 可采用 高压 灭菌 和常 压灭 菌。高压灭 菌：组 合培 养料 在121 122（0.11MPa 0.12 MPa）下灭 菌2 h；粮 食培养 基在121 122（0.11 MPa 0.12 MPa）下灭 菌2.5 h。常压灭 菌：在3 h 之 内使 温 度升至100，恒温 保持10 h 12 h。接种 DB15/T 2544 2022 4 原种、栽 培种在 超净 工作 台
12、或接 种箱 内接 种，接种 前打开 紫外 灯照 射30 min 后吹风，接种时 用75%酒精对 超净 工作 台或 接种 箱进行 表面 擦拭 消毒。每 个原种 接入2 cm 3 cm 大 小母种12 块；每 个栽 培 种接入原 种量 不应 少于15 g。菌种 都应 从容 器口 处接 种，不 应打 孔多 点接 种。每批接 种应 为单 一品 种，如中途 换品 种时 采用75%酒精对 超净 工作 台或 接种 箱及接 种工 具进 行表 面擦拭消 毒。培养 通风避 光、21 28 下培养。贮存 原种和 栽培 种在0 4 下贮 存，贮存 期不 超过50 d。7 检验、入库 检验 7.1.1 母种感 官要 求
13、 母种感 官要 求见 表1。表1 大球盖 菇母 种感 官要 求 项目 要求 容器 完整、无损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求 培养基灌入量 为试管总容积的1/4，培养皿高 的的1/31/2 菌种外观 菌丝生长量 长满斜面或平板 菌丝体特征 菌丝洁白、绒毛状、生长致密、均匀、健壮 菌丝体表面 均匀、舒展、平整 菌丝体分泌物 无 菌落边缘 整齐 杂菌菌落 无 斜面背面外观 培养基不干缩，无积水、颜色均匀、无暗斑、无色素 7.1.2 原种感 官要 求 原种感 官要 求见 表2。DB15/T 2544 2022 5 表2 大球盖 菇原 种感 官要 求 项目 要求 容器
14、 完整、无损、洁净 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（505）mm 菌种外观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 菌丝体白、生长旺健、整齐 培养物表面菌丝体 生长均匀、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无、允许少量无色至棕黄色水珠 杂菌菌落 无 子实体原基 无 7.1.3 栽培种 感官 要求 栽培种 感官 要求 见表3。表3 大球盖 菇栽 培种 感官 要求 项目 要求 容器 完整、无破损 棉塞或无棉盖体 干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求 培养基上表面距瓶（袋）口的距离（505）mm 菌 种 外 观 菌丝生长量 长满容器 菌丝体特征 生长均匀、色泽一致、无角变、无高温抑制线 培养基及菌丝体 紧贴瓶壁、无干缩 菌丝分泌物 无 杂菌菌落 无 子实体原基 允许少量、出现原基种类小于等于5%入库 菌种检 验完 成后 及时 入菌 种库，详细 记录 各生 产环 节，菌 种库 温度0 4，避 光，适当 通风，定期对 空间 进行 杀菌 处理。
