1、 ICS 65.020.20 CCS B 05 3502 厦门市标准化指导性技术文件 DB3502/T 083 2022 铁皮石斛 种苗繁育 技术规程 Technical specifications for seedling propagation of Dendrobium officinale 2022-06-13 发布 2022-06-13 实施 发 布 DB3502/T 083 2022 1 目录 前 言.2 1 范围.3 2 规范 性引 用文 件.3 3 术语 和定 义.3 4 种苗 繁育 工厂.4 5 种子 获得.5 6 实生 苗培 育技 术.5 7 种苗 质量 要求 及检 验方
2、 法.6 8 标签、包 装和 运输.7 9 档案 和检 疫检 验.7 附录 A（资料 性）铁皮 石 斛实生 苗培 养基 配方.8 DB3502/T 083 2022 2 前 言 本文件 按照GB/T 1.1 2020 标 准化工 作导 则第1 部 分：标 准化 文件 的结 构和 起草规 则 的规 定起草。请注意 本文 件的 某些 内容 可能涉 及专 利。本文 件的 发布机 构不 承担 识别 专利 的责任。本文件 由厦 门市 农业 农村 局提出 并归 口。本文件 起草 单位：厦门 塔 斯曼生 物工 程有 限公 司、厦门市 标准 化研 究院、厦 门市食 品药 品审 评认 证与不良 反应 监测 中心
3、本文件 主要 起草 人：卢绍 基、沈 群红、林 文亮、余 良、孙 金全、陈 剑成。本文件 为首 次发 布。DB3502/T 083 2022 3 铁皮石斛 种苗繁 育技术规 程 1 范围 本文件 规定 了铁 皮石 斛种 苗的术 语和 定义、种 苗繁 育工厂、种 子的 获得、种 苗培育 技术、优 质种 苗的质量 要求、检 验方 法、检验规 则、标签、包 装、运输、档案、检 疫检 验等 要求。本文件 适用 于铁 皮石 斛种 苗工厂 化生 产。2 规范性 引用 文件 下列文 件中 的内 容通 过文 中的规 范性 引用 而构 成本 文件必 不可 少的 条款。其 中，注日 期的 引用 文件，仅该日 期
4、对 应的 版本 适用 于本文 件；不注 日期 的引 用文件，其 最新 版本（包 括所有 的修 改单）适 用 于 本文件。GB 3095 环 境空 气质 量标 准 GB 5749 生 活饮 用水 卫生 标标准 GB 15569 农业 植物 调运 检 疫规程 GB/T 10111 随 机数 的产 生 及其在 产品 质量 抽样 检验 中的应 用程 序 中国 植物 志（第 19 卷）2004 年版 3 术语和 定义 下列术 语和 定义 适用 于本 文件。3.1 铁皮石 斛Dendrobium officinale 铁皮石 斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo），
5、又名黑 节草、铁 皮石 斛枫 斗（加 工干 品通 称），为兰科 石斛 属多 年生 草本 植物。3.2 实生 苗seedling 铁皮石 斛种 子经 过无 菌播 种，萌 发生 长得 到的 种苗。3.3 原球 茎protocorm 由铁皮 石斛 种子 诱导 产生，具出 叶长 根潜 能的 球状 器官。3.4 培养 基culture medium DB3502/T 083 2022 4 由大量 元素、微 量元 素、有机物、激 素等 配制 而成，能够 满足 铁皮 石斛 种子 能发和 幼苗 生长 的营 养基质。炼苗hardened seedling 采用自 然散 射光、人工 控 制温度、荫蔽 等措 施对
6、达 到出瓶 规格 的瓶 装苗 进行 适应性 锻炼，以增 加抵抗能力 的过 程。3.5 驯化 苗domesticated seedling 瓶苗出 瓶后 移栽 到温 室苗 床种植，过 渡生 长3 6个 月后存 活下 来的 苗。4 种苗繁 育工 厂 4.1 场地环 境 铁皮石 斛种苗 工厂 包括组 培车间、温室 和办 公区，周围100 m 内 不允许 有垃 圾 堆放或 其他污 染源，且四周 通风 良好，所 使用 的水源 应达 到GB 5749 或 以 上标准 要求。大 气环 境质 量应达 到GB 3095 中 二级 或以上标 准要 求。4.2 组培车 间 4.2.1 主要功 能室 4.2.1.1
7、配制室：作 为培 养基 配制 的场所，要 求卫 生保 持清 洁干净。4.2.1.2 灭菌室：作为 培养 基、接 种工具、无菌 材料 的高温 灭菌处 理场所，要 求干净 整洁，并建有 水池和台 板，以便 于操 作。4.2.1.3 储藏室：作为 培养 基储藏 场所，要求卫 生保 持清洁 干净，温度 20 23，湿度40%，具备防尘、防 潮和 避光。4.2.1.4 接种室：作为 培养 材料的 消毒和 接种、培养 物的继 代转移 的场所，要 求密闭、清洁、整齐，装有紫 外灯，能 随时 灭菌。4.2.1.5 培养室：作为 种子 实生培 养的场 所，要 求卫 生保持 清洁干 净，温 湿度 均匀一 致，内
8、置多层 培养架，能根 据瓶 苗生 长、培养目 的进 行培 养温 度和 光照强 度的 调控。4.2.1.6 实验室：作 为瓶 苗分 析检 测的场 所，要求 卫生 保持 清洁干 净。4.3 温室 作为瓶 苗适 应性 锻炼 的场 所，要 求卫 生保 持清 洁干 净，通 风透 气，能根 据瓶 苗生长 进行 光照、温 度及湿度 的调 控。4.4 需要配 备的 仪器 设备 及化 学试剂 4.4.1 仪器设 备：植物 组培 所需 的仪器 设备，如 高压 灭菌 锅、超 净工 作台、培 养架、灌装机、洗 瓶机、冰箱、电子 天平、电 子秤 等。4.4.2 化学试 剂：生 产瓶 苗所需 化学试 剂，如 无机 盐类和
9、 有机物 类、植 物激 素等；消毒试 剂，如 次 氯酸钠、酒精 等。DB3502/T 083 2022 5 5 种子获 得 5.1.1 种源选 用：用 于生 产种 子 的种源 应符 合 中 国植 物 志 第 19 卷 收载 的兰 科植 物铁皮 石斛 的植 物特征。经分 类鉴 定确 认，推荐选 用高 产、抗性 强并 适合本 地气 候的 品种 或品 系。5.1.2 亲本选 择：应选 择形 态特 征典型，长 势均 匀，生长 健壮 的 3 年 生以 上植 株。5.1.3 人工授 粉：在5 月份 盛花 期进行 人工 授粉，挂 牌标 签，标 明授 粉时 间、方法、编号。5.1.4 种子采 收：授 粉4 6
10、 个 月 以后，蒴果 开始 转黄 未开 裂时，选择 饱满 的蒴 果，带果柄 一起 采 收。5.1.5 种子保 存：采收 的 蒴 果用 吸水纸 包裹 后保 存 在 4 冰箱中，备 用。6 实生苗 培育 技术 6.1 培养容 器清 洗 生产所 用的 培养 容器，应 先进行 清洗 干净 后，放置 沥干。6.2 培养基 配制 和灭 菌 6.2.1 培养基 配制：以 MS 培养 基 为基础，适 配铁 皮石 斛培 养所需 营养 物质，添 加纯 水搅拌 充分 溶解，调整 pH 至 6.0 左右。6.2.2 培养基 装瓶：用 灌装 机分 装到培 养瓶，瓶 内培 养基 高度 为 1cm 左右。6.2.3 培养基
11、 灭菌：将 分装 密封 好的培 养瓶 放入 高压 灭菌 锅内，灭菌 压 力 0.24 MPa，时 间20 min。6.2.4 培养基 储藏：将 灭菌 好的 培养基 放置 储藏 室备 用。储藏时 间不 应超 过1 个月。6.3 无菌播 种 在接种 室超 净工 作台，将 采收已 后 熟 7 d 的蒴 果置 于无菌 的接 种皿 中；采 用 70%75%酒精 对蒴 果表面擦 拭 3 5s 或 10%次 氯酸钠 浸 泡 5 min 后，将蒴 果切开，用镊 子夹 住果 柄 端在培 养瓶 瓶口 边轻 轻抖动，边 转动 培养 瓶，使粉 末状种 子均 匀撒 播到 诱导 培养基 上（配方 推荐 附 录A 诱导 培
12、养 基），每 个蒴 果接种 5 8 瓶。6.4 瓶苗培 养 6.4.1 诱导培 养：将 接种 后的 培 养瓶放 置于 培养 室，温 度 为 24 28，光照 强度 为 16003500lx，每天光照 时 间 812h，培 养 形成原 球茎。6.4.2 分化培 养：在原 球茎 生长 膨 大至 3 5mm，转接 到分 化 培养基（配 方推 荐见 附录 A 分 化培 养基）进行出 芽长 叶，温度 为 23 25，光 照强 度 为 1600 2000lx，每 天光 照时 间 8 12h。6.4.3 分瓶培 养：瓶内 苗过 于密 集需进 行分 瓶（配方 推荐 见附 录 A 分化 培养 基），每瓶数 量
13、80 100株。培 养室 温 度 24 26，光 照强 度 2000lx 2600lx，每 天光 照时 间 10h 12h。6.4.4 生根培 养：分 化苗 长到 2.0 4.0cm 左右，转入 生根 培 养基（配 方推 荐见 附录 A 生根培 养基），每瓶数 量 20 40 株。培养 室条件，温 度为 25 27、光 照强 度为 2200lx 2800lx，每天 光照 时 间 10h 12h，待瓶 苗长 到 5 8 cm、根 2 5 条时，即 达到 出 瓶规格。6.5 瓶苗出 瓶和 移栽 6.5.1 炼苗：将 培养瓶 移至 温室，使 其在 开放变 化的 环境 中逐渐 适应 自然 环 境14d
14、 21d，待 瓶苗 叶 色浓绿时 即可 出瓶 种植。DB3502/T 083 2022 6 6.5.2 适温：出瓶 前先 将瓶 盖打 开，让 瓶苗 暴露 在空 气中 放置 2d 3d，使其 适应 自 然温湿 度。6.5.3 洗苗：将瓶苗 小心 取出，用清水 将根 部基 质洗 净，晾干至 根部 发白。栽培 前 要用 0.1%代森 锰锌或生根 粉溶 液（生根 粉按 说明书 配制）浸 泡根 部2min。6.5.4 移栽：将苗栽 到培 养基质 上，栽 培容器 应采 用透气 性、透 水性好 的容 器；栽 培基质 应采用 既 能吸水又 能排 水，既能 透气 又有养 分的 材料。环 境要 求荫蔽、相 对湿
15、度 70%80%，温 度 20 25。应避免在 高温 或严 寒条 件下 移栽。6.5.5 驯化：经 过36 个 月驯 化，苗生 长健 壮，可进 行第 二次移 栽。7 种苗质 量要 求及 检验 方法 7.1 通用要 求 用于栽 培的瓶 苗应 该为非 污染、无烂茎、烂 根、黄 叶；叶 片4片 以上，正常 展 开,叶色 嫩绿 或 翠绿；合格苗 应该 在总 苗量 的80%以上；驯化 苗的 合格 苗应 该在总 苗量 的100%。7.2 瓶苗分 级应 符合 表1 规定。表1 铁皮 石斛 瓶苗 分级 表 单 位：（株）分级/项目 根（条）叶片（片）株高（cm）茎粗（cm）合格苗 2 条3 条 4 2.5 0
16、2 优质苗 3 条5 条 6 5.0 0.3 7.3 驯化苗 分级 应符 合 表 2 规 定。表2 铁皮 石斛 驯化 苗分 级表 单位：（株）分级/项目 根（条）叶片（片）株高（cm）茎粗（cm）合格苗 4 条6 条 5 3.0 0.25 优质苗 6 6 6.0 0.35 7.4 检验方 法 7.4.1 根、叶 片：在自 然光 线下，采用 目测、计 数方 法进 行；种 苗无 烂根，叶 片无 畸形。7.4.2 株高、茎粗：长 度用 分度 值 1mm 的直 尺测 量，直径 用游标 卡尺 测量。7.5 检验规 则 7.5.1 交收检 验 每批瓶 苗交货 前，生产单 位都要 进行交 收检 验。交 收
17、检验 内容包 括苗 的质量、数量、标志 和包 装，检验合 格并 附合 格证 后方 可出货。DB3502/T 083 2022 7 7.5.2 组批规 则 同 一生 产单 位、同一 品种、同一 包装 日期 的种 苗作为 一个 检验 批次。7.5.3 抽样 执行GB/T 10111。7.5.4 判定规 则 若检验 结果符 合本 标准6.2 的指标 要求，则判 该批种 苗为合 格苗或 优质 苗。若 检验结 果不符 合要 求的，允 许对 不合 格项 目重 新取样 复测，复 测仍 有一 项不合 格的，则 判该 批产 品为不 合格。8 标签、包装 和运 输 8.1 标签 每批苗 应挂 有标 签，标 明 品
18、种、生 产单 位、苗龄、苗 类型、等 级、数量、出 苗日 期、批号、标 准号、检验证 书号 等。8.2 包装和 运输 8.2.1 瓶苗包 装：用 保鲜 膜将瓶 口包扎 防止在 运输 种受到 污染，用开孔 纸箱 进行装 载，放 置层数 不 宜过多，一 般34 层，层 与 层之间 用泡 沫或 是软 质材 料隔开 防止 运输 过程 中摩 擦瓶口 膜破 裂。8.2.2 出瓶苗 包装：瓶苗 在 经过 洗苗后，自然 晾干 表面水 分，单 层直立 放置 在塑料 筐或纸 箱中，包 装箱应该 结实 牢固 并设 有透 气孔，装箱 后贴 上标 签。8.2.3 驯化苗 包装：驯化 苗出 圃 前应做 好病 虫预 防控
19、制，并适当 控水，基质 含水 量30%50%，包 装采用透气 纸箱 或泡 沫箱，要 求轻拿 轻放，整 齐码 放在 箱内，不能 用力 挤压，防 止折断 茎秆 或折 伤新 叶。8.2.4 装运的 车厢 应配 有空 调，温度调 节 至 20 25，到目的 地后 应立 即进 行种 植或假 植。9 档案和 检疫 检验 9.1 档案 应 建立 档案 管理 记录，记录包 括种 子来 源、投入 物品、生产 记录、销 售记 录等，档案 保存 周期2年以上。9.2 检疫检 验 按GB 15569 规定 进行 检验，跨县级 行政 区域 调运 铁皮 石斛苗 应按 有关 规定 办理 出运手 续，并 应附 有植物检 疫证
20、 书。DB3502/T 083 2022 8 附录 A（资料 性）铁皮石 斛实 生培 养基 配方 A.1 铁皮 石斛 实生 苗培 养 基配方 类别 配方 诱导培 养基 MS+蔗糖 20gL-1+琼 脂粉 4.5gL-1+马铃 薯 20gL-1 MS+6-BA1.0mgL-1+活性炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1+琼脂 粉 6.5gL-1+马铃 薯 50gL-1+香蕉 25gL-1 MS+6-BA1.0mgL-1+NAA 0.1mgL-1+活性 炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1+琼脂粉 6.5gL-1+马铃 薯 50gL-1+香蕉 25gL-1 分化培 养基 MS+6-BA0.1mg
21、L-1+NAA 0.05mgL-1+蔗糖 25gL-1+琼 脂粉 4.2gL-1+马铃 薯 80gL-1 MS+6-BA0.1mgL-1、NAA 0.2mgL-1+活性 炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1+琼脂 粉 6.5gL-1+马铃薯 50gL-1+香蕉 25gL-1 MS+6-BA1.5mgL-1、NAA 0.1mgL-1+活性 炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1+琼脂 粉 6.5gL-1+马铃薯 50gL-1+香蕉 25gL-1 生根培 养基 MS+6-BA0.2mgL-1+NAA0.4mgL-1+活性 炭 1.0gL-1+蔗糖 20gL-1+琼脂粉 4.5gL-1+马铃 薯 40gL-1+香蕉 60gL-1 MS+NAA1.0mgL-1+活性炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1+琼脂 粉 6.5gL-1+马铃薯 50gL-1+香蕉 25gL-1 MS+NAA2.0mgL-1+活性炭 1.0gL-1+蔗糖 30gL-1+琼脂 粉 6.5gL-1+马铃薯 50gL-1+香蕉 25gL-1
