1、中华人民共和国农业行业标准NY /T 468-2001 动物组织中盐酸克伦特罗的测定气相色谱-质谱法2001- 09-03发布2001-10 -01实施中华人民共和国农业部发布187 NY IT 468-2001 前言本标准由中华人民共和国农业部提出.本标准起草单位z农业部畜禽产品质量监督检验测试中心、北京师范大学分析测试中心。本标准主要起草人g杨清峰、邓志威、甜孟峡、陈刚、薛毅、单吉浩 188 NY /T 468-2001 动物组织中盐伦特罗的测定气相色谱-质谱法1 范围本标准规定了以气相色谱-质谱(GC-MS)法测定动物组织中盐酸克伦特罗残留的方法.本标准适用于动物肝脏组织中盐酸克伦特罗的
2、测定.方法的最低栓出限为2g/kgo2 原理样品用盐酸葡萄糖醒试酶或芳基硫酸醋酶，在pH5.2的缓冲溶液中消化。萃取的组织样液通过离心和过滤分离。萃取液用C18和SCX小柱，固相萃取净化，分离的药物残留经过双三甲基硅基三氟乙戳胶(BSTFA)衍生后用带有质量选择检测器的气相色谱仪测定.3 试剂和材料3. 1 乙酸镀缓冲液(20mmol/L , pH 5.2)，溶解1.45 g乙酸镀于500-700mL水中，用乙酸调整pH值为5.2并稀释到1Lo 3.2 -盐酸葡萄糖111戒酶或芳基硫酸酣酶榕液30U/mL或相当者.3. 3 30 mmol/L盐酸z稀释30mL 1 mol/L盐酸到lL蒸馆水中
3、。3.4 甲醇s分析纯.3.5 氨化甲醇(amoniummethanoD , 4 %。用甲薄稀释4mL氨溶液密度。.88g/mL)至100mL. 3.6 双三甲基硅基三氟乙酷胶(BSTFA)。3.7 甲苯2分析纯。3. 8 C18小柱，supelcleanLC-18 Sep Pak小柱500mg.3 mL。3.9 scx小柱，supelclean，LC-SCXSep Pak小柱500mg , 3 mLo 3. 10 盐酸克仑特罗标准溶液3.10.1 储备液=精确称取适量的盐酸克仑特罗(含量不少于98.5%).用甲醇配成浓度约1mg/mL的标准储备液，储于冰箱中。有效期3个月。3.10.2 工作
4、液g将储备液用甲回事稀释为0.05-2.0g/mL.存放在冰箱中备用.4 仪栅及设备4. 1 离心瓶，50mL.具塞.4.2 Sep-Pak真空接头.4.3具聚四氟乙烯拧盖的试管.4.4 匀浆机。4.5 机械真空泵。4.6 旋涡混合器。4. 7 恒温箱5精度为土n:。4.8 GC-MS联用仪z装有弱极性或非极性毛细管柱的气相色谱仪和具电子轰击离子源及检测器.189 NY /T 468-2001 5 分析步骤5. 1 提取准确称取已绞碎的肝脏样品(10土1.0)g.于50mL具塞的离心管中。加入20mmol!L的乙酸镀缓冲溶液20mL.均质5mino加入50L-盐酸葡萄糖醒试酶溶液，摇匀、超声1
5、5min，于3TC酶解18ho 于3000r/min离心5min，过滤上清液，收集滤液。5.2 净化装好真空泵和接臂，将C18和SCX固相萃取柱按从上到下的顺序安装。依次用5mL甲醇、5mL水和5mL 30 mmol!L盐酸活化。取5mL滤液至C18柱中，依次用5mL水、5mL甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，保持抽气5mn使柱中的液体逐渐枯竭，取下C18柱，用5mL 4%氨化甲醇淋洗SCX柱并收集流出液于具塞玻璃试管中.5.3 测定5. 3. 1 衍生化用氯气吹干上述流出液，用100L甲苯溶解残渣，加入100LBSTFA.加盖并于旋涡混合器上震荡，在80C的烘箱中加热1h。蒸干多余的溶剂
6、，用。.50mL甲苯溶解，取适量的盐酸克仑特罗标准工作液，同时衍生化。用GC-MS联用仪选择离子监测方式检测.5.3.2 GC-MS测定参数设定色谱柱:HP-5MS5%苯基甲基聚硅氧烧.30mXO. 25 mm(内径).O. 25m(膜厚h进样口温度:220C , 进样方式=不分流9进样体积:1L，柱温程序:70C (保持O.6 min).以25C/min升温至200C(保持6mi时，以25C/min升温至280C (保持5min); 载气g氯气;流速:O. 9 mL/min (恒流。GC/MS传输线温度:280C , 溶剂延迟8min; 分析器温度:200C , 四极杆温度:106C。选择离
7、子监测:(M/Z)86.243.262.277o5.4 定性定量方法5.4.1 定性样品峰与标样的保留时间之差不多于2S.匹配度值应大于800.当匹配度值小于800时，应通过人工比较选择离子的丰度，以基峰百分数表示。5.4.2 定量方法选择离子监测(SIM)法计算峰面积，根据样品液中盐酸克仑特罗含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样品液中盐酸克仑特罗响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样品液等体积参插进样测定。6 分析结果的襄述每千克试样中盐酸克伦特罗的质量按式(1)计算zV一-m c一-A A一= X ( 1 ) 190 式中sX一一试样中克仑特罗残留含量，单位为毫克每于克(mg/kg)，A一一样液中经衍生化盐酸克仑特罗的峰面积，A，一一标准工作液中经衍生化盐酸克仑特罗的峰面军R，C，一一标准工作液中盐酸克仓特罗的浓度，单位为微克每毫升(.g/mL), V一一样液最终定容体积，单位为毫升(mL)，m 最终样液所代表的试样量，单位为克(g)0 NY/T 468 2001 191
