1、ICS65.140CCS B 47 6540 伊 犁 哈 萨 克 自 治 州 地 方 标 准 DB6540/T 0292023 新疆黑蜂鉴定方法 Identification method of black bee in Xinjiang 2023-12-26 发布 2024-01-26 实施 伊犁哈萨克自治州市场监督管理局 发 布 DB6540/T 0292023 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由伊犁哈萨克自治州农业科学研究所提出。本文件由伊犁哈萨克自治州农业农村局归口。本文件起草单位：伊犁哈萨克自治州农业科
2、学研究所、新疆大学。本文件主要起草人：古丽奴尔吐拉西、胡红英、师丰丰、巴黑提亚、何茜、阿地娜卡玛勒江。DB6540/T 0292023 1 新疆黑蜂鉴定方法 1 范围 本文件规定了新疆黑蜂形态特征测定、基因型测定、分析评估等新疆黑蜂的鉴定方法。本文件适用于伊犁哈萨克自治州区域内新疆黑蜂的鉴定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 40184 畜禽基因组选择育种技术规程 GB/T 31016 样品采集与处理移动实验室通用技
3、术规范 NY/T 1673 畜禽微卫星DNA遗传多样性检测技术规程 NY/T 2364 蜜蜂种质资源评价规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。新疆黑蜂 Xinjiang black bee 属于蜜蜂科、蜜蜂属、西方蜜蜂种（Apis mellifera L.），主要分布于新疆西北部伊犁、塔城、阿勒泰地区。该黑蜂体形大、吻长、色黑、繁殖力强、分蜂性弱、耐寒、抗病、善于利用大宗或零星蜜源。它是一个已为长期生产实践证明了的适应当地严酷气候和蜜源特点的优良黑蜂品系（生态型）。蜂群 bees colony 以群体为单位，由蜂王、工蜂、雄蜂组成的能独立生活的蜜蜂群体。亚种 subspecies亚
4、种是某个种的表型上相似种群的集群，栖息在该物种分布范围内的次级地理区，而且在分类学上和该种的其他种群不同。工蜂 worker bee工蜂是蜜蜂蜂群三个类型的一种。工蜂是蜜蜂中性别上未发育进化完全的雌蜂，二倍体雌性蜜蜂，个体较蜂王和雄蜂小。基因组 genome指生物体所有遗传物质的总和。这些遗传物质包括DNA或RNA（病毒RNA）。DB6540/T 0292023 2 全基因组重测序技术 whole genome sequencing对已知基因组序列的物种进行不同个体的基因组测序，并在此基础上对个体或群体进行差异性分析。单核苷酸多态性 single nucleotide polymorphism
5、 指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多样性。4 形态特征测定 蜜蜂标本选择 每一蜂群选择10只50只大小形态相对一致的工蜂，装入95的酒精中，带回实验室。样品记录信息见附录A.1。形态特征描述 工蜂的主要形态指标有体色（腹部背板几丁质颜色）、毛色（胸腹部绒毛颜色）、吻长、右前翅面积（用长宽表示）、肘脉指数、跗节指数（后足第一跗节的宽度与长度之比，用右后足测量）、蜡镜面积（第四腹节蜡镜大小，用长宽表示）、腹部第三节背板长度、绒毛指数、覆毛长度。形态鉴定 采用NY/T 2364蜜蜂种质资源评价规范工蜂形态特征指标内容，按蜂群随机挑选5只10只工蜂，每个蜂场测定数量不少于5群。形态
6、指标信息见附录A.2。5 基因型测定 样品准备 样品采集应避免个体间DNA交叉污染，每个个体的采样工具应更换或清洗，按照GB/T 31016 的规定执行。基因组 DNA 提取 提取的DNA应符合基因芯片或测序对样品质量和数量的要求。DNA提取方法按照NY/T 1673的规定执行。基因型测定方法 将通过形态鉴定的新疆黑蜂样品采用全基因组重测序技术中的SNP进行基因分型。按照GB/T 40184的规定执行。6 分析评估 数据处理 DB6540/T 0292023 3 将测序得到的原始数据，通过生信软件对序列进行过滤，仅保留低质量碱基数目占比不超过50的序列；通过生物信息学软件，与西方蜜蜂参考基因组
7、（Apis Mel4.5）及NCBI数据库中其他亚种数据进行比对，比对参数可使用软件默认参数。多态性位点检测分型 对比对后的数据排序并进行PCR重复标记，通过gatk4.1等软件检测变异序列。使用默认参数对SNP进行质量过滤，获得新疆黑蜂SNP。评估鉴定结果 通过基于基因组信息的最佳线性无偏估计模型、贝叶斯方法分析，依据获得的单系群评价新疆黑蜂鉴定结果。DB6540/T 0292023 4 附录A （资料性）记录和表格 A.1 样品信息 样品信息格式见表A.1。表A.1 样品信息表 序号 采样数据 每群数量 海拔 经度 纬度 地点 时间 采集人 基因组测序数据名称 A.2 形态指标测定 新疆黑蜂形态指标测定参照见表A.2。表A.2 新疆黑蜂形态指标测定参照 形态特征 指标 吻长mm 5.580.45 右前翅长 mm 10.050.21 右前翅宽 mm 3.380.12 肘脉指数 2.1690.16 腹部第三背板长 mm 2.350.15 绒毛指数 2.120.26 覆毛长度 mm 0.2782.14 跗节指数 0.5630.27 蜡镜面积 mm2 2.230.35 腹部背板几丁质颜色 黑色为主 胸腹部绒毛颜色 浅黄色
