1、 ICS 65.020.20 CCS B 05 15 内蒙古自治区地方标准 DB15/T 41822025 谷物类种子微生物包衣技术规程 Code of practice in microbial coating for wheat seeds 2025-09-15 发布2025-10-15 实施内蒙古自治区市场监督管理局发 布 DB15/T 41822025 I 前言 本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由内蒙古自治区农牧厅提出。本文件由内蒙古自治区畜牧业标准化技术委员会（SAM/TC 19）归口。本文件起草单位：内蒙古农业
2、大学、内蒙古农牧业科学院、鄂尔多斯市农牧业生态与资源保护中心（鄂尔多斯市耕地质量监测保护中心）、通辽市科尔沁区畜牧水产工作站。本文件主要起草人：李蘅、孟建宇、唐凯、冯福应、赵秀娟、刘扬、王雅兰、杨丽华、郭慧玲、张永平、王小兵、梁允刚、许芳芳、姚婷、于超峰、赵艳英、王伟妮、刘俊梅、张迪。DB15/T 41822025 1 谷物类种子微生物包衣技术规程 1 范围 本文件规定了包衣复合菌群菌株要求、制备方法、谷物类种子包衣处理、包衣种子发芽率检验及包衣种子的包装、运输和贮存等技术要求。本文件适用于包衣复合菌群构建和谷物类种子微生物包衣技术的使用规范。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范
3、性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 3543.4 农作物种子检验规程 第4部分：播种质量 发芽试验 GB/T 3543.9 农作物种子检验规程 第9部分：播种质量 生活力测定 GB 20287 农用微生物菌剂 GB/T 41728 微生物肥料质量安全评价通用准则 NY/T 883 农用微生物菌剂生产技术规程 NY/T 1109 微生物肥料生物安全通用技术准则 NY/T 1847 微生物肥料生产菌株质量评价通用技术要求 3 术语和定义 GB 20287界定的以及下列术语
4、和定义适用于本文件。种子包衣 seeds coating 利用杀菌剂、杀虫剂、激素、肥料或有益微生物等有效成分包裹在种子表面，使种子外形成具有抑制病虫害、促进发芽和生长等功能的包覆层，是现代农业保护种子或幼苗初始发育阶段的常见策略。植物根际促生菌 plant growth-promoting rhizobacteria，PGPR 能够通过竞争性定殖植物根系，通过不同模式作用对植物生理功能如生长、产量和抗病性产生积极影响的微生物。PGPR能够通过多种机制促进土壤肥力的恢复，增强植物对生物和非生物胁迫的耐受力，并能够减少农用化学品的投入。文中简称PGPR。谷物类种子微生物包衣 microbial
5、coating for cereal seeds DB15/T 41822025 2 液体或固体培养扩繁目标微生物（有效菌）后制成的活菌种衣剂。它具有促进种子发芽和出苗、提高幼苗迪克森质量指数（Dickson quality index,DQI），调控作物根际和根内生微生物群落和功能，直接或间接提高根际土壤酶活性、促进养分循环和降解有毒、有害物质等作用，改良根际微土壤环境，有效促进作物生长，提高作物产量和品质。载体 carrier 用于吸附目的微生物，并且适宜其存活，对人、动植物和环境安全的固体物料。4 包衣复合菌群 按功能将微生物菌种分为固氮、解磷、产植物激素、产ACC脱氨酶菌等PGPR，将
6、含一种、两种或多种功能的多株微生物混合构成复合菌群（也称合成菌群），这些菌株之间存在协同促进植物生长的效应。5 要求 菌种 包衣剂所用微生物菌种及其组合的安全性和功能性应符合GB/T 41728、NY/T 1847的要求，且其功能明确、遗传性能相对稳定；各功能菌株间不存在拮抗，具有协同增效效应。其功能和发酵性能可长期保持，存活能力强。采用生物工程菌，应具有允许大面积释放的生物安全性有关批文。菌种应通过农业农村部NY/T 1109的鉴定，并提供非病原性、非生态入侵性证明。包衣剂中复合菌的检测指标 制备谷物类种子微生物包衣剂中复合菌的技术指标见表1。表1 谷物类种子微生物包衣剂中复合菌的检测指标
7、项目 剂型 液体 粉剂 有效活菌数（108 CFU/g 或/mL）A 3.0 3.0 杂菌数（106 CFU/g 或/mL）1.0 1.0 杂菌率（%）10.0 20.0 水分（%）25.0 pH 5.08.0 5.58.5 保质期（月）3 6 A 为复合菌时，每一种有效菌的数量不少于 108 CFU/g 或 CFU/mL。6 制备方法 仪器和设备 DB15/T 41822025 3 生物显微镜、恒温培养箱、恒温干燥箱、超净工作台或洁净室、电子天平（或精密天平）、摇床、高压蒸汽灭菌锅、实验筛和发酵罐。试剂和培养基 去离子水、无菌水、生理盐水、蒸馏水。检测用培养基：按附录A的规定执行。菌株配比
8、不同菌株配比按相同活菌数等比例配置。菌种和包衣材料的保藏和管理 液体型采用20%甘油（v/v）终浓度，超低温（-80）下保存。粉剂密封干燥避光常温或4 下保存。菌株的扩大培养及杂菌率检测 6.5.1 扩大培养 原菌种应连续转接活化至生长旺盛后方可应用。种子扩培过程包括试管斜面菌种、摇瓶、种子罐发酵培养三个阶段。操作过程要保证菌种不被污染，生长旺盛。按照NY/T 883的规定执行。6.5.2 杂菌率检测 除样品有效菌外其他的菌均为杂菌。样品中杂菌率按公式（1）计算，数值以%表示：=11+100 (1)式中：m 样品杂菌率，%；n1 杂菌数，单位为亿每克（亿/g）或亿每毫升（亿/mL）；n 有效活
9、菌数，单位为亿每克（亿/g）或亿每毫升（亿/mL）。7 谷物类种子包衣处理 谷物类 谷物类包括小麦、燕麦、玉米和谷子等，主要以小麦为例，是禾本科一年生或多年生草本植物。包衣 用无菌0.05%K2SiO3溶液将菌液或菌粉制备成107 CFU/mL（g）108 CFU/mL（g）的菌剂，将菌剂、生物炭（颗粒大小200目，作为载体）和谷物种子混合、搅拌均匀，包衣剂、生物炭和种子体积重量比为1/0.2/20（L/kg/kg）。搅拌均匀后迅速晾干或烘干（温度不宜超过40）。包衣种子存储 装袋密封，于阴凉干燥通风环境中保存。8 包衣种子发芽率检验 DB15/T 41822025 4 应按照GB/T 354
10、3.4和GB/T 3543.9的规定进行发芽率检验。发芽试验时，包衣谷物类种子粒与粒之间应至少保持与包衣种子同样大小的两倍距离，调查时间应在GB/T 3543.4规定的基础上适当延长。9 包衣种子的包装、运输和贮存 包装 根据不同种子类型选择适当的包装材料、容器、形式和方法，以满足贮藏的基本要求。运输 运输过程中有遮盖物，防止雨淋、日晒及高温，避免包衣种子霉变。轻装轻卸，避免包装破损。严禁与有毒、有害的其它物品混装、混运。贮存 包衣种子应贮存在阴凉、干燥、通风的库房内，不应露天堆放，以防日晒雨淋，避免不良条件的影响。DB15/T 41822025 5 A A 附录A （规范性）常规培养及检测培
11、养基 A.1 营养琼脂 营养琼脂见表A.1。表A.1 营养琼脂 蛋白胨 10.0 g 牛肉膏 3.0 g 氯化钠（NaCl）5.0 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.27.5 用途：适用于一般细菌的培养和保藏。A.2 阿须贝氏（Ashby）培养基 阿须贝氏（Ashby）培养基见表A.2。表A.2 阿须贝氏（Ashby）培养基 甘露醇（C6H14O6）10.0 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）0.2 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.2 g 氯化钠（NaCl）0.2 g 碳酸钙（CaCO3）5.0 g 硫酸钙（CaSO42H2O）0.1 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1
12、000 mL pH 7.07.5 用途：适用于固氮菌的培养。A.3 无机磷固体培养基 无机磷固体培养基见表A.3。表A.3 无机磷固体培养基 葡萄糖 10.0 g 硫酸铵（(NH4)2SO4）0.5 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.3 g DB15/T 41822025 6 表A.3 无机磷固体培养基（续）氯化钠（NaCl）0.3 g 硫酸锰（MnSO4H2O）0.03 g 硫酸亚铁（FeSO47H2O）0.03 g 氯化钾（KCl）0.3 g 磷酸钙（Ca3(PO4)2）5.0 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.07.5 用途：适用于解磷菌的培养。A.4 高氏一号
13、培养基 高氏一号培养基见表A.4。表A.4 高氏一号培养基 硝酸钾（KNO3）1.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）0.5 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.5 g 氯化钠（NaCl）0.5 g 硫酸亚铁（FeSO47H2O）0.01 g 可溶性淀粉(C6H10O5)n 20.0 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.27.4 制法：先将淀粉用少量冷水调成糊状，加热溶解后再与其他成分混合。用途：适用于放线菌的培养。A.5 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）见表A.5。表A.5 马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）马铃薯 200.0 g 葡
14、萄糖（C6H12O6H2O）20.0 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL 制法：称取去皮马铃薯200 g，切块煮沸30 min，然后用双层纱布过滤取汁，再加葡萄糖和琼脂，溶化后补足水至1000 mL，121 灭菌30 min。用途：适用于酵母菌和霉菌的培养。DB15/T 41822025 7 A.6 1/2R2A 培养基 1/2R2A培养基见表A.6。表A.6 1/2R2A 培养基 淀粉 0.5 g 葡萄糖（C6H12O6H2O）0.5 g 酸水解酪蛋白胨 0.5 g 酵母提取物 0.5 g 细菌学蛋白胨 0.5 g 丙酮酸钠（C3H3NaO3）0.3 g 磷酸氢二钾（K2HPO4
15、0.05 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.025 g TES 1.0 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.07.5 用途：适用于一般细菌的培养。A.7 根瘤菌培养基 根瘤菌培养基见表A.7。表A.7 根瘤菌培养基 磷酸氢二钾（K2HPO43H2O）0.5 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.2 g 氯化钠（NaCl）0.1 g 甘露醇（C6H14O6）10.0 g 酵母膏 1.0 g 0.5%刚果红 5.0 mL 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 6.87.0 用途：适用于根瘤菌的培养。A.8 马丁培养基 马丁培养基见表A.8。DB15/T 4182
16、2025 8 表A.8 马丁培养基 葡萄糖（C6H12O6H2O）10.0 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）1.0 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.5 g 蛋白胨 5.0 g 1%孟加拉红水溶液 3.3 mL 氯霉素 0.1 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL 制法：将营养成分用蒸馏水溶解后，按量加入1%孟加拉红水溶液，氯霉素先用少量乙醇溶解后加到培养基中。再加琼脂，加热溶化后分装灭菌。用途：适用于真菌的培养。A.9 联合固氮菌培养基 联合固氮菌培养基见表A.9。表A.9 联合固氮菌培养基 D-葡萄糖酸钠(C6H11Na O7)5.0 g 磷酸二氢钾（KH2PO4）0.4 g 磷
17、酸氢二钾（K2HPO43H2O）0.1 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.2 g 酵母膏 1.0 g 氯化钠（NaCl）0.1 g 氯化钙（CaCl2）0.02 g 三氯化铁（FeCl36H2O）0.01 g 钼酸钠（Na2MoO42H2O）0.002 g 琼脂 18.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 6.87.0 用途：适用于固氮螺菌的培养。A.10 发酵罐培养基 发酵罐培养基见表A.10。表A.10 发酵罐培养基 淀粉 0.5 g 葡萄糖（C6H12O6H2O）0.5 g 酵母提取物 0.5 g 蛋白胨 0.5 g DB15/T 41822025 9 表A.10 发酵罐培养基（续）硫酸铵（(NH4)2SO4）0.5 g 磷酸氢二钾（K2HPO4）0.3 g 硫酸镁（MgSO47H2O）0.05 g TES 1.0 g 蒸馏水 1000 mL pH 7.07.5
