1、ICS65.020.20CCS B 0521辽宁省地方标准DB21/T 43962026花生种质抗旱性鉴定技术规程Technical specification for drought resistance identification of peanutgermplasm2026-01-07 发布2026-02-07 实施辽宁省市场监督管理局发 布DB21/T 43962026I前言本文件按照GB/T 1.12020标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由辽宁省农业农村厅提出并归口。本文件
2、起草单位：沈阳农业大学、辽宁省农业农村发展服务中心。本文件主要起草人：于海秋、张鹤、王婧、赵新华、郭晓雷、刘喜波、唐亮、赵姝丽、邹畅、张红、吴蔚、任婧瑶。本文件发布实施后，任何单位和个人如有问题和意见建议，均可以通过来电和来函等方式进行反馈，我们将及时答复并认真处理，根据实际情况依法进行评估及复审。归口管理部门通讯地址：辽宁省农业农村厅（沈阳市和平区太原北街2号），联系电话：024-23447862。文件起草单位通讯地址：沈阳农业大学（沈阳市沈河区东陵路120号），联系电话：024-88487135。DB21/T 439620261花生种质抗旱性鉴定技术规程1范围本文件规定了花生种质抗旱性鉴定
3、原理、方法和综合评价。本文件适用于花生种质苗期抗旱性评价及抗旱品种鉴定。2规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 3543.4农作物种子检验规程 第4部分 播种质量发芽试验GB 4407.2经济作物种子 第2部分：油料类3术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义。4鉴定原理通过利用高浓度聚乙二醇-6000溶液模拟自然干旱环境，对植株根系施加渗透胁迫后，测定相对植株鲜重、叶片相对含水量、比叶重、离体叶片失水速率、伤害度、游离脯氨酸
4、含量和萎蔫指数等一系列能够表征花生种质抗旱能力的关键生化指标，并运用隶属函数法对其抗旱性进行综合评价。5鉴定方法5.1样品准备选取成熟饱满、大小一致的种子样品600粒，充分混合均匀，用1%的次氯酸钠溶液浸泡消毒10 min，自来水冲洗3次，蒸馏水冲洗3次。种子质量应符合GB 4407.2的规定。5.2幼苗培养将待测种子样品在25 条件下浸种12 h，均匀摆放至铺有双层湿润滤纸的培养皿中，置于人工气候箱内，按照GB/T 3543.4规定进行纸间（BP）发芽。在种子发芽3 d后，选取塑料盆钵40盆，装等量蛭石，每盆均匀播种5粒，种子芽朝下，播种深度3 cm，置于人工气候室内培养，培养条件为：温度2
5、8/23（昼/夜）、光周期16 h/8 h（昼/夜）、光照强度400 molm-2s-1600 molm-2s-1、相对湿度60%70%。5.3根系处理盆栽样品幼苗生长至4叶期，分成对照组和干旱处理组，每组20盆，每盆保留3株。将所有幼苗从塑料盆钵中完整取出，用蒸馏水冲洗根部，吸干表面水分。对照组幼苗的根系完全浸泡在蒸馏水中，干旱DB21/T 439620262处理组幼苗的根系完全浸泡在20%聚乙二醇-6000溶液中，两组培养条件均同本文件5.2的规定。设3次重复。5.4指标测定5.4.1相对植株鲜重干旱处理24 h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，蒸馏水冲洗根部，吸水纸吸干表面
6、水分，称量植株鲜重,按照公式（1）计算相对植株鲜重。RFW=FWtFWCK 100%(1)式中：RFW相对植株鲜重（%）；FWt干旱处理组植株鲜重（g）；FWCK对照组植株鲜重（g）。5.4.2叶片相对含水量干旱处理24 h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒数第3片复叶，称量叶片鲜重；然后，将叶片完全浸泡在蒸馏水中至恒重，称量叶片饱水重；最后，将叶片放入烘箱80 烘干至恒重，称量叶片干重。按照公式（2）计算叶片相对含水量。RWC=FW1DWFW0DW 100%(2)式中：RWC叶片相对含水量（%）；FW0叶片饱水重（g）；FW1叶片鲜重（g）；DW叶片干重（g）。5.4.3
7、比叶重采用打孔称重法测定。干旱处理24 h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒数第3片复叶，用直径为0.5 cm的打孔器，避开主叶脉，打20个小圆片，称量鲜重。按照公式（3）计算叶片比叶重。SLW=FW/0.522 20(3)式中：SLW比叶重（gcm-2）；FW叶片鲜重（g）。5.4.4离体叶片失水速率干旱处理24 h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取第3片复叶，称量叶片鲜重；然后,于室内避光自然风干,2 h后称量叶片风干重；最后，于烘箱中80 烘干至恒重，称量叶片干重。按照公式（4）计算离体叶片失水速率。RWL=（FW1 FW2）/DW(4)DB21/T
8、 439620263式中：RWL离体叶片失水速率（mgg-1min-1）；FW1叶片鲜重（g）；FW2叶片风干重（g）；DW叶片干重（g）。5.4.5伤害度干旱处理24 h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒数第3片复叶，用直径为0.5 cm的打孔器，避开主叶脉，打20个小圆片，于5 mL蒸馏水中浸泡5 h后，用电导仪测定初始电导值；然后沸水浴15 min，冷却至室温后，测定终电导值。按照公式（5）计算相对电导率，按照公式（6）计算伤害度。L=K1K2 100%(5)式中：L相对电导率（%）；K1初始电导值；K2终电导值。I=LtLck1Lck 100%(6)式中：I伤害度（
9、Lt干旱处理组的相对电导率（%）；Lck对照组的相对电导率（%）。5.4.6游离脯氨酸含量5.4.6.1制定回归方程用分析天平精确称取脯氨酸25.0 mg，倒入小烧杯中，少量蒸馏水溶解，然后倒入250 mL容量瓶，加蒸馏水定容至刻度，作为标准溶液（脯氨酸含量为100 g/mL）；取50 mL容量瓶6个，分别装入脯氨酸标准溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、2.5 mL和3.0 mL，用蒸馏水定容至刻度并摇匀，脯氨酸浓度分别为1 g/mL、2 g/mL、3 g/mL、4 g/mL、5 g/mL和6 g/mL。取具塞试管6支，分别吸取各浓度的脯氨酸标准溶液2 mL，再
10、加入冰醋酸2 mL和酸性茚三酮溶液2 mL，每管在沸水浴中加热30 min。室温冷却后，各试管加入甲苯4 mL，震荡30 s，静置片刻，至色素全部转移到甲苯层，用移液器将各管上层脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液为空白对照，于520 nm波长处比色。根据吸光值和脯氨酸浓度制定回归方程。5.4.6.2测定方法干旱处理24 h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，剪取倒数第3片复叶，称取0.5 g并剪碎，置于试管中。然后向试管中加入3%的磺基水杨酸溶液5 mL，加塞在沸水浴中提取10 min（提取过程中要经常摇动）。室温冷却后，吸取2 mL提取液至另一具塞试管中，加入冰醋酸2 mL和
11、酸性茚三酮溶液2 mL，在沸水浴中加热30 min。再次室温冷却后，加入甲苯4 mL，震荡30 s，静置片刻，萃取红色甲苯层。用移液器将上层脯氨酸甲苯溶液吸至比色皿中，以甲苯溶液为空白对照，测定520 nm波长的吸DB21/T 439620264光值。根据回归方程计算测定液中脯氨酸的含量（g/mL），根据公式（7）计算样品中游离脯氨酸含量的百分数。PC%=2.5YFW106 100%(7)式中：PC样品中游离脯氨酸含量的百分数（%）；Y测定液中脯氨酸的含量（g/mL）；FW叶片鲜重（g）。5.4.7萎蔫指数干旱处理24 h后，选取对照组和干旱处理组长势一致的幼苗各5株，采用目测法，对照萎蔫指数
12、等级划分标准评定等级，若萎蔫程度介于两级之间，则为半级。萎蔫指数等级划分标准见表1。表 1萎蔫指数等级划分标准等级划分标准0花生叶片自然伸展，叶色鲜亮且有光泽，茎秆坚挺1叶片开始出现失水反应，叶色无光泽，顶一叶、二叶略微下垂2植株继续失水，叶片皱缩下垂幅度增大3部分叶片干硬、卷曲4所有叶片均下垂、皱缩，叶片变黄5叶片完全失水干硬，植株死亡6抗旱性综合评价6.1计算平均隶属函数值根据测定的相对植株鲜重、叶片相对含水量、比叶重、离体叶片失水速率、伤害度、游离脯氨酸含量和萎蔫指数，利用隶属函数法进行综合性分析。按照公式（8）、公式（9）和公式（10）计算平均隶属函数值。=()/()（与抗旱性呈正相关
13、的性状）(8)=1 ()/()（与抗旱性呈负相关的性状）(9)式中：ij第i个品种第j个指标的隶属函数值；Xij第i个品种第j个指标的测定值；Xjmin第j个指标的最小值；Xjmax第j个指标的最大值。=1（j=1,2,n）(10)式中：第i个品种的平均隶属函数值，用以评价该品种的抗旱性。DB21/T 4396202656.2评定等级根据平均隶属函数值，对照花生种质抗旱性分级标准评定等级和类型。花生种质抗旱性分级标准见表2。表 2花生种质抗旱性分级标准平均隶属函数分级类型0.701.00高抗（HR）0.600.69抗（R）0.500.59中抗（MR）0.300.49低抗（LR）0.000.29敏感（S）
