1、道画中华人民共和国国家标准GB 4479.1-2010 食品安全国家标准食品添加剂克莱红2010-12-21发布2011-02-21实施中华人民共和国卫生部发布量t饲:fP伪/.O.L. _ 目。吕本标准代替GB4479.1-1999(食品添加剂克莱红。本标准与GB4479. 1-1999相比，主要变化如下:一一增加了安全提示;一一取消了注60.0%的质量规格;一一水不溶物指标由o.30%修改为运0.20%; 一一修改了鉴别试验的方法;一一分光光度比色法平行测定的允许差由2.0%修改为1.0%;一一增加了未反应中间体指标和检测方法;增加了未磺化芳族伯肢(以苯股计)指标和检测方法;呻CAs)的检
2、测方法由化学限量法修改为原子吸收法;取消了重金属(以Pb计)的质量规格;增加了铅CPb)指标和检测方法。本标准的附录A、附录B和附录C为规范性附录，附录D为资料性附录。本标准所代替标准的历次版本发布情况为z一-GB4479.1-1986、GB4479.1-1996、GB4479. 1-1999。GB 4479.1-2010 I 1 范围食品安全国家标准食品添加剂宽菜红GB 4479.1-2010 本标准适用于1-荼胶-4-磺酸铀经重氮化后与2-荼酣-3，6-二磺酸铀偶合而制得的食品添加剂克莱红。2 规范性引用文件本标准中引用的文件对于本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的
3、版本适用于本标准。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本标准。3 化学名称、结构式、分子式和相对分子质量3. 1 化学名称3-短基-4-(4-偶氮荼磺酸泪，7-荼二磺酸三铀盐3.2 结构式3.3 分子式C20 Hl1 N2 Na3 010 S3 3.4 相对分子质量Na03S-I( -N=N 飞J/604.48(按2007年国际相对原子质量)4 技术要求4. 1 感官要求:应符合表1的规定。Hq .S03Na S03Na 表1感官要求项目色泽组织状态要求红褐色至暗红褐色粉末或颗粒检验方法自然光线下采用目视评定1 GB 4479.1-2010 4.2 理化指标:应符合表2
4、的规定。表2理化指标项目指标检验方法克莱红，w/%飞 85.0 附录A中A.4干燥减量、氯化物(以NaCl计)及硫酸盐(以Na，SO，计总茧，w/%240mmX300 mmo . 7. 3. 4 微量进样器:100L。. 7. 3. 5 纳氏比色管:50mL有玻璃磨口塞。.7.3.6 玻璃砂芯漏斗:G3，孔径为15m40m。. 7. 3. 7 50 mm比色皿。.7.3.8 10mm比色皿。.7.4 分析步骤. 7. 4.1 纸上层析条件. 7. 4. 1. 1 展开剂z正丁醇+元水乙醇十氨水溶液=6+2+3。. 7. 4.1.2 温度:20oC25 oC。.7.4.2 试样溶液的配制GB 4
5、479.1-2010 称取1g试样(精确至0.001g) ，置于烧杯中，加入适量水溶解后，移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀备用，该试样溶液浓度为1%。. 7. 4. 3 试样洗出液的制备用微量进样器吸取100L试样溶液，均匀地注在离滤纸底边25mm的一条基线上，成一直线，使其在滤纸上的宽度不超过5mm，长度为130mm，用吹风机吹干。将滤纸放入装有预先配制好展开剂的层析缸中展开，滤纸底边浸入展开剂液面下10mm，待展开剂前沿线上升至150mm或直到副染料分离满意为止。取出层析滤纸，用冷风吹干。用空白滤纸在相同条件下展开，该空白滤纸应与上述步骤展开用的滤纸在同一张滤纸上相邻部位裁取。副染
6、料纸上层析示意图见图A.20150 mrn 2 50 mrn 副染料(1)副染料(2)副染料(3)主染料i 副染料(4)、25 mrn 基线图.2副染料纸上层析示意图9 GB 4479.1-2010 将展开后取得的各个副染料和在空白滤纸上与各副染料相对应的部位的滤纸按同样大小剪下，并剪成约5mmX15 mm的细条，分别置于50mL的纳氏比色管中，准确加入5mL丙酣榕液，摇动3min 5 min后，再准确加入20mL碳酸氢铀榕液，充分摇动，然后分别在G3玻璃砂芯漏斗中自然过墟，滤液应澄清，元悬浮物。分别得到各副染料和空白的洗出液。在各自副染料的最大吸收波长处，用50mm 比色皿，将各副染料的洗出
7、液在分光光度计上测定各自的吸光度值。在分光光度计上测定吸光度时，以5mL丙酣溶液和20mL碳酸氢铀溶液的混合液作参比液。A. 7.4.4 标准溶霞的配制吸取6mL 1%的试样溶液移入100mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀，该溶液为标准溶液。A. 7. 4. 5 标准洗出液的制备用微量进样器吸取标准潜液100L，均匀地点注在离滤纸底边25mm的一条基线上，用吹风机吹干。将滤纸放入装有预先配制好展开剂的层析缸中展开，待展开剂前沿线上升40mm，取出用冷风吹干，剪下所有展开的染料部分，按A.7. 4. 3的方法进行萃取操作，得到标准洗出液。用10mm比色皿在最大吸收波长处测吸光度值。同时用空白滤纸在相
8、同条件下展开，按相同方法操作后测洗出液的吸光度值。A.7.4.6 结果计算副染料的含量以质量分数W7计，数值用%表示，按公式(A.8)计算z(A1 -b,) + + (An - bn) J/5 W=-. -. _，_， -，.-， XS ( A.8 ) (A, - b,) (100/6) 式中:A1.A 各副染料洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值;b1bn一一各副染料对照空白洗出液以50mm光径长度测定出的吸光度值;人一一标准洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值;b, 标准对照空白洗出液以10mm光径长度测定出的吸光度值;5 一一-折算成以10mm光径长度的比数;100/6 一一标准
9、洗出液折算成1%试样溶液的比数zS 一一试样的质量分数，%。计算结果表示到小数点后1位。平行测定结果的绝对差值不大于0.2%(质量分数)，取其算术平均值作为测定结果。A.8 未反应中间体总和的测定A. 8.1 方法提要采用反相液相色谱法，用外标法分别定量各未反应中间体，最后计算未反应中间体总和的质量分数。A. 8. 2 试剂和材料A. 8. 2.1 甲障。A. 8. 2. 2 乙酸镀溶液:2g/L。A. 8. 2. 3 1-荼胶-4-磺酸铀。A. 8. 2. 4 7-是基-1，3-荼二磺酸铀。10 GB 4479.1-2010 A. 8. 2. 5 3-短基-2，7-荼二磺酸纳。A. 8. 2
10、. 6 6-起基-2-荼磺酸铀。A. 8. 2. 7 7-起基-1，3，6-荼三磺酸锅。A.8.3 仪器和设备A. 8. 3.1 液相色谱仪z输液泵一流量范围O.1 mL/min5. 0 mL/min，在此范围内其流量稳定性为士1%;检测器-多波长紫外分光检测器或具有同等性能的紫外分光检测器。A. 8. 3. 2 色谱柱:长为150mm，内径为4.6mm的不锈钢柱，固定相为C1B、粒径5moA. 8. 3. 3 色谱工作站或积分仪。A. 8. 3. 4 超声波发生器。A. 8. 3. 5 定量环:20L。A. 8. 4 色谱分析条件A. 8. 4.1 检测波长:238nmo A. 8. 4.
11、2 柱温:30.C。A. 8. 4. 3 流动相:A，乙酸镜溶液品，甲醇;浓度梯度:A(lOO)比B(O)保持5min，再50min线性浓度梯度从A(lOO)比B(O)至A(70)比B(30)。A. 8. 4. 4 流量:1.0mL/mina A. 8. 4. 5 进样量:20L。可根据仪器不同，选择最佳分析条件，流动相应摇匀后用超声波发生器进行脱气。A.8.5 试样溶班的配制称取约0.1g克莱红试样(精确至0.0001 g)，加乙酸镀溶液溶解并定容至100mLa A.8.6 标准溶液的配制分别称取约0.01g(精确至0.0001 g)已于真空干燥器中干燥24h后的1-荼胶-4-磺酸铀、7-是
12、基-1，3-荼二磺酸锅、3-起基-2，7-荼二磺酸铀、6-是基-2-荼磺酸铀、7-瓷基-1，3，6-荼三磺酸铀。用乙酸镀溶液分别溶解并定容至100mL。然后分别吸取10.0mL、5.0mL、2.0mL、1.0 mL上述各标准溶液，用乙酸镀溶液定容至100mL。配制成系列标准溶液。A.8.7 分桥步骤在本标准A.8.4规定的色谱分析条件下，分别用微量注射器吸取试样溶液及系列标准溶液注入并充满定量环进行色谱检测，待最后一个组分流出完毕，进行结果处理。测定各标准溶液物质的峰面积，分别绘制成各标准曲线。测定试样溶液中的1-荼胶-4-磺酸铀、7-起基-1，3-秦二磺酸铀、3-起基-2，7-荼二磺酸锅、6
13、-捏基-2-荼磺酸销、7-起基-1，3，6-荼三磺酸铀的峰面积，根据各标准曲线求出各自未反应中间体的质量分数。色谱图见附录DaA. 8. 8 结果计算未反应中间体的总和以质量分数13计，数值用%表示，按公式(A.的计算:W13 =WB十W9十W10+ Wll + W12 ( A.9 ) 式中z叫一-1-荼胶-4-磺酸铀的质量分数，%;11 GB 4479.1-2010 Wg -7-起基-1，3-荼二磺酸铀的质量分数，%;叫。一一3-起基-2，7-荼二磺酸铀的质量分数，%;Wn一一6-握基-2-荼磺酸铀的质量分数，%;W12一一一7-瓷基-1，3，6-荼三磺酸铀的质量分数，%。A.9 未磺化芳族
14、伯肢(以苯肢计)的测定A. 9.1 方法提要以乙酸乙醋萃取出试样中未磺化芳族伯肢成分，将萃取液和苯胶标准溶液分别经重氮化和偶合后再测定各自生成染料的吸光度予以比较与判别。A.9.2 试剂和材料A. 9. 2.1 乙酸乙醋。A. 9.2. 2 盐酸洛液:1+100A. 9.2. 3 盐酸溶液:1十30A. 9. 2. 4 澳化饵溶液:500g/Lo A. 9. 2. 5 碳酸铀榕液:200g/Lo A. 9. 2. 6 氢氧化铀溶液:40g/L。A.9.2.7 氢氧化铀溶液:4g/Lo A. 9. 2. 8 R盐溶液:20g/L。A. 9. 2. 9 亚硝酸铀溶液:3.52g/L。A.9.2.1
15、0 苯胶标准溶液:0.1000g/L。配制z用小烧杯称取0.5000 g新蒸懵的苯股，移至500mL容量瓶中，以150mL盐酸溶液(1+3)分三次洗涤烧杯，并人500mL容量瓶中，水稀释至刻度。移取25mL该溶液至250mL容量瓶中，水定容。此溶液苯股浓度为0.1000 g/L。A.9.3 仪器和设备A. 9. 3.1 可见分光光度计。A.9.3.2 比色皿:40mm。A.9.4 试样萃取溶班的配制称取约2.0g试样(精确至0.001g)于150mL烧杯中，加100mL水和5mL氢氧化铀溶液(40g/L), 在温水浴中搅拌至完全溶解。将此溶液移入分液漏斗中，少量水洗净烧杯。每次以50mL乙酸乙
16、醋萃取两次，合并萃取液。以10mL氢氧化铀潜液(4g/L)洗涤乙酸乙醋萃取液，除去痕量色素。再每次以10 mL盐酸溶液(1+3)对乙酸乙醋溶液反萃取三次。合并该盐酸萃取液，然后用水稀释至100mL，摇匀。此溶液为试样萃取溶液。A.9.5 标准对照溶班的制备吸取2.0mL苯胶标准溶液至100mL容量瓶中，用盐酸溶液(1十10)稀释至刻度，混合均匀，此为标准对照溶液。A.9.6 重氯化偶合溶液的制备吸取10mL试样萃取溶液，移入透明洁净的试管中，浸入盛有冰水混合物的烧杯内冷却10mino 12 GB 4479.1-2010 在试管中加入1mL漠化饵溶液及0.5mL亚硝酸铀溶液，稍用力摇匀后仍置于冰
17、水浴中冷却10min, 进行重氮化反应。另取一个25mL容量瓶移入1mL R盐溶液和10mL碳酸铀溶液。将上述试管中的苯胶重氮盐溶液加至盛有R盐溶液的容量瓶中，边加边略振摇容量瓶，用少许水洗净试管一并加入容量瓶中，再以水定容。充分混匀后在暗处放置15min。该溶液为试样重氮化偶合溶液。标准重氮化偶合溶液的制备，吸取10mL标准对照溶液，其余步骤同上。A.9.7 参比溶班的制备吸取10mL盐酸溶液(1+10)、10mL碳酸铀溶液及1mLR盐溶液于25mL容量瓶中，水定容。该溶液为参比溶液。A.9.8 分析步骤二将标准重氮化偶合溶液和试样重氮化偶合痞液分别置于比色皿中，在510nm波长处用分光光度
18、计测定各自的吸光度A、Ab以A.9. 7作参比溶液。A.9.9 结果判定AbA.即为合格。A.10 呻的测定A. 10. 1 方法提要克莱红经温法?肖解后，制备成试样溶液，用原子吸收光谱法测定呻的含量。A. 10.2 试剂和材料A. 10.2.1 硝酸。A. 10.2.2 硫酸溶液:1+10A. 10.2.3 硝酸-高氯酸混合溶被:3+1。A. 10.2.4 呻CAs)标准榕液=按GB/T602配制和标定后，再根据使用的仪器要求进行稀释配制成含碑相应浓度的三种标准溶被。A.10.2.5 氢氧化铀溶液:1g/L。A. 10.2.6 棚氢化铀溶液:8g/LC溶剂为1g/L的氢氧化铀溶液)0 A.1
19、0.2.7 盐酸溶液:1+10。A.10.2.8 腆化饵溶液:200g/Lo A. 10.3 仪器和设备A. 10.3.1 原子吸收光谱仪。A.10.3.2 仪器参考条件:呻空心阴极灯分析线波长:193.7nm;狭缝:0.5 nm1. 0 nm;灯电流:6mA 10 mAo A. 10.3.3 载气流速:氧气250mL/min。A. 10.3.4 原子化器温度:900 oC。A. 10.4 分析步骤A. 10.4. 1 试样消解称取约1g试样(精确至0.001g)，置于250mL三角或圆底烧瓶中，加10mL15 mL硝酸和GB 4479.1-2010 2 mL硫酸溶液，摇匀后用小火加热赶出二氧
20、化氮气体，溶液变成棕色，停止加热，放冷后加入5mL硝酸-高氨酸混合液，强火加热至溶液透明或微黄色，如仍不透明，放冷后再补加5mL硝酸-高氯酸混合溶液，继续加热至溶液透明无色或微黄色并产生白烟(避免烧干出现炭化现象)，停止加热，放冷后加水5 mL加热至沸，除去残余的硝酸-高氨酸(必要时可再加水煮沸一次)，继续加热至发生白烟，保持10 min，放冷后移入100mL容量瓶(若溶液出现浑浊、沉淀或机械杂质应过滤)，用盐酸溶液稀释定容。同时按相同的方法制备空白溶液。A. 10.4.2 测定量取25mL消解后的试样溶液至50mL容量瓶，加入5mL腆化饵溶液，用盐酸禧液稀释定容，摇匀，静置15mino 同时
21、按相同的方法以空白溶液制备空白测试液。开启仪器，待仪器及呻空心阴极灯充分预热，基线稳定后，用棚氢化铀溶液作氢化物还原发生剂，以标准空白、标准溶液、样品空白测试液及样品溶液的顺序，按电脑指令分别进样。测试结束后电脑自动生成工作曲线及扣除样品空白后的样品溶液中呻浓度，输入样品信息(如:名称、称样量、稀释体积等), 即自动换算出试样中碑的含量。平行测定结果的绝对差值不大于0.1mg/烛，取其算术平均值作为测定结果。A.11 铅的测定A. 11. 1 方法提要克莱红经湿法消解后，制备成试样溶液，用原子吸收光谱法测定铅的含量。A. 11. 2 试剂和材料A. 11. 2. 1 铅CPb)标准溶液:按GB
22、/T602配制和标定后，再根据使用的仪器要求进行稀释配制成含铅相应浓度的三种标准溶液。A. 11. 2. 2 氢氧化铀溶液:1g/L。A. 11. 2. 3 棚氢化铀榕液:8g/LC溶剂为1g/L的氢氧化铀溶液)。A. 11. 2. 4 盐酸溶液:1+10。A. 11. 3 仪器和设备A. 11. 3. 1 原子吸收光谱仪。A. 11. 3. 2 仪器参考条件:GB5009. 12-2010中第三法火焰原子吸收光谱法。A. 11.4 分析步骤可直接采用A.10. 4. 1的试样溶液和空白溶液。按GB5009. 12-2010中第三法火焰原子吸收光谱法操作。平行测定结果的绝对差值不大于l.0 m
23、g/kg，取其算术平均值作为测定结果。14 B. 1 试剂和材料B. 1. 1 盐酸。B. 1.2 硫酸亚铁镜。B. 1.3 硫氨酸镀溶液:200g/L. B. 1.4 硫酸溶液:1+1.B. 1.5 三氯化铁溶液。GB 4479.1-2010 附录B(规范性附录)三氧化铁标准滴定溶液的配制方法B. 1.6 重错酸饵标准滴定溶液:c(l/6KzCr207)=0.1mol/L，按GB/T602配制与标定。B.2 仪器和设备见图A.1.B.3 三氯化铁标准滴定溶液的配制B. 3.1 配制取100mL主氯化铁溶液和75mL盐酸，置于1000 mL棕色容量瓶中，用新煮沸并已冷却到室温的水稀释至刻度，摇
24、匀，立即倒入避光的下口瓶中，在二氧化碳气体保护下贮藏。B.3.2 标定称取约3g(精确至0.0001g)硫酸亚铁镀，置于500mL锥形瓶中，在二氧化碳气流保护作用下，加入50mL新煮沸并己冷却的水，使其溶解，再加人25mL硫酸溶液，继续在掖面下通人二氧化碳气流作保护，迅速准确加入35mt重锚酸饵标准滴定溶液，然后用需标定的三氯化铁标准溶液滴定到接近计/少算量终点，立即加入25mL硫氨酸镀溶液，并继续用需标定的三氧化/铁标准溶液滴定到红色转变为绿色，即为终点。整个滴定过程应在二氧化碳气流保护下操作，同时做一空白试验。B. 3. 3 结果计算三氯化铁标准溶液的浓度以c(TiC13)计，单位以摩尔每
25、升(mol/L)表示，按公式也.1)计算:式中zc(TiCl,) =主L一0 Vz -V3 c一一重锚酸饵标准滴定溶液浓度的准确数值，单位为摩尔每升(mol/L); Vj-一重锚酸锦标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升(mL); .( B.1 ) Vz一一滴定被重错酸饵标准滴定溶液氧化成高铁所用去的三氧化铁标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升(mL); 15 GB 4479.1-2010 V3 滴定空白用去三氯化铁标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升(mL)。计算结果表示到小数点后4位。以上标定需在分析样品时即时标定。16 C.1 试剂和材料C. 1. 1 氯化锁。C. 1.2 氨水。附
26、录C(规范性附录)氧化银标准溶渡的配制方法C.1.3 硫酸标准滴定溶液:c(1/2H2S04)=0.1 mol/L，按GB/T601配制与标定。C. 1.4 玫瑰红酸铀指示液(称取O.1 g玫瑰红酸锅，溶于10mL水中，现用现配)。C. 1.5 广范pH试纸。C.2 配制GB 4479.1一2010称取12.25g氧化钮，溶于500mL水，移入1000 mL容量瓶中，稀释至刻度，摇匀。C.3 标定方法吸取20mL硫酸标准滴定溶液，置于250mL锥形瓶中，加50mL水，并用氨水中和到广范pH试纸为8，然后用氯化顿标准滴定溶液滴定，以玫瑰红酸铀指示液作外指示液，反应液与指示液在滤纸上交汇处呈现玫瑰
27、红色斑点且保持2min不褪色为终点。C.4 结果计算氧化顿标准滴定溶液浓度以c(1/2BaC12)计，单位以摩尔每升(mol/L)表示，按公式(C.l)计算:刊BaC12) =守式中zCj一一硫酸标准滴定溶液浓度的准确数值，单位为摩尔每升(mol/L); Vc一硫酸标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升(mL);Vs一消耗氧化顿标准滴定溶液体积的准确数值，单位为毫升(mL)。计算结果表示到小数点后4位。. ( C.l ) 17 GB 4479.1-2010 附录D(资料性附录)克莱红霞相色谱示意图和各组分保留时间D.1 克莱红液相色谱示意图见图D.l。mAU 700 600 500 400 3
28、00 200 100 。3 2 5 6 川Il j 0 2.5 5.0 7.5 10.0 12.5 15.0 17.5 20.0 22.5 t/min 1一一-6-经基-1，3，6-茶三磺酸销;2一一7-泾基-1，3-茶二磺酸销;3一-3-泾基-2，7-茶二磺酸销;4一-1茶胶4磺酸销;5一-6-短基-2荼磺酸销;6一一克莱红z7一一未知物。图D.1克莱红霞相色谱示意图D.2 克莱红各组分保留时间见表D.l.表D.1克莱红各组分保留时间峰号组分名称1 6-瓷基-1，3，6-茶三磺酸销2 7-援基-1，3-茶二磺酸销3 3-短基-2，7-茶二磺酸纳4 1茶胶-4-磺酸销5 6-瓷基-2-荼磺酸纳
29、6 克莱红保留时间/min2.44 4.59 4.97 9.29 13.92 18.88 注:不同仪器、不同分离柱、甚至不同时间进样各组分的保留时间均会有所不同，但各组分的洗脱顺序是不变的。18 OFON-dh叮叮阁。国华人民共和国家标准食品安全国家标准申a食品添加荆克莱红GB 4479. 1一2010晤中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045 网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销峰印张1.5字数35千字2011年2月第一次印刷开本880X 1230 1/16 2011年2月第一版* 书号:155066. 1-41498 24.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)68533533定价GB 4479. 1一2010打印日期:2011年3月2日F002
