1、中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验志贺氏菌检验Microbi。logicalexaminati。nof food hygiene Examination of Shigella 1 主届内容与适用范围本标准规定了食品中志贺菌的检验方法。本标准适用于食品和食物中毒样品中志贺氏菌的检验。2 51用标准GB 4789. 28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3. 1 天平：称取检样用。3. 2均质器或乳钵3. 3 温箱。3.4 显微镜。3. 5灭菌广口瓶：500mL, 3.6灭菌三角烧瓶：500mL,250 mL, 3. 7 灭菌平皿：90mm 15 mm。3.8载玻片。3
2、. 9 1酒精灯。3. 10 灭菌金属匙或玻璃棒。3. 11 接种棒，镰锵丝。3. 12 试管架，试管篓。GB 4 7 8 9. 5-9 4 代替GB4789. 5 84 3. 13 硝酸纤维素滤膜：150mm50mm，如.45 m。I描用时切成两张，每张70mmX50 mm，用铅笔划格，每格6mm 6 mm。每行10格，分6行。灭菌备用。4 培弊基和试J4. 1 CN增菌液按GB4789. 28中4.17规定。4. 2 HE琼脂s按GB4789. 28中4.21规定。4. 3 SS琼脂z按GB4789. 28中4.22规定。4-4 麦康凯琼脂z按GB4789. 28中4.24规定。4. 5
3、伊红美蓝琼脂（EMB）：按GB4789. 28中4.25规定。4.6 三糖铁琼脂（TS！）：按GB4789. 28中4.26、4.27规定。中华人民共和国卫生部1994-0318批准1994-09 01实施475 GB 4789.5-94 4. 7葡萄糖半固体管s按GB4789. 28中4.31规定。4.8半固体管s按GB4789. 28中4.30规定。4.9葡萄糖镀琼脂s按GB4789. 28中3.8规定。4. 10尿素琼脂（pH7.2）按GB4789. 28中3.15规定。4. 11 西蒙氏拧糠酸盐琼脂z按GB4789. 28中3.5规定。4.12氟化饵（KCN）培养基z按GB4789.
4、28中3.16规定。4. 13 氨基酸脱竣酶试验培养基g赖氨酸、鸟氨酸及对照培养基，按GB4789. 28中3.12规定。4. 14 糖发酵管s棉子糖、甘露醇、甘泊、七叶普及水杨苦，按GB4789. 28中3.2规定。4. 15 5%乳糖发酵管：按GB4789. 28中4.32规定。4. 16 蛋白陈水、鼓基质试Jfij按GB4789. 28中3.13规定。4. 17 志贺氏菌属诊断血清。5检验程序志贺氏菌检验程序如下z检样25g+GN ZZ5mL 36士IC, 6 Sh HE琼脂或SS36土l.18Z4h挑取可艇菌落TS！，葡萄瞥丰固体TS！底层产酸，斜面产瞩，H,s一不产气，元动力476
5、血槽学分型生他分群试验志贾氏菌圃分群旦分型结果进一步的生化试磁葡萄糖镀试验、西蒙氏拧攘酸盐、赖氨酸、尿章、KCN、水杨督和七叶骨葡萄糖镀或任何耳他阳性结果非志贺氏菌报告圭康凯或EIB非如左述的各种反应结果非志贾氏菌6操作步骤6. 1 增菌GB 4 789. 5-94 称取检样25g，加入装有225mLGN增菌液的500mL广口瓶内，固体食品用均质器以8000 10 000 r/min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用金属匙或玻璃棒研磨使其乳化，于36培养68h。培养时间视细菌生长情况而定，当培养液出现轻微混浊时即应中止培养。6.2分离和初步生化试验6. 2. 1 取增菌液1环，划线
6、接种于HE琼脂平板或SS琼脂平板1个g另取l环划线接种于麦康凯琼脂平板或伊红美蓝琼脂平板1个，于36培养1824h，志贺氏菌在这些培养基上呈现无色透明不发酵乳糖的菌落6.2.2挑取平板上的可疑菌落，接种三糖铁琼脂和葡萄糖半固体各1管。一般应多挑几个菌落，以防遗漏，经36培养1824h，分别观察结果6. 2. 3 下述培养物可以弃去za. 在三糖铁琼脂斜面上呈蔓延生长的培养物sb. 在1824h内发酵乳糖、潦糖的培养物e 不分解葡萄糖和只生长在半固体表面的培养物；d. 产气的培养物，e. 有动力的培养物，r. 产生硫化氢的培养物。6. 2.4 凡是乳糖、!II:糖不发酵，葡萄糖产酸不产气（福氏志
7、贺氏菌6型可产生少量气体，元动力的菌株，可做血清学分型和进一步的生化试验。6. 3 血清学分型和进步的生化试验6. 3. 1 血清学分型挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。先用4种志贺氏菌多价血清检查，如果由于K抗原的存在而不出现凝集，应将菌液煮沸后再检查，如果呈现凝集，则用Al,A2,B群多价和D群血清分别试验。如系B群福氏志贺氏菌，贝tl用群和型因子血清分别检查福氏志贺氏菌各裂和亚型的型和群抗原见表lo可先用群因子血清检查，再根据群因子血清出现凝集的结果，依次选用型因子血清检查。4种志贺氏菌多价血清不凝集的菌株可用鲍氏多价1、2、3分别检查，并进一步用115各型因子血清检查。如果鲍氏
8、多份血清不凝集，可用剩疾志贺氏菌312型多价血清及各型因子血清检查。表1福氏志贺氏菌各型和亚型的型抗原和群抗原型和亚型型抗原群抗原在群因子血清中的凝集3,4 6 7,8 la 1,2,4,5,9 + Jb 1,2,4,5,9., + + 2 J,3,4 十2h I ,7,8,9 + 3a I 1.6.7.8,9唱十+ 3b I ,3,4,6. + 十4 IV ,(3,4) . 十4b IV ,3,4,6 + 十Sa ,3,4“ 十77 裂和亚型型抗原5b v 6 VI X变体Y变体注凝集$不凝集，有或无6.3.2 进一步的生化试验GB 4789. 5-94 续表l群抗原在群因子血清中的凝集3,
9、4 6 7.8 1,5,7,9. + 1.2,(4). （十）1,7,8,9. + 1,3,4 + 在做血清学分型的同时，应做进一步的生化试验，即g葡萄糖馁，西蒙氏拧橡酸盐，赖氨酸和鸟氨酸脱竣酶，pH7.2尿素，KCN生长，以及水杨背和七叶昔的分解。除宋内氏菌和鲍氏13型为乌氨酸阳性外，志贺氏菌属的培养物均为阴性结果。必要时还应做革兰氏染色检查和氧化酶试验，应为氧化酶阴性的革兰氏阴性杆菌。生化反应不符合的菌株，即使能与某种志贺氏菌分型血清发生凝集，仍不得判定为志贺氏菌属的培养物。己判定为志贺氏菌属的培养物，应进一步做5%乳糖发酵，甘露醇、棉子糖和甘泊的发酵和自童基质试验。志贺氏菌属4个生化群的培养物，应符合该群的生化特性。但福氏6型的生化特性与A群或C群相似，见表Zo表2志贺氏菌属四个群的生化特性生化群5%现糖甘露醇棉于糖A群s喇疾志贺氏菌B群g褐氏志贺氏菌+ 十C群鲍氏志贺氏菌+ D群s宋内氏志贺氏菌十（）+ + 注，阳性，一阴性，一多数阴性，少数阳性，（迟缓阳性。d有不同生化型6. 4 结果报告z综合生化和血清学的试验结果判定菌型并作出报告。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由江西省卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人何晓青。甘油（十）(+) d 本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。478 能基质十(+) 一
