1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准GB/T 5009.108-2003 代替GB/T14931. 2-1994 畜禽肉中己烯雌酷的测定Determination of diaethylstilbestrol in flesh 2003-饵-11发布2004-01-01实施中华人民共和础卫生变发布中国国家标准化智聘委员E0 ,) GB/T 5009.1082003 36 前蓄本标准代替GB/T14931. 2-1994(畜禽肉中己烯雌盼的测定方法儿本标准与GB/T14931. 2-1994相比主要修改如下z一一修改了标准的中文名称，标准中文名称改为畜禽肉中已烯雕盼的测定h按照
2、GB/T20001. 4-2001(标准编写规则第4部分z化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口，本标准负1费远萃单位z辽宁省食品卫生监督梭验所、沈照市卫生防疫站、鞍山市卫生防疫站.本标准:葵起草人3翠永言、李学窃、冯哥哥、吴百禄、j容辙。E重标哥董沙94年首次发布，本次为第一次修订。GB/T 5009.108-2003 畜禽肉中己烯雌酣的测定1 范围本标准规定了用高效液相色谱HPLC)方法测定畜禽肉中己烯雌盼残留。本标准适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雌酷残留量测定。检出限0.25mg/kg. 2 原理试样匀浆后，经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，
3、经紫外检测器鉴定。于波长230nm处测定吸光度，同条件下绘制工作曲线，己烯雌l!S含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，试样与工作曲线比较定量。3 试剂3.1 甲醇3.2 0.043 mol/L磷酸二氢销(NaH2PO. 2H20)取1g磷酸二氨销溶于水成500mL. 3.3磷酸3.4 己烯雌盼(DES)标准溶液s精密称取100mg己烯雌酣(DES)溶于甲醇，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES1. 0 mg.贮于冰箱中。3.5 己烯雌酣(DES)标准使用液g吸取10.00mL DES贮备液，移人100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES100g. 4 仪器4
4、.1 高效液相色谱仪g具紫外检测器。4.2 小型绞肉机。4.3 小型粉碎机。4.4 电动振荡机。4.5 离心机。5 分析步骤5.1 提取及净化称取5g( :c O. 1 g)绞碎(小于5mm)肉试样，放入50mL具塞离心管中，加10.00mL甲碎，充分搅拌，振荡20min，于3000r/min离心10min，将上清液移出，残渣中再加10.00mL甲醇，混匀后振荡20 min，于3000 r/min离心10min，合并上清液，此时若出现混浊，需再离心10min，取上清液过0.5mFH滤膜，备用。5.2 色谱条件5.2.1 紫外检测器z检测波长230nm。5.2.2 灵敏度，0.04AUFS。5.
5、2.3 流动相z甲醇十0.043mol/L磷酸二氢销(70+30).用磷酸调pH=5(其中NaH2PO，. 2H2 0 水溶液需过0.45m滤膜。5.2.4 流速:1mL/min. 5.2.5 进样量:20L.:)7 GB/T 5009.108-2003 5.2.6 色谱柱:CLC-OD5-C18 (5m)6.2 mmX 150 mm不锈钢柱。5.2.7 柱温g室温。5.3 标准曲线绘制称取5份(每份5.0g)绞碎的肉试样，放入50mL具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液(6.0.12.0.18.0.24.0g/mL)各1.0 mL.同时做空白。其中甲醇总量为20.00mL.使其测定浓度为0
6、.00.0.30.0.60.0.90. 1. 20吨/mL.按5.1处理方法提取备用。5.4 测定分别取样20L.注入HPLC柱中，可测得不同浓度DES标准溶液峰高，以DES浓度对峰高绘制工作曲线，同时取样液20L.注入HPLC柱中，测得的峰高从工作曲线图中查相应含量，如=8.235。5.5 计算按下式计算g一 一只一叽川一以A-1 X 式中=X一一试样中己烯雌盼含量，单位为毫克每千克(mg/kg), A一一进样体积中己烯雌盼含量，单位为纳克(ng), m一一试样的质量，单位为克(g), V2 进样体积，单位为微升(L)，V1 试样甲醇提取液总体积，单位为毫升(mL)。5.6 色谱圈色谱图见图1。L 专三:8 1 7 2 1 L 8.3 1 溶剂峰，2 杂质峰，3 己烯雌酷标准峰。图138
