1、中华人民共和国国家标准GB/T 14931.2-94 畜禽肉中己烯雌酷的测定方法Method for determination 01 diaethylstilbestrol in f1esh 1 主题内容与适用范围本标准规定了用高效液相色谱(HPLC)方法测定畜禽肉中己烯雌盼残留。本标准适用于新鲜鸡肉、牛肉、猪肉、羊肉中己烯雄盼残留最测定。最小检出限1.25 ng(取样5日时，最小检出浓度。.25mg/kg)。2 原理样品匀浆后，经甲醇提取过滤，注入HPLC柱中，经紫外检测器鉴定。于波长230nm处测定吸光度同条件下绘制工作曲线，己烯雌盼含量与吸光度值在一定浓度范围内成正比，样品与工作曲线比
2、较定量。3试J使用的试剂一般系分析纯，有机溶剂需过0.5mFH滤膜，无机试剂需过0.45m滤膜。3. 1 甲醇3.2 O. 043 mol/L磷酸二氢销(NaH，PO. 2H，O)取1g磷酸二氢销溶于水成500mL. 3.3磷酸3.4 己烯帷酣(DES)标准溶液z精密称取100mg己烯帷盼(DES)溶于甲醇，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度.lm匀，每毫升含DES1.0 mg.贮于冰箱中。3.5 己烯雌盼(DES)标准使用液z吸取10.00mLDES贮备液，移入100mL容量瓶中，加甲醇至刻度，混匀，每毫升含DES100吨。4 仪器4. 1 高效液相色谱仪z具紫外检测器。4.2 小型绞肉机
3、。4.3 小型粉碎机。4.4 电动振荡机。4.5 离心机。5 操作方法5. 1 提取及净化称取5日(土O.1 日)绞碎(小于5mm)肉样品，放入50mL具塞离心管中，加10.00mL甲醇，充分搅拌，振荡20min，于3000 r/mn离心10min，将上清液移出，残渣中再加10.00mL甲醇，混均后振蔼20 min，于3000r/mn离心10min，合并上清液，此时出现混浊，需再离心10min，取上清液过O.5m 中华人民共和国卫生部1994-01-24批准1994-08-01实施454 FH滤膜，备用。5.2 色谱条件5.2.1 紫外检测器检测波长230nm. 5.2.2 灵敏度，0.04A
4、UFS。GB/T 14931.2-94 5.2.3 流动相z甲醇，O. 043 mol/L磷酸二氢纳，70/30，用磷酸调pH=5(其中NaH2PO， 2H20水溶液需过0.45m滤膜)。5.2.4 流速，1mL/min. 5.2. 5 进样量，20L。5.2.6 色谱柱，CLC-ODS-C18(5m)6.2mm X 150 mm不锈钢柱。5.2. 7 柱温g室温。5.3 工作曲线绘制称取5份(每份5.0g)绞碎的肉样品，放入50mL具塞离心管中，分别加入不同浓度的标准液(6.0，12.0，18.0，24.0g/mL)各1.0 mL，同时做空白。其中甲醇总量为20.00mL，使其测定浓度为。0
5、0，0.30，0.60，0.90，1.20吨/mL，按5.1处理方法提取备用。5.4 测定分别取样20L，注入HPLC柱中，可测得不同浓度DES标准溶液峰高，以DES浓度对峰高绘制工作曲线，同时取样液20L，注入HPLC柱中，测得的峰高从工作曲线图中查相应含量，Rt = 8.235. 5. 5计算X AX1000 一一- V. 式中，X一样品中己烯雌盼含量，mg/kg，A一进样体积中己烯雌盼含量，ng;m一一样品的质量，g;V，一一进样体积，L，V，一一样品甲醇提取液总体积，mL。5. 6 色谱图4.34(2) mX式8.3 (3) (1)一溶剂峰川2)杂质峰，(3)己烯雌酣标准晶峰2.718 (1) 455 GB/T 14931.2-94 附加说明.本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由辽宁省食品卫生监督检验所、沈阳市卫生防疫站、鞍山市卫生防疫站负责起草。本标准主要起草人翠永信、李学明、冯昕、吴百禄、刘春艳。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。456
