1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准GB/T 5009.159-2003 食品中还原型抗坏血酸的测定Determination of reductive-form ascorbic acid in foods 2003心8-11发布2004心1翩。1实施中华人民共和国卫生宠爱布中国国家标准化管理委员EGBjT 5009. 159-2003 前言本标准附录A是资料性附录.本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准负责起草单位z河北省唐山市卫生防疫站，参加起草单位z河北省卫生防疫站、天津市食品卫生监督检验所、吉林省卫生防疫站。本标准主要起草人g张文德、李信荣、韩会新、王荫国、
2、李青。329 GB/T 5009.159-2003 引言现行国家标准GB/T12392-1990蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定方法(荧光法和2，4-二硝基苯脐法)测定的是氧化脱氢型抗坏血酸，不能测定其主要成分还原型抗坏血酸，而且局限于果蔬类试样，操作非常繁琐;对营养强化食品、蛋白食品等试样的测定更不适应.为此研制了测定食品中抗坏血酸的标准检验方法。该法具有灵敏度高、准确度好、操作简便、快速、应用范围广等特点。适用于各类食品中抗坏血酸的测定。330 食品中坯原型抗坏血酸的测定1 范图本标准规定了食品中抗坏血酸的分光光度法。本标准适用于各类食品中还原型抗坏血酸的测定。本标准不适用于脱氢型抗坏
3、血酸的测定。2原理GB/T 5009. 159-2003 在乙酸溶液中，抗坏血酸与囡蓝主I;:B反应生成黄色的草酸脐啕2-爱基丁酿内酶衍生物。在最大吸收波长420nm处测定吸光度，与标准系列比较定量.3试JlIJ3.1 乙酸溶液(2mol!L) ，吸取11.6 mL冰乙酸，如水稀释至100mL. 3.2 乙酸溶液(0.5mol!L) ，吸取2.9mL冰乙酸，加本事曾释至100姐L。3.3 乙二胶囚乙酸二锵溶液(0.25 mol!L) ，称取9.3喜乙二胶11!1乙酸二锅ClOH，1也O，Na， 2H, OJ 于水中，加热使之溶解后，放冷，并稀稀.?E100 mL。3.4 蛋白沉淀剂3.4.1
4、乙酸悴溶液(220g/L)，称取22.0g乙酸铸Zn(CH，COO)， 2H，OJ.加3mL冰乙酸溶于水，并稀释至100mL。3.4.2 亚铁氟化铮溶液(106g!L)，称浓10.6军翌铁氧化镑K，Fe(CN.3日，OJ.如水浴解至100 m L, 3.5 显色J，fl献给以FastBlue Salt I协溶液(2g/L)，准礁称取0.2g雷蓝盐B.如水溶解于100mL 棕色容量瓶中，并稀释至J度该溶液在黛温下贮存可稳定3d以上)。3.6 抗坏血酸标准储备溶液(2.0g/L) ，精密称取0.2000日抗坏血酸，加20mL乙酸溶液(2mol/L) 溶解后移入100mL棕色容量瓶中，用水稀释至刻度
5、，混匀。此溶液每毫升相当于2.0mg抗坏血酸(lOC下冰箱内贮存在2d内稳定)。3.7抗坏血酸标准使用溶液怜.1g/L):!fl移液管精密吸取5.0mL抗坏血酸标准储备溶液(2.0gfL) 于100mL棕色容蠢瓶内，加5mL乙酸溶液(2mol/L).用水草量将至j度，混匀。i比溶液每毫升格当于100吨抗坏血酸(1脑用时配和tl)。4 仪器4.1 分光光度计，4.2 捣碎貌。4.3 离心沉淀貌。4.4 10 mL具塞玻璃比色管e5 分析步骤5.1 试样溶液的ftiiJ吉普5. 1. 1 非蛋白性食品5.1. 1. 1 液体试草草s抗坏血酸含量在0.2g/L以下的试样，混匀后E守主接取得测定s统靠
6、在盛重重含量在331 GB/T 5009. 159-2003 0.2 g/L以上的试样，用水适量稀释后测定。5. 1. 1. 2 水溶性固体试样g准确称取1.0g5.0 g.精确至0.001g(含0.2g/kg以下抗坏血酸)放入乳钵中，加5mL乙酸溶液(2mol/L)研磨溶解后，移入100mL棕色容量瓶内，加水稀释至刻度。5. 1. 1. 3 蔬菜、水果z称取鲜样可食部分20.0 g50. 0 g于捣碎机内，加同倍量的乙酸溶液(2mol/L) 捣成匀浆。称取10.0 g20. 0 g匀浆(含0.2g/kg以下抗坏血酸)于100mL棕色容量瓶内，加5mL 乙酸溶液(2mol/L).用水稀释至刻度
7、，混匀。滤纸过滤，滤液备用.不易过滤的试样可用离心机离心后，上清液供测定。5. 1. 2 蛋白性食品(奶粉、豆粉、乳饮料、强化食品等):固体试样混匀后精密称取5.0 g10. 0 g.精确至0.001g;液体试样用移液管精密吸取5.0 mL10. 0 mL于100mL棕色容量瓶内。加10mL乙酸溶液(2mol/L)、乙酸钵溶液(220g/L)和亚铁氟化饵溶液(106g/L)各7.5mL.加水至j度，混匀.将全部溶液移人离心管内，以3000r/min离心10min，上清液供测定。同时取与处理试样相同量的乙酸溶液、乙酸铸溶液和亚铁佩化梆溶液，按同一方法做试剂空白试验。5.2 标准曲线的绘制精密吸取
8、0.0.1.0.2.0.4.0.6.0.8.1.0 ,1. 5 , 2.0 mL抗坏血酸标准使用溶液(相当于抗坏血酸。，10.0.20.0.40.0.60.0.80.0.100.0.150.0.200.0g).分别置于10mL比色管中.各加0.3mL乙二胶四乙酸二锅溶液(0.25mol/L)、0.5mL乙酸溶液(0.5mol/L)、1.25 mL回蓝盐B溶液(2g/L) ，加水稀释至刻度，混匀。室温(20C25C)下放置20min后，移人1cm比色皿内，以零管为参比，于波长420 nm处测量吸光度，以标准各点吸光度绘制标准曲线。5.3 试样测定5.3.1 非蛋白性试样的测定:精密吸取按5.1.
9、1制备的试样溶液O.5 mL5. 0 mL(约相当于抗坏血酸200g以下)于10mL比色管内.以下按5.2自加0.3mL乙二胶四乙酸二纳溶液(0.25 mol/L) .起依法操作。试样吸光度从标准曲线上查出抗坏血酸含量。5.3.2 蛋白性试样的测定g精密吸取按5.1.2制备的试样溶液约相当于抗坏血酸200月以下)和等量试剂空白溶液(0.5 mL5. 0 mL).各于10mL比色管内.各加1.5 mL乙二胶四乙酸二锅癖液(0.25 mol/L)、1.0 mL乙酸溶液(0.5mol/L)、1.25 mL固蓝盐B溶液(2g/L).加水稀释至刻度，混匀。室温(20C25C)下放置3min后，移人1cm比色皿内，以试剂空白管为参比，于波长420nm处测量吸光度。试样吸光度从标准曲线上查出抗坏血酸含量。6 结果计算按下式计算.x = . c X 100 mX告X1 000 式中.X一一试样中抗坏血酸的含量，单位为毫克每百克(毫克每百毫升)mg/100g(mg/100 mL) J; c-一-试样测定液中抗坏血酸的含量，单位为微克(g);m一一试样质量(体积).单位为克(毫升)g(mL)J;V2 试样处理液总体积，单位为毫升(mL);V 测定时所取溶液体积，单位为毫升(mL)。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。332
