1、ICS 67.040 C 53 中华人民共和国国家标准GB/T 5009.169-2003 食品中牛璜酸的测定Determination of taurine in foods 2003-08-11发布2004心1-01实施396 中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员再GB/T 5009. 169-2003 前言本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准第一法负责起草单位:卫生部食品卫生监督检验所，参加起草单位河南省卫生防疫站、长春市卫生防疫站、广东省深圳市宝安区卫生防疫站。本标准第二法负责起草单位g卫生部食品卫生监督检验所;参加起草单位z北京市宣武区卫生防疫站、部郭市卫生防疫站
2、。本标准第二法主要起草人g杨祖英、张平伟、祖如松、焦淑婷。397 GB/T 5009. 169-2003 引言牛磺酸(taurine)是一种具有广泛生理功能的含硫-氨基酸，化学名为2氨基乙基氨基酸。我国于1993年批准牛磺酸在乳制品、婴幼儿食品及谷类制品、强化饮料中使用。本标准部分包括高效液相色谱法和薄层色谱法两种方法。398 GB/T 5009. 169一2003食晶中牛磺酸的测定1 范围本标准规定了食品中牛磺酸的测定方法。本标准适用于饮料，婴幼儿食品，谷类制品，奶粉中牛磺酸的测定。本方法第一法仪器检出限20.0吨，检出浓度80mg/kg(L);线性范围:0 mgO. 05mg。第二法斑点检
3、出限0.2g.检出浓度80mg/kg(L)。第一法离效液相色谱法2 原理试样中牛磺酸经提取后，用衍生剂衍生，衍生物经C柱分离，于其最大吸收波长330nm检测，根据保留时间和峰面积进行定性定量。3 试剂3.1 60 g/L磺基水杨酸溶液2称取6.0g磺基水杨酸，加水溶解至100mL。3.2 邻苯二甲醒OPA)。3.3 乙硫碎。3.4 棚酸。3.5 甲醇。3.6 乙庸。3.7 氮氧化俐。3.8 牛磺酸z生化试剂。3.9 o. 4 mol/L跚酸纳缓冲液z称取2.48g跚酸和1.41 g氢氧化锅，用水溶解定容至100mLo 3.10 衍生剂g称取0.1gOPA用10mL甲醇溶解，加0.1mL乙硫醇.
4、0.4mol/L棚酸销缓冲液定容至100 mL 3.11 牛磺酸标准溶液z精密称取0.0500g牛磺酸，用水溶解后移入50mL容量瓶中，并用水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升含1mg牛磺酸。3.12 牛磺酸标准使用液.吸取牛磺酸标准溶液(3.11) 1. 0 mL于50mL容量瓶，加水至刻度，即得0.020 mg/mL牛磺酸标准使用液。4 仪器4.1 高效液相色谱仪(配有紫外检测器)。4.2 离心机。4.3 超声波清洗器。4.4 容量瓶:5、25、100mL 4.5 微孔滤膜过滤器。399 GB/5009. 169-2003 5 分析步骤5.1 i:式样处章程5.1.1 饮料:准确吸取1.0mL
5、试样，用水稀释至100mL，将衍生用。5. 1. 2 奶粉2称取1.0 g试样，用水定容至25.0mL，吸取3.0mL于离心管中，再加3.0mL 60 g/L磺基水杨酸，离心15min，吸取2.0mL上清液于5mL容量童瓶中，滴加1mol/L氢氧化销调pH至中性，用水定容豆豆5.0mL.待衍生用。5.1.3 谷类食品:称取1.0 g试样，加水定容至25.0mL.充分搅匀后，静止5min，吸取3.0mL上消液于离心管中，以F操作按5.1. 2中自再加3.0mL 60日/L磺基水杨酸，起，与奶粉类食品操作相同。5.2 测定5.2.1 衍生反应:吸取2.5mL上述定容液子5rnL具寒离心管中，再准确
6、加入2.5mL衍生剂(3.10).摇匀，反应2min后，经0.45严盟的微孔滤摸过滤，立IlP送样20L，进行HPLC分析，辈革运其锋在哥积，所有试辛辛及标数从反应至透样的时向应保持一致，并按秘在5黯in悟，从标准也线查得雪慧定液中牛磺酸治含量。5.2.2 日PLC参考条件分析校:wBondapakC 3.9 mmX300 mm 10问时流动相:附僻十乙膀+水(10十10+80), 波长:330nrn , 流速:1mL/mino 5.2.3 标准曲线a分别吸取牛磺酸标准使用液。、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5rnL，再加水至2.5rnL.以下按5.2.1中再准确加入2.5mL衍生剂，起
7、，操作。然后以峰阁积-浓度作图，绘制标准出线或回归方程。色谱黯j毡E自1所示。固1牛甜酸衍生物HPLC色谱图6 结果计算按式(1)计算z式中2X 试辛辛牛磺酸的含量，单位为克每千克升)喜/孟草丛门要C 一一经主整部或计算得透样液中牛磺酸的含章，单佼为星疆克每毫升(rng!mLl, V，一一试样总的稀释体积，单位为毫升(mL)，4口。( 1 ) V，一一试样的体积或质量，单位为毫升克)mL(g巧。第二法盖章.ffffS谱法7 原理试桥中牛磺酸，经离子交换柱提纯后，以薄层包谱法定性、定量。8 试剂8.1 2%放酸溶液3准确吸取10.0mL盐酸，加水稀将交500mL , 8.2 40岁L氮氧化纳溶液
8、z称取4g氢氧化锅，加水溶解宠100mL 8.3 乙董事3分析纯。8.4 展开J!J:8.4.1 1Er古董事+冰黯酸十元水乙醇(5.2+2.2+0.8)8.4.2 1E了醇十水十元水乙醇(4+1十。GB/T 5009.1692003 8.5 强碱性苯乙烯限离子交换树腾:717蟹，用乙醇浸泡过夜，再用水擦洗至水无色e8.6 强碱性笨乙烯阴离子交换树脂:732型，用乙碎浸泡过夜，再用水漂洗至水无色。8.7 3日/L经甲基纤维素销溶液称取0.3g授甲揍纤维素销溶液，加100mL水，加热溶解，放最过夜后，过滤，取滤液备用。8.8 磁胶G:200目，薄层色谱用。8.9 虽也押U:称取0.5日商三酶，用
9、50mL乙国事溶解，混匀。8.10 牛磺酸标准溶液z精确称取0.0200g牛磺自费标准品，用水溶解后移入100mL容量瓶中，并且用水稀释至1坦j度，即得0.2mg/mL的牛磺酸标准液。由仪费量生1J:董事母校:1.4cm3号cm，9.2 蒸发艇。9.3 善事f盖板:5cm20 cm. 9.4 微f量进样器:10L。9.5 展开稽。9.6 水浴锅。9.7 破璃喷雾器。9.日电吹风。10 分析步骤10.1 黯子交换栓的制备ilEI离子交换校z取己m水漂洗过的717强碱被阴离子树脂，填装1.5 cm10cm的交换枝，填装时不要混入气泡，先海30时，水泼派出液为中位).然后用10mL 40 g/L氢氧
10、化镇滚滚通过校，将交换校处写甚为强碱枝，备用。10.2 试样处理10.2.1 饮料=吸取5.0mL均匀试样通过阪离子交换树脂，满流速30漓/min，待液噩降至树指顶端401 GB/T 5009. 169-2003 时，先加人25mL水洗脱，再加入25mL2%盐酸溶液洗，弃去以上两次洗脱液，最后用25mL 2%盐酸溶液洗脱牛磺酸，用旋转蒸发仪蒸干洗脱液(温度50C)，准确加入5.0mL水，溶解残渣，溶液过滤入试管中，此液备作薄层分析用。10.2.2 谷类食品:称取2.0g均匀试样于具塞量筒中，分别用25、10、10mL水提取三次，每次提取静置15min，用吸管将上清液转入二元离子交换柱，调流速为
11、30漓/min，待流至树脂顶端时，加50mL水淋洗柱子，接受全部上清液和水的洗液，并将其转入阴离子交换柱，以下操作按10.2. 1中调流速30滴/min.。最后准确加人2.0mL水溶解残渣，过滤后的滤液进行薄层分析，用过的两支交换柱弃去。10.2.3 奶粉=称取2.0g均匀试样于烧杯中，加25mL水，加热2min，搅匀(勿使其沸腾)，冷却后，转入二元柱，用5mL水洗烧杯，洗液也转人二元柱，调流速为30滴/min，待流至树脂顶端时，加50mL水洗柱，接收洗脱液，并将其转入阴离子交换柱，以下操作按10.2.1中调流速30滴/min，.。最后准确加入2.0mL水溶解残渣，过滤后的滤液进行薄层分析，用
12、过的两支交换柱弃去。10.3 测定10.3.1 薄层板的制备称取15g硅胶G，加47mL 3 g/L短甲基纤维素纳溶液(如太稠，再加适量)，研匀，铺成0.25mm 厚的5cm20 cm的薄层板，于105C:J:YC(活化1h)，取出，置干燥器中备用。10.3.2 点样在薄层板下端2cm处，用微量注射器点2L试样榕液，同时点1.0、2.0、3.0mL牛磺酸标准溶液三个点，各点间距离1cm。10.3.3 展开与显色将点好的薄层板放人盛有展开剂(8.4.1或8.4.2)的展开槽中，展开槽预先用展开剂饱和，展开至12 cm(奶粉需18cm)，取出薄层板，凉干，喷显色剂，于80C烘箱中烘5min，斑点呈粉色至紫红色，根据斑点大小及颜色深浅进行走量。11 结果计算按式(2)计算=n-nu nv-nu nu-nu -14 -x n-n A-nu nu-A 1-14 一1-m v一一 -2 A-v x .( 2 ) 式中zX 试样中牛磺酸的含量，单位为克每千克(升)g/kg(L)J, A一一试样斑点相当牛磺酸的量，单位为微克(g), V , 水浴挥干后加入水的体积，单位为毫升(mL)，V 2 点样体积，单位为微升(L)，m 试样质量或体积，单位为克(毫升)g(mL)J。402
