1、ICS 67.040 C 53 昌中华人民共和国国家标准GB/T 5009. 26-2003 代替GB/T5009.26一1996食品中N-亚硝肢类的测定Determination of N-nitrosamines in foods 2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生变发布中国国家标准化管理委员再GB/T 5009.26-2003 前言本标准代替GB/T5009.26-1996食品中N亚硝胶类的测定方法儿本标准与GB/T5009.26-1996相比主要修改如下z修改了标准的中文名称，标准中文名称改为食品中N亚硝胶类的测定h一一按照GB/T20001. 4二20
2、01(标准编写规则第4部分g化学分析方法对原标准的结构进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准第-法由北京医科大学公共卫生学院、中国预防医学科学院营养与食品卫生研究所负责起草。本标准第二法由吉林省卫生防疫站负责起草。本标准于1985年首次发布.1996年第一次修订，本次为第二次修订。210 GB/T 5009.26-2003 食晶中N-亚硝肢类的测定第一法气相色谱热能分析仪法1 范围本标准规定了用气相色谱热能分析仪(GC-TEA)测定啤酒中挥发性N亚硝胶的测定方法。本标准适用于啤酒中N亚硝基二甲胶含量的测定。仪器的最低检出量为0.1吨，在试样取样量为50g.浓缩体积为0.5m
3、L.进样体积为10L时，本方法的最低检出浓度为O.1g/k趴在取样量为20g.浓缩体积为1.0 mL.进样体积为5L时，本方法的最低检出浓度为1.0g/kg.2 原理试样中N一亚硝胶经硅藻土吸附或真空低温蒸馆，用二氯甲烧提取、分离，气相色谱一热能分析仪(GC-TEA)测定。其原理如下:自气相色谱仪分离后的亚硝胶在热解室中经特异性催化裂解产生NO基团，后者与臭氧反应生成激发态NO。当激发态NO返回基态时发射出近红外区光线(600nm-2 800nm)。产生的近红外区光线被光电倍增管检测(600nm-800 nm)。由于特异性催化裂解与冷阱或CTR过滤器除去杂质，使热能分析仪仅仅能检测NO基团，而
4、成为亚硝胶特异性检测器。3试fIIJ3.1 二氯甲烧z每批取100mL在水浴上用K-D浓缩器浓缩至1mL.在热能分析仪上无阳性响应。如有阳性响应，则需经全玻璃装置重蒸后再试，直至阴性。3.2 氢氧化纳溶液(1mol/L):称取40g氢氧化销(NaOH).用水溶解后定容至1L. 3.3 硅藻士:Extrelut(Merck). 3.4 氮气。3.5 盐酸(0.1mol/L)。3.6 元水硫酸俐。3.7 N-亚硝胶标准储备液(200mg/L):吸取N-亚硝胶标准溶液10L(约相当于10mg).置于已加人5 mL无水乙醇并称重的50mL棕色容量瓶中，称量(准确J0.0001 g).用无水乙醇稀释定容
5、，混匀。分别得到N亚硝基二甲胶、N-亚硝基二丙胶、N-亚硝基吗琳的储备液。此溶液用安部密封分装后避光冷藏(-30C)保存，两年有效。3.8 N-亚硝胶标准工作液(200月/L):吸取上述N一亚硝胶标准储备液100L.置于10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇稀释定容，混匀。此溶液用安瓶密封分装后避光冷藏(4C)保存，三个月有效.4 仪器4.1 气相色谱仪。4.2 热能分析仪。4.3 玻璃层析柱2带活塞，8mm内径.400mm长。4.4 减压蒸馆装置。4.5 K-D浓缩器。211 GB/T 5009.26-2003 4.6 恒温水浴锅。5 分析步骤5.1 提取5. 1. 1 甲法g硅藻土吸附称取20.
6、00g预先脱二氧化碳气的试样于50mL烧杯中，加1mL氢氧化纳溶液(1mol/L)和1mL N-亚硝基二丙胶内标工作液(200g/L)，混匀后备用。将12g Extrelut干法填于层析柱中，用手敲实。将啤酒试样装于柱顶。平衡10min15 min后，用6X5mL二氯甲:院直接洗脱提取。5.1.2 乙法z真空低温蒸锢5. 1. 2. 1 在双颈蒸馆瓶中加入50.00g预先脱二氧化碳气的试样和玻璃珠，4mL氢氧化纳溶液(1 mol/L) ，混匀后连接好蒸馆装置。在53.3kPa真空度低温蒸锢，待试样剩余10mL左右时，把真空度调节到93.3kPa，直至试样蒸至近干为止。5. 1. 2. 2 把蒸
7、馆液移入250mL分液漏斗，加4mL盐酸(0.1mol/L) ，用20mL二氯甲统提取三次，每次3min，合并提取液。用10g元水硫酸销脱水。5.2 浓缩将二氯甲烧提取液转移至K-D浓缩器中，于55C水浴上浓缩至10mL，再以缓慢的氮气吹至o. 4 mLl. 0 mL，备用。5.3 试样测定5.3.1 气相色谱条件5.3. 1. 1 气化室温度，220C。5.3. 1. 2 色谱柱温度，17S.C，或从7SC以5C/min速度升至175C后维持。5.3. 1. 3 色谱柱z内径2mm,._, 3 mm，长2m3 m玻璃柱或不锈钢柱，内装涂以固定液质量分数为10%的聚乙二醇20mol/L和氢氧化
8、饵(10g/L)或质量分数为13%的Carbowax20M/TPA于载体Chromosorb W A W-DMCS(80目100目)。5. 3. 1. 4 载气g氧气，流速20mL/min40 mL/min。5.3.2 热能分析仪条件5.3.2.1 接口温度，250C。5.3.2.2 热解室温度，500C。5.3.2.3 真空度，133Pa266 Pa. 5.3.2.4 冷阱g用液氮调至一150C(可用CTR过滤器代替)。5.3.3 测定分别注人试样浓缩液和N亚硝胶标准工作液5L10L，利用保留时间定性，峰高或峰面积定量。6 计算试样中N亚硝基二甲胶的含量按式(1)进行计算。X = h1 X
9、V, X c X V / (h 2 X V1 X m) 式中gX一一试样中N-亚硝基二甲胶的含量，单位为微克每千克(g/kg), h 试样浓缩液中N亚硝基二甲胶的峰高(mm)或峰面积3h, 标准工作液中N亚硝基二甲胶的峰高(mm)或峰面积;c 标准工作液中N亚硝基二甲胶的浓度，单位为微克每升(g/L)，V1 试样浓缩液的进样体积，单位为微升(L)，212 ( 1 ) GB/T 5009.26-2003 V, 标准工作液的进样体积，单位为微升(IL)，V 试样浓缩液的浓缩体积，单位为微升(L); m一一试样的质量，单位为克(g)。计算结果表示到两位有效数位。7 精密度在重复性条件下获得的两次独立
10、测定结果的绝对差值不得超过16%。第二法气相色谱-质谱仪法8范围本标准规定了酒类、肉及肉制品、蔬菜、豆制品、茶叶等食品中N-亚硝基二甲胶、N-亚硝基二乙胶、N亚硝基二丙胶及N亚硝基毗咯炕含量的测定方法。本标准适用于酒类、肉及肉制品、蔬菜、豆制品、调味品、茶叶等食品中N亚硝基二甲胶、N亚硝基二乙胶、N亚硝基二丙胶及N亚硝基毗咯烧含量的测定.9 原理试样中的N-亚硝胶类化合物经水蒸气蒸饱和有机溶剂萃取后，浓缩至一定量，采用气相色谱-质谱联用仪的高分辨峰匹配法进行确认和定量。10 试剂10.1 二氯甲烧s应用全玻璃蒸馆装置重蒸。10.2 元水硫酸销。10.3 氯化销z优级纯。10.4 硫酸(1+3)
11、 10.5 氢氧化销溶液(120g/L)。10.6 N-亚硝胶标准溶液g用二氯甲烧作溶剂，分别配制N-亚硝基二甲胶、N亚硝基二乙胶、N-亚硝基二丙胶、N亚硝基毗咯燎的标准溶液，使每毫升分别相当于0.5mgN亚硝胶。10.7 N亚硝胶标准使用液z在四个10mL容量瓶中，加入适量二氯甲烧，用微量注射器各吸取100LN-亚硝胶标准溶液，分别置于上述四个容量瓶中，用二氯甲烧稀释至刻度。此溶液每毫升分别相当于5gN亚硝胶。10.8 耐火砖颗粒z将耐火砖破碎，取直径为1mm-2 mm的颗粒，分别用乙醇、二氯甲烧清洗厉，在马弗炉中(400C)灼烧1h.作助沸石使用。11 仪器11. 1 水蒸气蒸馆装置g如图
12、l所示。213 GB/T 5009.26-2003 1 加热器，2-2000 mL水蒸气发生器63一一1000mL蒸馆瓶，4 冷凝器。11. 2 K-D浓缩器。11. 3 气相色谱质谱联用仪。12 分析步骤12.1 水蒸气蒸锢图1水蒸气蒸锢装置称取200g切碎(或绞碎、粉碎)后的试样，置于水蒸气蒸馆装置的蒸馆瓶中(液体试样直接量取200 mL)，加人100mL水(液体试样不加水)，摇匀。在蒸馆瓶中加入120g氯化锅，充分摇动，使氯化纳溶解。将蒸饱瓶与水蒸气发生器及冷凝器连接好，并在锥形接收瓶中加入40mL二氯甲烧及少量冰块，收集400mL馆出液。12.2 萃取纯化在锥形接收瓶中加入80g氯化锅
13、和3mL的硫酸。+3)，搅拌使氯化锅完全溶解。然后转移到500 mL分液漏斗中，振荡5mn，静止分层，将二氯甲炕层分至另一锥形瓶中，再用120mL二氯甲烧分三次提取水层，合并四次提取液，总体积为160mL。对于含有较高浓度乙醇的试样，如蒸馆酒、配制酒等，应用50mL氢氧化纳溶液(20g/L)洗有机层两次，以除去乙醇的干扰。12.3 浓缩将有机层用10g无水硫酸纳脱水后，转移至K-D浓缩器中，加入一粒耐火砖颗粒，于50C水浴上浓缩至1mL，备用。12.4 气相色谱质谱联用测定条件12.4.1 色谱条件12.4. 1. 1 气化室温度，190C。12.4. 1. 2 色谱柱温度.对N亚硝基二甲胶、
14、N一亚硝基二乙胶、N一亚硝基工丙胶、N-亚硝基口比咯烧分别214 GB/T 5009.26-2003 为1300C、1450C、1300C、1600C。12.4.1.3 色谱柱=内径1.8 mm3. 0 mm，长2m的玻璃柱，内装涂以质量分数为15%的PEG20M固定液和氢氧化梆溶液(10g/L)的80目100目ChromosorbW AWDWCSo 12. 4. 1. 4 载气:氮气，流速为40mL/min。12.4.2 质浦仪条件12.4.2.1 分辨率z注7000。12.4.2.2 离子化电压:70V。12.4.2.3 离子化电流:300Ao12.4.2.4 离子源温度:180oC。12
15、.4.2.5 离子源真空度:1. 33 X 10- Pao 12.4.2.6 界面温度:1800C。12.4.3 测定采用电子轰击源高分辨峰匹配法，用全氟煤油(PFK)的碎片离子(它们的质荷比为68.995 27、99.9936、130.9920、99.9936)分别监视N-亚硝基二甲胶、N-亚硝基二乙胶、N亚硝基二丙胶及N亚硝基毗咯烧的分子、离子(它们的质荷比为74.0480、102.0793、130.110 6、100.0630)，结合它们的保留时间来定性，以示波器上该分子、离子的峰高来定量。13 计算试样中某一N亚硝胶化合物的含量按式(2)进行计算。x=队/hzX c X V/m X 1000 .( 2 ) 式中2X 试样中某一N亚硝胶化合物的含量，单位为微克每千克或微克每升(g/kg或g/L), h 浓缩液中该N亚硝胶化合物的峰高，单位为毫米(mm)，h2 标准使用液中该N-亚硝胶化合物的峰高，单位为毫米(mm)，c 标准使用液中该N-亚硝胶化合物的浓度，单位为微克每毫升(g/mL), V一一试样浓缩液的体积，单位为毫升(mL)，m一一试样质量或体积，单位为克或毫升(g或mL)。计算结果表示到两位有效数字。215
