1、中华人民共和国国家标准GB/T 5009. 26一1996食品中N-亚硝肢类的测定方法代替GB5009.26-85 Method for determination of N-nitrosamines in foods 第一篇气相色i曾-热能分析仪法(第一法)1 主题内容与适用范围本标准规定了用气相色谱-热能分析仪(GC-TEA)测定啤酒中挥发性N亚硝胶的测定方法。本标准适用于啤酒中N亚硝基二甲胶含量的测定。仪器的最低检出最为O.1吨，在样品取样量为50.g.浓缩体积为0.5mL.进样体积为10L时，本方法的最低检出浓度为O.1月/kg，在取样量为20g.浓缩体积为1.0 mL.进样体积为5L
2、时，本方法的最低检出浓度为1.0月!kg，2 原理样品中N亚硝胶经硅藻士吸附或真空低温蒸馈，用二氯甲烧提取、分离，气相色谱-热能分析仪CGC-TEA)测定。其原理如下自气相色谱仪分离后的亚硝胶在热解室中经特异性催化裂解产生N基团，后者与臭氧反应生成激发态NO骨。当激发态NO祷返回基态时发射出近红外区光线(6002800nm)。产生的近红外区光线被光电倍增管检测(600800nm)。由于特异性催化裂解与冷阱或CTR过滤器除去杂质，使热能分析仪仅仅能检测NO基团，而成为亚硝胶特异性检测器。3试M3. 1 二氯甲烧:每批取100mL在水浴上用K-D浓缩器浓缩至1mL.在热能分析仪上无阳性响应。如有阳
3、性响应，则需经全玻璃装置重蒸后再试，宣至阴性。3. 2 氢氧化制溶液(1mol!L):称取40g氢氧化销(NaH).用水溶解后定容至1L。3. 3 硅藻士:Extrelut (Merck)。3. 4 氮气。3. 5 盐酸(0.1 mol/U。3. 6 无水硫酸俐。3. 7 N亚硝胶标准储备液(200mg!L):吸取N-亚硝胶标准10L(约相当于10mg).置于己加入5mL 无水乙醇并称重的50mL棕色容量瓶中，称量(准确到0.0001 g)。用无水乙醇稀释定容，混匀。分别得到N亚硝基二甲胶、N-亚硝基二丙胶、N-亚硝基吗琳的储备液。此溶液用安瓶密封分装后避光冷藏(-30 C)保存，两年有效。3
4、.8 N亚硝胶标准工作液(200陈!U:吸取上述N-亚硝胶标准储备液(3.7)100L.置于10mL棕色容量瓶中，用无水乙醇稀释定容，混匀。此溶液用安顿密封分装后避光冷藏(4C)保存，三个月有效。中华人民共和国卫生部1996-06-19批准1996-09-01实施57l 4 仪器4. 1 气相色谱仪。4.2 热能分析仪。GB/T 5009. 26-1996 4. 3 玻璃层析柱:带活塞，8mm内径.400mm长。4.4 减压蒸馆装置。4.5 K-D浓缩器。4.6 恒温水浴锅。5 分析步骤5. 1 提取5. 1. 1 甲法:硅穰土吸附称取20.00 g预先脱二氧化碳气的样品于50mL烧杯中，加1
5、mL氢氧化销溶液(1moI/L)和1mL N一亚硝基二丙胶内标工作液(200问/U.混匀后备用。将12g Extrelut干法填于层析柱中，用手敲实。将啤酒样品装于柱顶。平衡1015min后，用6X5mL二氯甲烧直接洗脱提取.5. 1. 2 乙法:真空低温蒸馆5.1.2.1 在双颈蒸馆瓶中加入50.00 g预先脱二氧化碳气的祥品和玻璃珠.4mL氮氧化销溶液(l moI/L).混匀后连接好蒸馆装置。在53.3kPa真空度低温蒸锚，待样品剩余10mL左右时，把真空度调节J93.3 kPa.直至样品蒸至近千为止。5.1.2.2 把蒸馈液移入250mL分液漏斗，加4mL盐酸0.1mol/L).用20m
6、L二氯甲统提取三次，每次3mn，合并提取液。用10g无水硫酸纳脱水。5. 2 浓缩将二氯甲烧提取液转移至K-D浓缩器中，于55C水浴上浓缩至10mL.再以缓慢的氮气吹至0.4l. 0 mL.备用。5.3 样品测定5. 3. 1 气相色谱条件5. 3. 1.1 汽化室温度，220C。5. 3. 1.2 色谱柱温度:l75C.或从75C以5C/min速度升至175C后维持。5. 3.1. 3 色谱柱z内径23mm.长23m玻璃柱或不锈钢柱，内装涂以固定液10%(m/m)聚乙二醇20M和氢氧化僻(10g/L)或13%(m/m)Carbowax 20M/TPA于载体ChromosorbWAW-DMCS
7、 (80-100曰)。5. 3. 1.4 载气:氧气，流速2040mL/min。5. 3. 2 热能分析仪条件5.3.2.1 接口温度，250C。5. 3.2.2 热解室温度，500c。5. 3. 2. 3 真空度，133266Pa。5. 3. 2. 4 冷阱z用液氮调至150C (可用CTR过滤器代替).5. 3. 3 测定分别注入样品浓缩液和N-亚硝胶标准工作液510L.利用保留时间定性，峰高或峰面积定量。6 计算Xj h72 hj X V2 X Cj X V h2 X Vj X mj ( 1 ) GB!T 5009. 26-1996 式中:X, 样品中N亚硝基二甲胶的含量，用!kg;h
8、, 样品浓缩液中N亚硝基二甲胶的峰高(mm)或峰面积，儿一标准工作液中N亚硝基二甲胶的峰高(mm)或峰面积;C，一一标准工作液中N亚硝基二甲胶的浓度，用!L，V , 样品浓缩液的进样体积，L，V , 标准工作液的进样体积，L，V 样品浓缩液的浓缩体积，L，m，一一样品的质量.g。结果的表述:报告算术平均值的二位有效数。7 允许差相对相差16%。第二篇气相色谱质谱仪法(第二法)8 主题内容与适用范围本标准规定了酒类、肉及肉制品、蔬菜、豆制品、茶叶等食品中N亚硝基二甲胶、N-亚硝基二乙胶、N亚硝基二丙胶及N亚硝基毗略烧含量的测定方法。本标准适用于酒类、肉及肉制品、蔬菜、豆制品、调味品、茶叶等食品中
9、N亚硝基二甲胶、N-亚硝基二乙胶、N-亚硝基二丙胶及N亚硝基毗咯烧含量的测定。9 原理样品中的N-亚硝胶类化合物经水蒸气蒸馆和有机溶剂萃取后，浓缩至一定量，采用气相色谱-质谱联用仪的高分辨峰匹配法进行确认和定量。10试J10. 1 二氯甲婉g须用全玻璃蒸馆装置重蒸。10.2 无水硫酸俐。10.3 氯化销s优级纯。10.4 硫酸0+3)。10.5 氢氧化纳溶液020g!L)。10.6 N亚硝胶标准溶液z用二氯甲统作溶剂，分别配制N亚硝基二甲胶、N-亚硝基二乙胶、N-亚硝基二丙胶、N-亚硝基毗咯婉的标准溶液，使每毫升分别相当于0.5mgN-亚硝胶。10. 7 N-亚硝胶标准使用液z在四个10mL容
10、量瓶中，加入适量二氯甲烧，用微量注射器各吸取100LN-亚硝胶标准溶液，分别置于上述四个容量瓶中，用二氯甲烧稀释至刻度.此溶液每毫升分别相当于5月N-亚硝胶。10.8 耐火砖颗粒s将耐火砖破碎，取直径为1-2mm的颗粒，分别用乙醇、二氯甲烧清洗后，在马弗炉中(40WC)灼烧1h.作助沸石使用。11 仪器11. 1 水蒸气蒸惰装置如图所示。573 GB/T 5009. 261996 -一一11. 2 K-D浓缩器。11. 3 气相色谱质谱联用仪。12 分析步骤12. 1 水蒸气蒸馆_.-一一-水蒸气蒸饱装置1 加热器，2-2000mL水蒸气发生楞，3-) 000 mL蒸恼瓶，4一冷凝糯-称取20
11、0g切碎(或绞碎、粉碎)后的样品，置于水蒸气蒸馈装置的蒸馆瓶中(液体样品直接量取200时-)，加入100mL水(液体样品不加水)，摇匀。在蒸馆瓶中加入120g氯化销，充分摇动，使氯化饷溶解。将蒸馆瓶与水蒸气发生器及冷凝器连接好，并在锥形接收瓶中加入40mL二氯甲统及少量冰块，收集400mL馆出液。12.2 萃取纯化在锥形接收瓶中加入80日氯化销和3mL的硫酸0+3)，搅拌使氯化销完全溶解。然后转移到500 mL分液漏斗中，振荡5mn，静止分层，将二氯甲烧层分至另一锥形瓶中，再用120mL王氯甲烧分三次提取水层，合并四次提取液，总体积为160mL. 对于含有较高浓度乙醇的样品，如蒸馆酒、配制酒等
12、，须用50mL氢氧化销溶液020g/Ll洗有机层两次，以除去乙醇的干扰。12.3 浓缩将有机层用10g无水硫酸销脱水后，转移至K-D浓缩器中，加入一粒耐火砖颗粒，于5OC水浴上浓缩至1mL。备用。12.4 气相色谱-质i普联用测定条件12.4.1 色谱条件12.4.1.1 汽化室温度:190C。12.4.1.2 色谱柱温度g对N亚硝基二甲胶、N-亚硝基二乙胶、N亚硝1基二丙胶、N-亚硝基毗咯烧分别为130C.145 C , 130C .160C。12.4.1.3 色谱柱:内径).83. 0 mm，长2m的玻璃柱，内装涂以15%(m/m)PEG20M固定液和氢;) 7.f GB/T 5009.2
13、6-1996 氧化饵溶液(10g/L)的80100日ChromosorbW AW-DMCS, 12.4. 1.4 载气:氮气，流速为40mL/min, 12.4.2 质谱仪条件12.4.2.1 分辨率?-7000，12. 4.2.2 离子化电压，70V。12.4.2.3 离子化电流，300A。12.4.2.4 离子源温度，180C，12.4.2.5 离子源真空度，1.33 X 1 O-Pa , 12.4.2.6 界面温度，180C。12. 4. 3 测定采用电子轰击源高分辨峰匹配法，用全氟煤油(PFK)的碎片离子(它们的质荷比为68.99527.99.9936，130.9920，99.9936
14、)分别监视N亚硝基工甲胶、N亚硝基二乙胶、N亚硝基二丙胶及N亚硝基毗咯烧的分子、离子(它们的质荷比为74.0480.102.0793.130.1106.100.0636).结合它们的保留时间来定性，以示波器上该分子、离子的峰高来定量。13 计算手XC2 X V3 X2=4 m2 X 1000 . ( 2 ) 式中gX2样品中某一N-亚硝胶化合物的含量，用/kg或阅/L，h3 浓缩液中该N亚硝胶化合物的峰高，mm;儿一标准使用液中该N亚硝胶化合物的峰高，mm;C2一一标准使用液中该N亚硝胶化合物的浓度，g/mL，V3 样品浓缩液的体积，mL;叫一样品质量(体积).以mL)。结果的表述:报告算术平均值的三位有效数。附加说明:本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准第一法由北京医科大学公共卫生学院、中国预防医学科学院蕾养与食品卫生研究所负责起草;第二法由吉林省卫生防疫站负责起草。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部食品卫生监督检验所负责解释。575
