1、ICS 67.040 C 53 GB 中华人民共和国国家标准GBjT 5009. 37-2003 代替G8/T5009.37-1996 食用植物油卫生标准的分析方法Method for analysis of hygienic standard of edible oils 2003-四-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生费发布中国国家标准化管理委员再GB/T 5009.37-2003 前言本标准代替GB/T5009. 37-1996食用植物油卫生标准的分析方法儿本标准与GB/T5009.371996相比主要修改如下2一一增加了过氧化值测定的比色法作为第二法，一按照GB/T20
2、001. 4-2001(标准编写规则第4部分2化学分析方法对原标准的结构进行了修改g二一对毅基价的测定方法进行了修改。本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口，本标准由上海市卫生防疫站、天津市卫生防疫站、安徽省卫生防疫站、陕西省卫生防疫站、辽宁省卫生防疫站、湖南省E生防疫站、卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准于1985年首次发布，于1996年第一次修订，本次为第二次修订。304 食用植物油卫生标准的分析方法1 范围本标准规定了食用植物汹卫生指标的分析方法。本标准适用于食用植物油卫生指标的分析。GB/T 5009.37-2003 本方法残留溶剂的检出限为0.10mg/kg.过氧化值第二法的检
3、出限为O.003 meq/kg, 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 5009. 11 食品中总碑及元机碑的测定GB/T 5009. 22 食品中黄曲霉毒素队的测定GB/T 5009. 27 食品中苯并(a)茂的测定GB/T 5009. 138 食品中镰的测定3 感冒检查3.1 色泽3. 1. 1 仪器烧杯2直径50mm，杯高100mm, 3. 1.
4、2 分析步骤将试样混匀并过滤于烧杯中，汹层高度不得小于5mm，在室温下先对着自然光观察，然后再置于白色背景前昔其反射光线观察并按下列词句描述:白色、灰白色、拧橡色、淡黄色、黄色、橙色、棕黄色、棕色、棕红色、棕褐色等。3.2 气味及滋睐将试样倒入150mL烧杯中，置于水浴上，加热至50C.以玻璃棒迅速搅拌。嗅其气味，并蘸取少许试样.辨尝其滋味，按正常、焦糊、酸败、苦辣等词句描述.4 理化检验4.1 磁价4. 1. 1 原理植物油中的游离脂肪酸用氢氧化饵标准溶液滴定，每克植物油消耗氮氧化御的毫克数，称为酸价。4. 1. 2 试剂4. 1. 2. 1 乙商量-乙醇混合液2按乙酷乙醇(2十1)混合。用
5、氢氧化御溶液(3g/L)中和至盼歌指示液呈中性。4. 1. 2. 2 氢氧化梆标准滴定溶液(c(KOH)=0.050 mol/口。4. 1. 2. 3 盼歌指示液:10 g/L乙醇溶液。4. 1. 3 分析步骤称取3.00 g5. 00 g混匀的试样，置于锥形瓶中，加入50mL中性乙隧-乙醇混合液，振摇使油溶解，必要时可置热水中，温热促其溶解。冷至室温，加入盼歌指示液2滴3漓，以氢氧化仰标准滴定溶305 GB/T 5009.37-2003 液(0.050 mol/U滴定，至初现微红色，且0.5min内不褪色为终点。4. 1. 4 结果计算试样的酸价按式(1)进行计算。式中:X二卫羊王三旦.11
6、m X 试样的酸价(以氢氧化饵计).单位为毫克每克(mg/g);V 试样消耗氮氧化饵标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL);正氮氧化锦标准滴定的实际浓度，单位为摩尔每升(mol/L); m 试样质量，单位为克(g); .( 1) 56. 11 与1.0 mL氢氧化御标准滴定溶液c(KOH)二1.000 mol/L相当的氢氧化饵毫克数。计算结果保留两位有效数字。4. 1. 5 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4.2 过氧化值4.2.1第一法滴定法4.2. 1. 1 原理油脂氧化过程中产生过氧化物，与腆化何作用，生成游离腆，以硫代硫酸纳溶液滴定，计算含
7、量。4. 2. 1. 2 试剂4.2. 1. 2. 1 饱和腆化锦溶液:称取14g腆化饵，加10mL水溶解，必要时微热使其溶解，冷却后贮于棕色瓶中。4.2. 1. 2. 2 三氯甲炕冰乙酸混合液2量取40mL三氯甲烧，加60mL冰乙酸，混匀。4.2. 1. 2. 3 硫代硫酸纳标准滴定溶液c(Na2S202)0.0020 mol/L。4.2. 1. 2. 4 淀粉指示剂(10g/L) :称取可溶性淀粉0.50日，加少许水，调成糊状，倒人50mL沸水中调匀，煮沸。i陷用时现配34.2. 1. 3 分析步骤称取2.00 g3. 00 g j昆匀(必要时过滤)的试样，置于250mL硕瓶中，加30mL
8、三氯甲烧-冰乙酸混合液，使试样完全熔解。加人1.00 mL饱和腆化饵溶液，紧密塞好瓶盖，并轻轻振摇0.5min，然后在暗处放置3min。取出加100mL水，摇匀，立即用硫代硫酸纳标准滴定溶液(0.002 0 mol/Ll滴定，至淡黄色时，加1mL淀粉指示液，继续滴定至蓝色消失为终点，取相同量三氯甲:皖-冰乙酸溶液、殃化饵溶液、水，按同一方法，做试剂空白试验。4. 2. 1. 4 计算结果试样的过氧化值按式(2)和式(3)进行计算。(V, - V ,) X c X O. 1269 X，二一-一一一一一一X100 . ( 2 ) m X, X , X 78. 8 (:i) 式中:X , 试样的过氧
9、化值，单位为克每百克(g/100g) ; 几试样的过氧化值，单位为毫克当量每千克(meq/kg); V , 一试样消挺硫代硫酸纳标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL);V2 试剂l空白消耗硫代硫酸纳标准滴定溶液体积，单位为毫升(mL);c 硫代硫酸纳标准滴定溶液的浓度，单位为摩尔每升(mol/L); m 试样质量，单位为克(g); 306 GB/T 5009.37-2003 。1269 与1.00mL硫代硫酸纳标准滴定溶液c(Na，S，O，)= 1. 000 mol/L相当的琪的质量，单位为克(g); 78.8 换算因子。计算结果保留两位有效数字。4.2. 1. 5 精密度在重复性条件下获得的两
10、次独主测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4.2.2第二法比色法4.2.2.1 原理试样用三氯甲烧-甲醇混合溶剂溶解，试样中的过氧化物将二价铁离子氧化成三价铁离子，三价铁离子与硫氨酸盐反应生成橙红色硫氨酸铁配合物，在波长500nm处测定吸光度，与标准系列比较定量。4.2.2.2试剂4.2.2.2.1 盐酸溶液(10mol/U ;准确量取83.3mL浓盐酸，加水稀释至100mL，混匀。4.2.2.2.2 过氧化氢(30%)。4.2.2.2.3 三氯甲烧+甲醇(7十3)混合溶剂z量取70mL三氯甲烧和30mL甲醇混合。4.2.2.2.4 氯化亚铁溶液(3.5g/U准确称取0.35g氯化亚
11、铁(FeClz 4H，)于100mL棕色容量瓶中，加水溶解后，加2mL盐酸溶液(10mol/U.用水稀释至刻度(该溶液在10C下冰箱内贮存可稳定1年以上九4.2.2.2.5 硫氨酸苦甲溶液(300g/U;称取30g硫氨酸饵，加水榕解至100mL(该落液在1OC下冰箱内贮存可稳定1年以上)。4.2.2.2.6 铁标准储备溶液(1.0g/U;称取O.100 0 g还原铁粉于100mL烧杯中，加10mL盐酸(1 0 mol/L)、0.5n汀_1mL过氧化氢(30%)溶解后，于电炉k煮沸5min以除去过量的过氧化氢。冷却至室温后移人100mL容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于1.0 m
12、g铁。4.2.2.2.7 铁标准使用溶液(0.01g/U;用移液管吸取1.0 mL铁标准储备溶液(1.0 mg/mU于100mL 容量瓶中，加三氯甲烧+甲醇(7+3)混合溶剂稀释至刻度，混匀，此溶液每毫升相当于10.0阳铁。4.2.2.3 仪器4.2.2.3.1 分光光度计。4.2.2.3.2 10 mL具塞玻璃比色管。4.2.2.4 分析步骤4.2.2.4.1 试样溶液的制备精密称取约O.01 g 1. 0 g试样(准确至刻度0.0001 g)于10mL容量瓶内.加三氯甲烧+甲蹲(7+3)混合溶剂溶解并稀释至刻度，混匀。分别精密吸取铁标准使用溶液00.0g/mUO，O.2 , 0. 5 ,1
13、. 0 , 2.0, 3.0, 4.0 mL(各自相当于铁浓度。，2.0，5.0.10.0.20.0，30.0.40.0g)于干燥的10mL比色管中，用兰氯甲烧+甲醇(7+3)混合溶剂稀释至刻度，混匀。加1滴(约0.05mL)硫氨酸饵溶液(300g/Ll.混匀。室温(10C35C)下准确放置5min后，移人1cm比色皿中，以兰氯甲烧+甲醇(7+3)混合溶剂为参比，于波长500nm处测定吸光度，以标准各点吸光度减去零管吸光度后绘制标准曲线或计算直线回归方程。4.2.2.4.2 试样测定精密吸取1.0 mL试样溶液于干燥的10mL比色管内，加I滴(约0.05mL)氯化亚铁(3.5g/L)溶液，用三
14、氯甲炕+甲醇(7十3)混合溶剂稀释至刻度，混匀。以F按4.Z. 2.4.1自加I滴约0.05mL) 硫氨酸梆榕液(300g/U起依法操作。试样吸光度减去零管吸光度后与曲线比较或代人回归方程求得含量。307 GB/T 5009.37-2003 4.2.2.5 结果计算试样中过氧化值的含量按式(4)进行计算。x = c- Co =二-mX有X5川4X2式中:X一一试样中过氧化值的含量，单位为毫克当量每千克(meq/kg); c 由标准曲线上查得试样中的铁的质量，单位为微克(g);c, 由标准曲线上查得零管铁的质量，单位为微克(g);V j 试样稀释总体积，单位为毫升(mL);V，一一测定时取样体积
15、，单位为毫升(mL);m 试样质量，单位为克(g);55. 84-Fe的原子量;2一一换算因子。4.2.2.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4.3 搬基价4.3.1 原理.( 4 ) 楼基化合物和2，4-二硝基苯脐的反应产物，在碱性溶液中形成褐红色或酒红色，在440nm下，测定吸光度，计算毅基价。4.3.2 试剂4.3.2.1 精制乙醇s取1000 mL无水乙醇，置于2000mL圆底烧瓶中，加入5g铝粉、10g氢氧化饵，接好标准磨口的回流冷凝管，水浴中加热回流1h，然后用全玻璃蒸馆装置，蒸馆收集馆液。4.3.2.2 精制苯取500mL苯，置于
16、1000mL分液漏斗中，加入50mL硫酸，小心振摇5min，开始振摇时注意放气。静置分层，弃除硫酸层，再加50mL硫酸重复处理一次，将苯层移入另一分液漏斗，用水洗涤三次，然后经无水硫酸饷脱水，用全玻璃蒸馆装置蒸馆收集馆液。4.3.2.32，4二硝基苯脐溶液g称取50mg2，4二硝基苯A排，溶于100mL精制苯中。4.3.2.4 三氯乙酸溶液:称取4.3g团体三氯乙酸，加100mL精制苯溶解。4.3.2.5 氢氧化饵乙醇溶液=称取4g氢氧化饵，加100mL精制乙醇使其溶解，置冷暗处过夜，取上部澄清液使用。溶液变黄褐色则应重新配制。4.3.3 仪器分光光度计。4.3.4 分析步骤精密称取约O.02
17、5 gO. 5 g试样，置于25mL容量瓶中，加苯溶解试样并稀释至刻度。吸取5.0 mL，置于25mL具塞试管中，加3mL三氯乙酸溶液及5mL2，中二硝基苯脐溶液，仔细振摇混匀，在60C水浴中加热30min，冷却后，沿试管壁慢慢加入10mL氢氧化饵乙醇溶液，使成为二液层，塞好，剧烈振摇混匀，放置10min。以1cm比色杯，用试剂空白调节零点，于波长440nm处测吸光度。4.3.5 结果计算试样的激基价按式(5)进行计算。式中:x ., A , X 1 000 854 X m X V 2 /Vj X一一试样的援基价，单位为毫克当量每千克(meq/kg); A 测定时祥液吸光度gm2一试样质量，单
18、位为克(g); 308 .( 5 ) GB/T 5009.37-2003 V1 试样稀释后的总体积，单位为毫升(mL)，V , 测定用试样稀释液的体积，单位为毫升(mL)，854 各种醒的毫克当量吸光系数的平均值。结果保留三位有效数字。4.3.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的5%。4.4 游离棉酣(本法适用于棉籽油)4.4.1 紫外分光光度法4.4. 1. 1 原理试样中游离棉盼经用丙酣提取后，在378nm有最大吸收.其吸收值与棉酣量在一定范围内成正比，与标准系列比较定量。4.4.1.2 仪器紫外分光光汁。4. 4. 1. 3试剂4. 4. 1. 3
19、. 1 丙酣(70%)，将350mL丙翻加水稀释至500mLo 4.4. 1. 3. 2 棉酣标准溶液z准确称取0.1000 g棉盼，置于100mL容量瓶中，加丙酣(70%)溶解并稀释至刻度。此溶液每毫升相当于1.0 mg棉盼。4.4.1.3.3 棉酣标准使用液:吸取棉盼标准溶液5.0mL.置于100mL容量瓶中，加丙嗣(70%)稀释至刻度。此溶液每毫升相当于50.0E棉盼。4. 4. 1. 4 分析步骤称取1.00 g精制棉袖或0.20g粗棉油，置于100mL具塞锥形瓶中，加入20.0mL丙酣(70%)，并加入玻璃珠3粒5粒，在电动振荡器上振荡30min，然后在冰箱中放置过夜。取此提取液之上
20、清液，过滤。滤液供测定用。吸取0、0.10、0.20、0.40、0.80、1.6.2.4mL棉盼标准使用液(相当于0.5、10、20、40、80、120吨棉盼儿分别置于10mL具塞试管中。各加入丙酣(70%)至10mL.混匀，静置10min。取试样滤液及标准液于1cm石英比色杯中，以丙酣(70%)调节零点于378nm波长处测吸光度，绘制标准曲线比较。4.4. 1. 5 结果计算试样中游离棉盼的含量按式(6)进行计算。X二m1._X100X2(6 ) m , X 1 000 X 1 000 式中2X一试样中游离棉盼的含量，单位为克每百克(g/100g) , m一一测定用样液中游离棉盼的质量，单位
21、为微克(!-g), m2 试样质量，单位为克(g)o计算结果保留三位有效数字。4.4. 1. 6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4.4.2 苯肢法4.4.2.1 原理试样中游离棉酣经提取后，在乙醇溶液中与苯胶形成黄色化合物，与标准系列比较定量。4.4.2.2试剂4.4.2.2.1 丙酣(70%打量取70mL丙酬，加水至100mL。4.4.2.2.2 乙醇(95%)。309 GB/T 5009.37-2003 4.4.2.2.3 苯胶z应为无色或淡黄，若色深则重蒸馆。4.4.2.2.4 棉盼标准溶液:同4.4. 1. 3. 2和4.4. 1. 3
22、. 3 0 4.4.2.3 分析步骤称取约1.00 g试样，置于150mL具塞锥形瓶中，加入20.0mL丙翻(70%)、玻璃珠3粒5粒，剧烈振摇1h，在冰箱中过夜，过滤，滤液备用。在两支25mL具塞比色管中，各加入2.0mL上述滤液，以甲管为试样管，乙管为对照管。另吸取。、0.10、0.20、0.40、0.80、1.00 mL棉盼标准使用液(相当0、5.0、10.0、20.0、40.0、50.0用棉自由)各两份，分别置于甲、乙两组25mL具塞比色管中，各管均加入丙嗣(70%)至2mL，甲组标准管与试样管甲管各加入3rnL苯胶，在80C7j(浴中加热15min，取出冷至室温，各加入乙醇至25mL
23、，乙组标准管与试样管乙管各加乙醇至25rnL，两组溶液在加乙醇后均放置15min，以甲组标准的零管为试剂空白，以乙组的零管为溶剂空白.用1cm比色杯，以各组标准零管调节零点，在波长445nm处，测定两组的吸光度，以两组对应的吸光度之差，以及相应标准浓度绘制标准曲线，以试样管甲管与乙管的吸光度之差从标准曲线查出棉盼含量。4.4.2.4 结果计算试样中游离棉酣的含量按式(7)进行计算。X二ml. X 100 ( 7 ) m2 X 1 000 X 1 000 X 2/20 式中2X 试样中游离棉盼的含量，单位为克每百克(g/lOOg) , m 测定用样液中游离棉盼的质量，单位为微克(g), 叫一一试
24、样质量，单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。4.4.2.5 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10%。4.5碑按GB/T5009. 11操作。4.6 黄曲霉毒素B1按GB/T5009. 22操作。4.7 苯并(a)花按GB/T5009.27操作。4.8 残留溶剂4.8.1 原理将植物油试样放入密封的平衡瓶中，在一定温度下，使残留溶剂气化达到平衡时，取液上气体注入气相色谱中测定，与标准曲线比较定量。4.8.2 试剂4.8.2. 1 N-N.二甲基乙眈胶(简称DMA)，吸取1.0 mL放入100mL 150 mL顶空瓶中，在500C放置。.5h，取液上气
25、0.10mL注入气相色谱仪在omin-4 min内无干扰即可使用。如有干扰可用超声波处理30min或通人氮气用曝气法蒸去干扰。4.8.2.2 六号溶剂标准溶液:称取洗净干燥的具塞20mL25 mL气化瓶的质量为叫，瓶中放入比气化瓶体积少1mL的DMA密塞后称量为酌，用1mL的注射器取约0.5mL六号溶剂标准溶液通过寒注入瓶中(不要与溶液接触)，混匀，准确称量为m，.用式(8)计算六号溶剂泊的浓度:X3-m2 _ _ X 1 000 (2 - ml )/0.935 .( 8 ) 310 GB/T 5009.37一2003式中2X 六号溶剂的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)，m , 瓶和塞的质
26、量，单位为克(g), m, 瓶、塞和DMA的质量，单位为克(g), m,-m2加六号溶剂的质量，单位为克(g)，。.935为DMA在20C时密度，单位为克每毫升(g/mL)。4.8.3 仪器4.8.3.1 气化瓶(IYi空瓶)，体积为100mL150 mL具塞。气密性试验2把1mL己烧放入瓶中，密塞后放入60C热水中30min(密封处无气泡外漏)。4.8.3.2 气相色谱仪:带氢火焰离子化检测器。4.8.4 分析步骤4.8.4.1 气相色谱参考条件4. 8. 4. 1. 1 色谱柱2不锈钢柱，内径3mm，长3rn.内装涂有5%DEGS的白色担体102(6080)目。4. 8. 4. 1. 2
27、检测器:氢火焰离子化检测器。4.8.4.1.3 柱温，60C，4.8.4. 1. 4 汽化室温度，140C，4.8.4. 1. 5 载气(N2),30 mL/rnin, 4. 8. 4. 1. 6 氢气，50rnL/min , 4.8.4.1.7 空气，500mL/min, 4.8.4.2 测定称取25.00g的食用油样，密塞后于50C恒温箱中加热30min，取出后立即用微量注射器或注射器吸取O.10 mLO. 15 mL液上气体(与标准曲线进样体积-致)注入气相色谱，记录单组分或多组分(用归一化法)测量峰高或峰面积，与标准曲线比较，求出液上气体六号熔剂的含量。1 铝盖$2 橡胶塞，3 输液瓶
28、$4 试样。图1气化装置4.8.4.3 标准曲线的绘制取预先在气相色谱仪上测试管六号溶剂量较低的油为曲线制备的体底油(或经70C开放式赶掉大部分残留溶剂的食用油或压榨油)，分别称取25.00g放入6支气化瓶中，密塞。通过塞子注入六号熔剂标准液(4.8.2.2)0、20、40、60、80、100L(含量分别为0，O. 02X X ,0.10XX fig，其中X为六GB/T 5009.37-2003 号溶剂的浓度)。放入50C烘箱中，平衡30min，分别取液上气体注入色谱，各响应值扣除空白值后，绘制标准曲线(多个色谱峰用归一化法计算)。4.8.5 结果计算油样中六号溶剂的含量按式(9)进行计算。式
29、中zX-mIX1000 一一m2 X 1000 X一一汹样中六号溶剂的含量，单位为毫克每千克(mg/kg); m，一一测定气化瓶中六号溶剂的质量，单位为微克(J-lg); m2-一试祥质量，单位为克(g)。计算结果保留三位有效数字。4.8.6 精密度在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的15%。4.9 镰(适用于人造奶油)按GB/T5009. 138操作。4.10 油中非食用泊的鉴别对常见的三类非食用油进行定性鉴别。4.10.1 桐油( 9 ) 4. 10. 1. 1 三氯化镑三氯甲炕界面法s取油样1mL移入试管中，沿试管壁加1mL三氯化锦-三氯甲烧溶液(10g/L
30、)，使试管内溶液分成两层，然后在水浴中加热约10mno如有桐油存在.则溶液两层分界面上出现紫红色至深咖啡色环。4.10.1.2 亚硝酸法适用于豆泊、棉油等深色油中桐汹的检出.但不适用于梓泊或芝麻泊中桐汹的检出。取试祥5滴10滴于试管中，加2mL石油戳，使泊溶解，有沉淀物时，过滤一次，然后加入结晶亚硝酸销少许，并加入1mL硫酸。十1)摇匀，静置，如有榈汹存在，泊液混浊，并有絮状沉淀物，开始呈臼色，放置后变黄色。4.10. 1. 3 硫酸法.取试样数滴，置白瓷板之上，加硫酸1滴2滴，如有桐汹存在，则出现深红色并且凝成团体，颜色渐加深，最后成炭黑色。4.10.2 矿物油取1mL试样，置于锥形瓶中，加
31、入1mL氢氧化饵榕液(600g/L)及25mL乙酶，接空气冷凝管回流皂化约5min，皂化时应振摇使加热均匀。皂化后加25mL沸水，摇匀，如浑浊或有油状物析出，表示有不能皂化的矿物油存在。4.10.3 大麻油取试样和对照大麻油各10L，点样于硅胶G薄层板，此薄层板厚O.25 mmO. 3mm，105C下活化30min.泊太粘稠则用5倍苯稀释，再进行点样，点样量稍多一点约10L20L。展开剂用苯，显色剂为牢固蓝盐B溶液(1.5g/L) (临用配制)。当斑点和对照颜色及比移值相当时表示有大麻泊。胡麻油、芝麻油和牢固蓝盐B也呈红色，但在薄层板上比移值较小。4.11 黄曲霉霉素GB/T 5009. 22操作。312
