1、ICS 6714010X 04 a亘中华人民共和国国家标准GBT 83132008代替GBT 8313-2002茶叶中茶多酚和儿茶素类含量的检测方法Determination of total polyphenols and catechins content in tea(IS0 1450212：2005，Determination of substances characteristic ofgreen and black teaPart 1：Content of total polyphenols in teaColorimetric method using Folin-Ciocalt
2、eu reagentPart 2：Content of catechins in green tea-Method using highperformanceliquid chromatography，MOD)2008-05-04发布 2008-10-01实施宰瞀鹃鬻瓣訾雠赞星发布中国国家标准化管理委员会仪1”刖 昌GBT 83132008本标准修改采用ISO 145021：2005福林酚(FolinCiocalteu)试剂比色法测定茶叶中茶多酚总量和Is0 14502 2：2005高效液相色谱法测定绿茶中儿茶素。本标准与IsO 145021：2005和ISO 145022：2005的技术内容
3、相同，主要差异为：供试液制备时用玻璃棒充分搅拌均匀湿润代替用混匀器搅拌均匀湿润，增加实用性；标准结构上稍有调整，即将两项标准合并为一项，将ISO 145022：2005作为本标准的方法一，将ISO 14502 1：2005作为本标准的方法二。本标准是对GBT 8313 2002茶茶多酚测定的修订。本标准与GBT 8313 2002的主要差异为：以70甲醇提取茶叶中的茶多酚、Folin-Ciocalteu Phenol试剂显色、没食子酸(GA)作标准工作曲线定量茶多酚总量。本标准由中华全国供销合作总社提出并归口。本标准起草单位：中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院。本标准主要起草人：周卫龙、徐建峰
4、、许凌。本标准所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 8313 1987、GBT 8313 2002。茶叶中茶多酚$RJL茶素类含量的检测方法GBT 831320081范围本标准规定了用高效液相色谱法(HPLC)测定茶叶中儿茶素类含量和用分光光度法测定茶叶中茶多酚含量的方法。本标准适用于茶及茶制品中儿茶素类及茶多酚含量的测定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。G
5、BT 8302茶取样GBT 8303茶磨碎试样的制备及其干物质含量测定方法一茶叶中儿茶素类的检测HPLc法3原理茶叶磨碎试样中的儿茶素类用70的甲醇溶液在70C水浴上提取，儿茶素类的测定用c。柱、检测波长278 rim、梯度洗脱、HPLC分析，用儿茶素类标准物质外标法直接定量，也可用儿茶素类与咖啡碱的相对校正因子RRFs一(ISO国际环试结果)(见72)来定量。4仪器41分析天平：感量0000 1 g。42水浴：701。43离心机：转速3 500 rmin。44混匀器。45高效液相色谱仪(HPLc)：包含梯度洗脱及检测器(检测波长278 nm)。46数据处理系统。47液相色谱柱：C18(粒径5
6、 pm，250 ram46 mm)。5试剂本标准所用水均为重蒸馏水，除特殊规定外，所用试剂为分析纯。51乙腈：色谱纯。52甲醇。53乙酸。54甲醇水溶液(体积比)：7+3。55乙二胺四乙酸(EDTA)溶液：10 mgmL(现配)。56抗坏血酸溶液：10 mgmL(现配)。1GBT 8313200857稳定溶液：分别将25mL EDTA溶液(55)、25 mL抗坏血酸溶液(56)、50 mL乙腈(51)加入500 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。58液相色谱流动相581流动相A：分别将90mL乙腈(5”、20mL乙酸(53)、2mLEDTA(55)加入1 000mL容量瓶中，用水定容至刻度，
7、摇匀。溶液需过045 pm膜。582流动相B：分别将800 mL乙腈(51)、20 mL乙酸(53)、2 mL EDTA(55)加入1 000 mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀。溶液需过045$zm膜。59标准储备溶液591咖啡碱储备溶液：200 mgmL。592没食子酸(GA)储备溶液：0100 mgmL。593儿茶素类储备溶液：十C 100 mgmL，+EC 100 mgmL，+EGC 200 mgmL，+EGCG200 mgmL，+ECG 200 mgmL。510标准工作溶液：用稳定溶液(57)配制。标准工作溶液的浓度：没食子酸5,ugmL25 bLgmL、咖啡碱50 ttgmL150
8、,ugmL、+C50 p-gmL150xgmL、+EC 50 p-gmL 150 p-gmL、+EGC 100 bgmL 300zgmL、+EGCG100,ugmL400 pgmL、+ECG 50 pgmL200 tlgmL。6操作方法61取样按GBT 8302的规定。62试样制备按GBT 8303的规定。63测定步骤631干物质含量测定按GBT 8303的规定。632供试液的制备6321母液：称取02 g(精确到0000 1 g)均匀磨碎的试样(62)于10 mL离心管中，加入在70C中预热过的70甲醇溶液(54)5 mL，用玻璃棒充分搅拌均匀湿润，立即移入70*(2水浴中，浸提10 min
9、(隔5rain搅拌一次)，浸提后冷却至室温，转入离心机在3 500 rrain转速下离心10rain，将上清液转移至10 mL容量瓶。残渣再用5 mL的70甲醇溶液提取一次，重复以上操作。合并提取液定容至10 mL，摇匀，过045 btm膜，待用(该提取液在4下可至多保存24 h)。6322测试液：用移液管移取母液(6321)2 mL至10 mL容量瓶中，用稳定溶液(57)定容至刻度，摇匀，过045 hem膜，待测。633色谱条件流动相流速：1 mLmin。柱温：35。紫外检测器：A一278 nm。梯度条件： 100A相保持10 rain15 rain内由100A相一68A相、32B相+68A
10、相、32B相保持10 rain+100A相GBT 83132008634测定待流速和柱温稳定后，进行空白运行。准确吸取10 pL混合标准系列工作液注射人HPLC。在相同的色谱条件下注射10 pL测试液。测试液以峰面积定量。7结果计算71计算方法711 以儿茶素类标准物质定量，按式(1)计算： 儿茶素含量()一令芸表裂1。(1)式中：A所测样品中被测成分的峰面积；，s。所测成分的校正因子(浓度峰面积，浓度单位“btgmL”)；V样品提取液的体积，单位为毫升(mL)；d稀释因子(通常为2 mL稀释成10 mL，则其稀释因子为5)；m。样品称取量，单位为克(g)；m样品的干物质含量，。712以咖啡碱
11、标准物质定量，按式(2)计算： 儿茶素含量()一叁至妻等3觥-oo(z)o“，1，式中：RRFs。所测成分相对于咖啡碱的校正因子；s。咖啡碱标准曲线的斜率(峰面积浓度，浓度单位“PgmL”)。72儿茶素类相对咖啡碱的校正因子表见表1。表1 儿茶素类相对咖啡碱的校正因子表名称 GA +EGC +C +EC +EGCG +ECGRRFa o84 1124 358 367 172 14273儿茶素类总量计算公式见式(3)。儿茶素类总量()一EGC含量+c含量+EC含量+EGCG含量+ECG含量(3)74重复性同一样品儿茶素类总量的两次测定值相对误差应10，若测定值相对误差在此范围，则取两次测得值的算
12、术平均值为结果，保留小数点后两位。方法二茶叶中茶多酚的检测8原理茶叶磨碎样中的茶多酚用70的甲醇在70水浴上提取，福林酚(Folin-Ciocaheu)试剂氧化茶多酚中 OH基团并显蓝色，最大吸收波长为765 nm，用没食子酸作校正标准定量茶多酚。9仪器91分析天平：感量0001 g。92水浴：701。3GBT 8313200893离心机：转速3 500 rrain。94分光光度计。10试剂本标准所用水均为重蒸馏水，除特殊规定外，所用试剂为分析纯。101乙腈：色谱纯。102甲醇。103碳酸钠(Na2C03)。104甲醇水溶液(体积比)：7+3。105福林酚(Folin-Ciocalteu)试剂
13、。106 10福林酚(FolinCiocalteu)试剂(现配)：将20 mL福林酚(FolinCiocalteu)试剂(105)转移到200 mL容量瓶中，用水定容并摇匀。107 75Na：CO。(质量浓度)：称取3750 g001 g Na2CO。(103)，加适量水溶解，转移至500 mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀(室温下可保存1个月)。108没食子酸标准储备溶液(1 000lgmL)：称取0110 g土0001 g没食子酸(GA，相对分子质量18814)，于100 mL容量瓶中溶解并定容至刻度，摇匀(现配)。109没食子酸工作液：用移液管分别移取10，20，30，40，50 mL的没食
14、子酸标准储备溶液(108)于lOOmL容量瓶中，分别用水定容至刻度，摇匀，浓度分别为lo，20，30，40，50 btgmL。11操作方法111供试液的制备1111母液：按6321制备。1112测试液：移取母液(1111)10mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，待测。112测定1121用移液管分别移取没食子酸工作液(109)、水(作空白对照用)及测试液(1112)各10 mL于刻度试管内，在每个试管内分别加入50 mL的福林酚(FoliwCiocaheu)试剂(106)，摇匀。反应3 min8min内，加入40mL 75Na：CO。溶液(107)，加水定容至刻度、摇匀。室温下放置6
15、0min。用10 mm比色皿、在765 nm波长条件下用分光光度计测定吸光度(A)。1122根据没食子酸工作液(109)的吸光度(A)与各工作溶液的没食子酸浓度，制作标准曲线。12结果计算121 比较试样和标准工作液的吸光度，按式(4)计算：茶多酚含量()一面z庐EAi叉磊VX1d矿丽100 (4)式中：A样品测试液吸光度，v样品提取液体积，10 mL；d稀释因子(通常为1 mL稀释成100 mL，则其稀释因子为100)；SLOPEsn没食子酸标准曲线的斜率；m样品干物质含量，；m。样品质量，单位为克(g)。122重复性同一样品的两次测定值，每100 g试样不得超过05 g，若测定值相对误差在此范围，则取两次测定GBT 83132008值的算术平均值为结果，保留小数点后一位。13注意事项样品吸光度应在没食子酸标准工作曲线的校准范围内，若样品吸光度高于50,ugmL浓度的没食子酸标准工作溶液的吸光度，则应重新配制高浓度没食子酸标准工作液进行校准。5
