1、中华人民共和国城镇建设行业标准生活垃圾渗沥水细菌总数的检测。平板菌落计数法leachate-Detecton of total bacterial number-plate count for bacterial colonies CJ/T 3018. 14-93 1 主题内容与适用范围本标准规定了用平板菌落计数法测定渗沥水的细菌总数。本标准适用于从生活垃圾中渗出来的液体。2 引用棒准GB 5750生活饮用水标准检验法细菌总数GB 4789.2食品卫生微生物学检验菌数总数测定3 术语细菌总数是指lmL渗沥水试样在一定条件下培养后所生长的细菌菌落的总数。4 原理每种细菌都有其一定的生理特性，应用
2、不同的营养物质及其它生理条件（如温度、培养时间、pH、需氧性质等）去满足宫，才能分别地将各种细菌培养出来。在实际工作中，一般都只用一种方法（即在营养琼脂培养基中，于37已经24h培养）进行细菌总数的测定，因此，所得结果只包括一群能在营养琼脂上发育的嘻中温性需氧及兼性厌氧的细菌菌落总数。5 培挥基和试剂本标准所用试剂，除另有说明外，均为符合国家标准或行业标准的化学纯试剂和生化试剂，均为蒸惰水或去离子水。5. 1 元水乙醇（C2HsOH）。5.2 氢氧化铀（NaOH), 15o/o (m/m）溶液中华人民共和国建设部1993-05-03批准1993-09-01实施50 CJ/T 3018. 14-
3、93 将15g氢氧化铀（NaOH），榕于lOOmL水中。5.3 营养琼脂5 .3.1 戚份s蛋白陈牛肉膏氯化铀琼脂蒸锢水5.3.2 制法lOg 3g 5g 10 20g lOOOmL 将上述成份混合后，加热溶解，滴加氢氧化铀溶液（5.2）调整pH为7.47.6，用漏斗分装约15mL干玻璃试管（6.8），在121高压灭菌20min。冷却后贮存在冷暗干燥处备用。5.4 生理盐火将8.509.50g氯化铀（NaCl）溶于水中，稀蒋成lOOOmL，摇匀。pH值应为4.57.0。6 仪器、设备6. 1 高压蒸汽灭菌器。6.2 干燥箱s最高工作温度300。6.3 恒温培养箱：361C。6.4 冰箱。6.5
4、 恒温水浴：46士1Co6.6 放大镜。6.7 稀释瓶z25mL小口玻璃方瓶。6.8 玻璃试管s18180mm，平口。6.9 平皿g直径90mm。6. 10 刻度吸管：lmL, lOmL，分度至O.lmL. 6 .11 酒精灯。7 样晶供细菌总数检测的渗溺水实验室样品量约需lOOmL，用经灭菌处理过的玻璃瓶采集。采样后应尽快检测，在2h内不能处理时，应置于温度为25处，最长保存时间为仙。8 步骤8. 1 准备工作8. 1. 1 工作室及操作台经清扫后，用紫外线灭菌lOmina8 .1. 2 破璃器皿置于干燥箱中于160灭菌2h。8. 1.3 将装有90mL生理盐水的稀释瓶和9mL生理盐水的试管
5、，前者瓶口橡皮塞衬上滤纸Sl CJ/T 3018. 14-93 条，后者管口塞上棉花球，置高压蒸汽灭菌器（6.1）内，于121灭菌20min，冷却待用。8.1.4 将营养琼脂培养基（5.3.2）置于沸水锅内，融化后随即转入461恒温水浴，保温待用。s.2试样稀释8. 2. 1 以无菌操作，吸取经充分混匀的试样lOmL于盛有90mL灭菌生理盐水的稀释瓶(8.1.3）中，充分混匀后就成1I lQ的稀释掖。8.2.2 吸取1: 10稀释液lmL，沿管壁徐徐注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管（8.1.3）中，混匀而成1: 100的稀释液。8.2.3 按上述操作进行10倍递增稀释，每递增稀释1次，随即换用
6、1支1mL灭菌刻度吸管。8.3 倾注平皿8.3.1 根据试样污染程度大小，选择合适的三个连续释度试样进行倾注平皿。在分别作10倍递增稀释的同时，随即用该稀释度的吸管移取lmL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度的试梓液用2个平皿。8.3.2 将保温在46水浴锅内的营养琼脂培养基倾注于平皿内，并立即转动或倾斜平皿，使稀释液与培养基充分混合。同时，将营养琼脂培养基倾入加有1mL空白灭菌生理盐水的另外2个灭菌平皿作空白对照。8.4 平板培养待琼脂凝固后，翻转平板，使底面向上，置于36士1恒温培养箱内培养24士2h。8.5 菌落计数8.5. 1 培养后，应立即计数每个平板上的菌落数。如果遇上不能立即计数，应
7、将平皿存放于510，但不得超过24h。8.5.2 作平板菌落计数时，用肉眼观察计数，必要时用放大镜检查，以防遗漏。按30300个菌落计数规则计算平板的菌落数。8.6 菌落计数规则8.6. 1 首先选择平均菌落数在30300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之（见表1中例8.6.2 若有2个稀释度，其平均菌落数均在30300之间，则视两者之比来决定。若其比值小于2，应报告其平均数F若大于2，则报告其中较小的菌落总数（见表1中例2或例3 ）。8.6.3 若所有稀辞度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀择倍数报告之（见表1中例4）。8.6.4 若所有稀释度的平均菌落数均小于30，
8、则应按稀释度最低的平均国落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例5）。8.6.5 若所有稀释度的平均菌落数均不在30300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中例6）。52 CJ/T 3018. 14-93 8.6.6 蔓延生长菌落在求个稀释度的平均菌落数时，若其中个平板有较大片状蔓延菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布兀很均匀，则可计数半个平板后乘2以代表全皿菌落数，然后再求该稀释度的平均菌落数。9 报告方式根据菌落计数，凡菌落数在100以内时，按其实际计数表示，大于100时，取二位有效数字，也可用10的指数形式表示，并以每毫升样品中平板菌落个数报告。10 本标准来作规定的搜GB5750和GB4789.2执行。表1稀择度选择及平板菌落数报告方式一叫Lr叫一切叫一制1丁37二伊j次报告方式5 27 11 270 270 或2.7 10 多到无法计数6 306 12 30600 31000 或3.110附加说明z本标准由建设部标准定额研究所提出。本标准由建设部城镇环境卫生技术标准归口单位上海市环境卫生管理局归口。本标准由上海市环境卫生设计科研所负责起草。本标准主要起草人庄启化、章莉娜。本标准委托上海市环境卫生设计科研所负责解择58
