1、中华人民共和国城镇建设行业标准城市污水五日生化需氧量的测定稀释与接种法Munic1pal sewage-Determination of biochemical oxygen demand after 5 days (BOD,) -Dilution and seeding method 1 主题内容与适用范圄本标准规定了用稀释与接种法测定城市污水中五日生化需氧量。CJ/T 54一1999本标准适用于排入城市下水道污水和污水处理厂污水中五日生化需氧量的测定。1. 1 测定范围本方法适用于测定BOD，大于或等于2mg/L的样品，大于6000 mg/L会造成较大误差，有必要对测定结果加以说明。1.
2、2 于扰水中某些有毒物质的干扰，如杀菌剂、重金属、游离氯等，会抑制生化作用。藻类或硝化微生物可能造成结果偏离。2 方法原理五日生化需氧量的测定采用稀释法，即取原样品或经适当稀释的样品，要含有足够的溶解氧，能满足五日生化的需氧要求。将上述样品分成两份，一份测定当天的溶解氧含量，将另一份放入20培养箱内，培养五天以后再测其溶解氧含量，两者之差即为五日生化需氧量。如经稀释培养则应乘以稀释倍数。3试剂和材料均用分析纯试剂和蒸馆水或去离子水，水中含铜不应高于o.01 mg/L. 3, 1 接种水? 如样品本身不含有足够的合适的微生物，应采用下述方法之一，以获得种子。3. 1. 1 将生活污水保持20放置
3、2436h，取用上层清液。3, 1.2 污水生化处理后未经消毒的出水。3. 1. 3 当分析样晶为工业废水时，应取排放日下游的水作种液或经实验室培养驯化后的种液，其驯化方法是采用适量的生活污水，开始加入少量的待测废水，连续曝气培养逐渐增加待测废水投加量，直至驯化液中含有可分解废水中有机物的微生物种群为止。驯化周期一般为10d左右。3.2 盐溶液下述溶液应贮存在玻璃瓶内，置于暗处，至少可稳定一个月。一旦发现有生物滋长现象，应弃去不用。3.2. 1 磷酸盐缓冲溶液将8.5 g磷酸二氢梆（KH,PO,J、21.75 g磷酸氢二铮（K,HPO,J、33.4 g磷酸氢二锅（Na,HPO, 中华人民共和国
4、建设部1999。6-04批准1999-06-04实施138 CJ/T 54-1999 7H,0）和1.7 g氯化镀（NH,Cl）榕于500mL水中，稀释至1000 mL，混匀。此缓冲溶液的pH值为7,2。3.2.2 硫酸镶溶液：22.5 g/L 将22.5 g硫酸筷（MgSO, 7H,0）溶于水中，稀释到1000 mL并混匀。3.2. 3 氯化钙溶液，21.5 g/L 将27.5 g无水氯化钙（CaCl，）溶于水中，稀释到1000 mL并混匀。3. 2.4 三氯化铁溶液，o.25 g/L 将o.25 g三氯化铁（FeCl, 6H20）榕于水中，稀释到1000 mL并混匀。3.3 稀释水将水于2
5、0恒温下，曝气1h以上，静置24h或自然充氧34d，确保溶解氧浓度不低于8mg/L。每1000 mL水中加入盐溶液（3.2.1、3.2.2、3.2. 3、3.2. 4）各1mL，作为微生物的营养剂，此溶液即为稀释水。它的五日生化需氧量不得超过O.2 mg/L，每次使用前需新鲜配制。3. 4 接种的稀释水每升稀释水（3.3）中加2.0 5. o mL接种水（3.1），接种水应在使用时加入稀释水中，用时现配。接种的稀释水五日生化需氧量一般控制在0.6 1. o mg/L之间。3, 5 盐酸溶液：c(HCl)=O.5 mol/L 取42mL盐酸HCl）用水稀释成1000 mL。36氢氧化纳溶液：20
6、g/L 称取20g氮氧化纳（NaOH）榕于1000 mL水中。3, 7 硫化硫酸锅溶液：c(Na2S202)=0.012 5 mol/L 配制及标定方法参照附录A中A3.5, 3.a 葡萄糖谷氨酸标准溶液将无水葡萄糖（C,H120，）和谷氨酸（HOOCCH，一CH,CHNH2一COOH）在104干燥1h，每种称量150土1mg，溶于水中，稀释至1000 mL，混匀。此溶液于周前配制。4 仪榻4. 1 生化需氧量瓶或250mL具塞细口瓶。4.2 20士l恒温培养箱。使用的玻璃糯皿要洗干净，并防止1占污。5样晶样品需装满并密封于瓶中，放在24下保存，一般采样后6h之内应进行测定，贮存时间不得超过2
7、4h. 6 分析步骤6. 1 样品预处理6. 1. 1 pH值的控制如样品中含有游离酸或碱，将会影响微生物活动，应用盐酸溶液（3.5）或氢氧化销溶液（3.6）调节到pH值7，。8.0之间。61.2 去除游离氯或其他氧化剂加人硫代硫酸销溶液（3.7）使样品中的游离氯或其他氧化剂失效。具体方法是g取100ml，污水于碗量瓶中，加入5n1L（l/2H2S0,)=6 mol/L的硫酸，再加入lg硕化饵，摇匀，放暗处静置5min，此时碗被游离，以淀粉作指示剂，用标准硫代硫酸锅溶液滴定，计算所需硫代硫酸纳溶液的量，根据稀释培养用的实际污水量，计算井加入硫代硫酸锅榕液的量。139 CJ/T 54 1999
8、6. 1. 3 抑制硝化作用经生物处理净化后的污水，或类似生物净化水等，可在加营养剂及缓冲湾液的同时每升稀释水中加入10mg2氯6（三氯甲基）毗晓或者每升稀释水中加入10mg丙烯基硫廊且在报告结果时加以说明。6.2 选择稀释倍数若样品含溶解氧在6mg/L以上，则无需稀靡，可直接测定五天前后的溶解氧，而受市染的地面水、污水或工业废水则应根据其污染程度进行不同倍数的稀释，一般应使经过稀释的样品保持在2oc下，培养五天后，剩余溶解氧至少有1mg/L和消糙的溶解氧至少2mg/L, 稀释倍数也可参照化学需氧量（COD）来折算一般是将污水的COD值除以515，作3个稀释倍数。当难于确定恰当的稀释比时，可先
9、测定水样的总有机碳（TOC）和重错酸盐法化学需氧量（COD),根据TOC和COD估计BOD，可能值，再围绕预期的BOD，值，作几种不同的稀释比最后从所得测定结果中选取合乎要求条件者。6. 3稀释样品生活污水可用稀释水稀释，工业废水则需用接种的稀稀水来稀释。根据已决定的稀释倍数，正确计算并量取所需的污水量及稀释水量（或接种的稀释水量进行稀释。把经过稀释的样品沿瓶壁缓缓倾入两个编号的生化需氧量瓶内，直至满溢为止。轻轻敲击瓶颈使气泡完全逸出，盖紧瓶塞。再用稀释水灌满瓶口凹处，达到水封。如稀释倍数大于50，先用蒸饱水将原水样稀释10、100或1000倍，再按上述步骤操作。若无生化需氧量瓶，也可用250
10、mL细口瓶代替，在培养五天的过程中，应将盛有样品的瓶倒置于水中，水面应保持淹没瓶口，保证水封的可靠性按照同法，可分别做3个不同的稀，事倍数。6. 4 空白试验另取两个编号的生化需氧量瓶，倒入稀释水（或接种的稀释水盖紧瓶塞后，一瓶水封，一瓶用于测定当天溶解氧。6.5 测定将上述各稀释倍数的样品包括空白一份测定当天溶解氧值，另一份放在20土1培养箱内，培养五天后再测定其相应的溶解氧值。测定溶解氧的方法均用硕量法（参照附录A）。fi. 6 为了检验测定正确性，需进行验证试验，将20mL葡萄糖谷氨酸标准癖液（3.的用接种稀稀水(3.4）稀释至1000 mL，并按照（6. 5）步骤进行测定，所得BOD，
11、值应为200土37mg/L，本试验同测试样品同时进行。7分析结果的褒述7, 1 被测定溶液若满足以下条件，则能获得可靠的结果。培养五天后z剩余DO注lmg/L 消耗DO二三2mg/L 若不能满足以上条件，一般应舍去该结果。7.2 五日生化需氧量BOD,(mg/L）由下式计算g(C1 -C f1(C, - C,) BOD . =- f, 式中zC广一稀释后的样品在培养前的溶解氧，m咀L;c，一稀释后的样品在培养5天后的溶解氧，mg1L1c，一一稀释水在培养前的榕解氧，mg/L;C，一一稀释水在培养5天后的溶解氧，mg/L;f, 稀释水（或接种稀释水）在培养液中所占比例，140 CJ/T 54 1
12、999 f，一一样品在培养液中所占比例。若样品有几种稀释比所得结果都符合（7.1）所要求的条件，则这些结果皆有效，以平均值表示测定结果。8 精密度测定300mg/L葡萄糖谷氨酸BOD，为199.4 mg/L）混合标准溶液32次，实验室内相对误差3%，相对标准偏差为.8%. 141 A1 方法原理CJ/T 54 1999 附录A锁量法测定藩解氧（补充件样品在碱性条件下，加入硫酸链，产生的氢氧化锺被样品中的溶解氧氧化，产生锺酸锺，在酸性条件下，锺酸锺氧化腆化饵析出砚，析出确的量相当于样品中溶解氧的量，最后用标准硫代硫酸纳溶液滴定。A2仪锦AZ. 1 溶解氧瓶（同生化需氧量瓶）。A2 2 250 m
13、L三角烧瓶。A2 3 50 mL滴定管A3试剂和材料均用分析纯试剂和蒸馆水或去离子水A3. 1 浓硫酸（H,SO,),p=l.84 g/mL. A3. 2 硫酸锺溶液称取360g硫酸锺（MnSO, H,0）溶于水中，稀释f!J1 000 mL，过滤备用。A3. 3 碱性模化饵溶液称取500g氮氧化销及150g碗化仰溶于水中，稀释到1000 mL，静止24h使所含杂质下沉，过滤备用。A34 重铸酸愣标准溶液：c(l/6K,Cr,0,)=0.012 5 mol/L 将分析纯重错酸仰放在180烘箱内，干燥2h，取出，置于干燥器内冷却。称取o.612 9土0.000 6日重错酸饵榕于水中，倾人1000
14、 mL容量瓶，稀释到标线。A3. 5 硫代硫酸锦标准溶液：c(Na,S,03)=O. 012 5 mol/L 称取分析纯硫代硫酸销（Na,S,O, 5H,0）约32g溶于煮沸并冷却的水中，稀释液100mL稀释到1 000 mL，然后按下法标定。在具寨的三角烧瓶中加入lg破化仰及50mL水，用移液管加入20mL重错酸饵标准溶液（A3.4) 及5mL、c(l/2H,S0,)=6mol/L的硫酸静置5min后，用硫代硫酸销溶液滴定至淡黄色，加lmL淀粉帮液，继续滴定至蓝色刚退去为止，记录用量，根据公式（c1V1=c,V，）计算硫代硫酸钩的浓度，并校正为O. 012 5 mol/L. A3. 6 淀粉
15、溶液称取lg可溶性淀粉用少量水调成糊状，再用刚煮沸的水稀释成lOOmL，冷却后加人o.1 g水杨酸或o.4 g氯化钵保存。A4 分析步EA4. 1 在已知体积的溶解氧瓶中装满样品（或经稀释的样品）轻轻敲击瓶颈使气泡完全逸出，使瓶塞下不留气泡。A4. 2 用滴定管浸入样品，加入1mL硫酸锺溶液（A3.2),lmL碱性腆化饵榕液（A3.3）盖紧瓶塞，把样品摇匀，使之充分混合，静止数分钟使沉淀下降。A4. 3 加lmL浓硫酸盖紧瓶塞，摇动瓶子使沉淀全部溶解。142 CJ/T 54-1999 A4. 4 静止5min后，量取100mL，沿壁倒入三角烧瓶中，用硫代硫酸铺标准溶液A3.5）滴定至淡黄色，再
16、加入ImL淀粉溶液A3.6），继续滴定至蓝色刚退去为止，记下用量。A5 分析结果的褒述溶解氧（DOmg/L）用下式计算DO V , 0. 012 5 8 1 000 一100 式中v,样品耗用硫代硫酸纳标准溶液（A3.5）的体积，mL;100被测定溶液的体积，mL。A6 其他A6. 1 如样品中含有亚硝酸盐时，可改用叠氮化销修正法，操作步骤不变（同上所述，仅在步骤（A4.2) 中以叠氮化锅碱性腆化御溶液（叠氮化纳的浓度为10g/L）代替碱性腆化饵溶液。AG. 2 如样品含有还原性物质时，可选用高锺酸铮修正法，样品装满溶解氧瓶后，先往瓶中加O.5 mL 浓硫酸和O.5 mLO. 4%高锺酸御溶液，盖紧瓶塞，摇匀，放置15min ，在此时间内粉红色褪去，应随时补加高锺酸饵溶液，直至粉红色保持不褪，然后加1mL1%草酸铺溶液去除多余的高锺酸饵，再加入3mL 碱性腆化饵，其他试剂及操作步骤同事跑量法。A6. 3 含有较多铁盐的样品，在测溶解氧前，应先加40%氟化饵溶液1mL，使氟化饵与铁生成络合物，以消除铁的影响。附加说明z本标准由中华人民共和国建设部标准定额研究所提出。本标准由建设部水质标准技术归口单位中国市政工程中南设计院归口。本标准由上海市城市排水管理处、上海市城市排水监测站负责起草。本标准主要起草人李允中、严英华。本标准委托上海市城市排水监测站负责解释。143
