1、ICS 65.020 B 04 NY 中华人民共和国农业行业标准NY/T 1857.3一2010黄瓜主要病害抗病性鉴定技术规程第3部分:黄瓜抗枯萎病鉴定技术规程Rules for evaluation of cucumber for resistance to diseases Part 3: Rule for evaluation of cucumber for resistance to fusarium wilt 2010-05-20发布2010-0令01实施中华人民共和国农业部发布前-= E司NY/T 1857.3-2010 NY/T 1857 2010 (黄瓜主要病害抗病性鉴定技术规
2、程为系列标准，共8部分:一第1部分:黄瓜抗霜霉病鉴定技术规程;第2部分z黄瓜抗白粉病鉴定技术规程;一第3部分:黄瓜抗枯萎病鉴定技术规程;一第4部分:黄瓜抗疫病鉴定技术规程;第5部分:黄瓜抗黑星病鉴定技术规程;第6部分:黄瓜抗细菌性角斑病鉴定技术规程;第7部分:黄瓜抗黄瓜花叶病毒病鉴定技术规程;第8部分:黄瓜抗南方根结线虫病鉴定技术规程。本部分为NY/T1857-2010的第3部分。本部分的附录A为资料性附录。本部分由中华人民共和国农业部种植业管理司提出并归口。本部分起草单位z中国农业科学院蔬菜花卉研究所。本部分主要起草人:杨宇红、谢丙炎、冯兰香、杨翠荣、龚慧芝。I 1 范围黄瓜主要病害抗病性鉴
3、定技术规程第3部分:黄瓜抗枯萎病鉴定技术规程NY/T 1857.3-2010 本部分规定了黄瓜抗枯萎病鉴定的术语和定义、接种体制备、鉴定条件及试验设计、接种、病情调查、抗病性评价和鉴定记载表格。本部分适用于各种黄瓜资源对黄瓜枯萎病抗性的室内鉴定及评价。2 术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2. 1 抗病性disease resistance 植物体所具有的能够减轻或克服病原物致病作用的可遗传性状。2.2 抗病性鉴定identification of disease resistance 通过适宜技术方法鉴定植物对特定病害的抵抗水平。2.3 抗性评价evaluation of resista
4、nce levels 根据采用的技术标准判别植物对特定病害反应程度和抵抗水平的描述。2. 4 致病性patho酬icity病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力。2.5 人工接种artificial inoculation 在适宜条件下，通过人工操作将接种体置于植物体适当部位并使之发病的过程。2. 6 病情级别disease rating scale 人为定量植物个体或群体发病程度的数值化描述。2 7 病原分离物pathogenic isolate 采用人工方法从植物发病部位分离获得的在特定环境条件下培养的病原物。2. 8 培养基culture medium 可以使病原物生长的自然或人工配制的
5、基质。2. 9 接种体inoculum 用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。2 10 1 NY/T 1857 , 3-2010 2 11 2 12 接种悬浮液inoculum suspension 用于接种的含有定量接种体的液体。病情指数disease index(DI) 通过对植物个体发病程度(病情级别)数值的计算所获得的群体发病程度的数值化描述形式。生理小种physiological m四病原物种内在形态上无差异，但在不同种植物和品种上具有显著致病性差异的类群。2 13 鉴别寄主differential host 用于鉴定和陈分特定病原物的生理小种/致病型/株系的一套带有不同抗性基
6、因的寄主品种/品系或材料。2, 14 黄瓜枯萎病Cucumberfusarium wilt 由尖镰抱菌黄瓜专化型Fusariumoxys户orur.以SchL)f, sp, cucumerinum Owen, 所引起的主蔓基部纵裂，维管束变褐，致整株枯死的黄瓜土传病害。3 接种体制备3, 1 病原物分离从黄瓜发病植株茎部病变的维管束用常规组织分离法分离枯萎病病原物。分离物经形态学鉴定及瓜类(黄瓜、甜瓜、西瓜、南瓜、冬瓜、丝瓜)接种确认为尖镰泡菌黄瓜专化型Fusariumoxysporum (SchL ) f. sp, cucumerinum Owen, 后，采用单抱分离进行分离物纯化，经致病性
7、测定后，保存备用。3. 2 生理小种鉴定对将用于抗性鉴定接种的分离物首先进行生理小种鉴定。生理小种鉴别寄主采用含有不同抗枯萎病单基因的黄瓜材料，具体方法见附录A的A.2, 33 接种体繁殖与保存在接种前需要进行病原物接种体的繁殖。常用繁殖方法为将保存于PDA斜面培养基上的黄瓜枯萎病菌接种于盛有PL培养液(马铃薯200g，乳糖20g，蒸馅水1OmL)的锥形瓶中，置于25C28C摇床上，以120r/min培养5d7 d，培养液经两层纱布过滤，滤液置于离心机中以4000r/min离心10 min，倒除上清液，加适量蒸馆水稀释后，即为于包子悬浮液，供接种用。或将黄瓜枯萎病菌接种在PDA平板上，在25C
8、的恒温箱中培养7d，然后加元菌水，用玻棒将菌丝上的抱子刮下来，经两层纱布过滤后即得抱子悬浮液。常用保存方法为将黄瓜枯萎病菌接种于PDA斜面培养基上，在25C的恒温箱中培养7d后，置4C8C冰箱内保存;或在斜面上加一层灭菌矿物油(超过斜面i顶部1cm)后，置冰箱或室温下保存。4 室内抗性鉴定4, 1 鉴定室设置人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照的条件，使人工接种后具备良好的发病环境。4, 2 鉴定对照品种鉴定时设长春密刺黄瓜为抗病对照品种，津研2号黄瓜为感病对照品种。4 3 鉴定设计鉴定材料随机或顺序排列，每份材料重复3次，每重复10株茵。2 NY/T 1857.3-2010 4. 4
9、 鉴定材料育苗鉴定材料种子经5%次氯酸纳溶液浸种10min后，用清水冲洗，放入垫有两层滤纸的培养皿中，然后于恒温培养箱中28C催芽。待胚根长至0.5cm时，将其播于装有播种基质的塑料育苗钵内。育苗基质为草炭、监石和菜回土(2: 1 : 1)，基质经高温蒸汽灭菌(134C，30 min)。在20C25C的日光温室内育苗，幼苗应生长健壮、一致。4.5 接种4.5. 1 接种期黄瓜枯萎病抗性鉴定接种期为2片子叶展平期。4.52 接种浓度约4X106于包子/mL。4.5.3 接种方法将幼苗连根轻轻拔起，根部用水冲洗后用接种液没过根部浸根5s，然后将接过种的黄瓜苗重新定植于装有播种基质的育苗钵中。4.6
10、 接种后管理接种后将植株置于鉴定室内，每天光照14h，保持植株正常生长的土壤湿度，接种期间温度控制在25C28C范围内。5 病情调查5. 1 调查时间病情调查于接种后10d15 d进行。5.2 调查方法调查每份鉴定材料接种株发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载病情级别，计算出病情指数(DI)。病情指数按公式。)计算=式中zDI-一病情指数;5各病情级别代表数值;: (s X n) DI=主一一一-X 100 . . ( NXS 各病情级别病株(叶)数;N 调查总株(叶)数;5 最高病情级别代表值。5.3 病情分级标准室内病情分级及其对应的症状描述见表1，表1黄瓜枯萎病病情级别划分
11、病情级别症状描述。无症状1 子叶黄化，但未萎蒲2 于叶萎焉3 子叶和真叶萎焉或植株矮化4 枯死3 NY/T 1857.3-2010 6 抗性评价6. 1 鉴定有效性判别当感病对照材料达到其相应感病程度CDI50)，该批次抗枯萎病鉴定视为有效。6 2 抗性评价标准依据鉴定材料的发病程度(病情指数)确定其对枯萎病的抗性水平，划分标准见表2。表2黄瓜对枯萎病抗性评价标准病情指数抗性评价O70 离感(HS)7 鉴定记载表格黄瓜抗枯萎病鉴定结果记载表格见表30表3黄瓜抗枯萎病鉴定结果记载表病情级别编号品种名称来源病情指数抗性评价。级1级2级3级4级1播种日期z2接种日期.3.接种生育期.4.接种病原菌分
12、离物编号:5生理小种类型.6.调查日期2鉴定技术负责人(签字), 4 NY/T 1857.3一2010附录A(资料性附录)黄瓜枯萎病病原菌和生理小种A.1 学名和形态描述尖镰于包菌黄瓜专化主MFusariumoxys户orum(Schl. ) f. sp. cucumerinum Owen. 。气生菌丝白色茂密，在马铃薯藤糖琼脂培养基上则呈淡青紫色或淡褐色绒霉，小型分生于包子长椭圆形，无色，单胞或偶尔双胞，大小7.5m20.。mX2.5m5.。川大型分生泡子纺锤形或镰刀形，元色，15个隔膜，以3个隔膜的居多，顶端细胞较长，渐尖，基部倒圆锥截形或有足细胞，大小为一个隔膜的12.5 I-m32.
13、5mX3.75m6. 25m，两个隔膜的21.25m32. 5mX5.0m7.5m， 三个隔膜的27.5m45. 0mX5. 5I-m10. 0m厚垣抱子顶生或间生，球形，淡黄色。该菌致病性有生理分化现象，分别定名为生理小种1，2、3号;我国黄瓜枯萎病菌的致病性不存在显著差异，即为同一个生理小种，但在鉴别寄主的抗性表现为R、R、S，与已知的小种1、2、3号不同，定名为生理小种40A.2 生理小种鉴定方法A. 2.1 采用的鉴别寄主生理小种鉴别寄主采用MSU8519、MSU441034、PI390265共3个黄瓜品种(材料)。A. 2. 2 枯萎病菌生理小种编码规则与命名表A.l枯萎病菌生理小种及其在鉴别寄主上的抗感反应鉴别寄主小种l(美国小种2(以色列)小种3(日本)小种4(中国)MSU 8519 s R R R MSU 441034 5 S R R PI390265 R 5 R 5 5
