1、ICS 6502030B 44 缮园中华人民共和国国家标准GBT 1492712008代替GBT 1 492712001实验动物 近交系小鼠、大鼠生化标记检测法Laboratory Animals-Methods for biochemical markers of inbred mice and rats200812-10发布 2009-03-0 1实施宰瞀鹛零瓣訾雠瞥霎发布中国国家标准化管理委员会仅19前 言GBT 1492712008GBT 14927共分2个部分：第1部分为实验动物 近交系小鼠、大鼠生化标记检测法；一一第2部分为实验动物近交系小鼠、大鼠免疫标记检测法。本部分为GBT 1
2、4927的第1部分。本部分自实施之I：1起代替GBT 1 49271 2001实验动物 近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法。本部分与GBT 149271 2001相比主要技术差异如下：a) 在近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法中的电泳结果模式图基础上，增加电泳图谱；b)调整了近交系小鼠、大鼠生化标记检测方法中的部分生化位点，小鼠增加了肽酶3(pep3)位点，大鼠增补血清碱性磷酸酶(Alp)和血红蛋白(Hbb)两个生化位点；c) 对部分溶液配方进行调整。本部分的附录A、附录B、附录C和附录D为资料性附录。本部分由全国实验动物标准化技术委员会提出并归口。本部分起草单位：全国实验动物标准化技术委员会。本
3、部分主要起草人：邢瑞昌、刘双环、岳秉飞、鲍世民、张连峰。本部分所代替标准的历次版本发布情况为：GBT 149271 1 994，GBT 149271 2001。实验动物近交系小鼠、大鼠生化标记检测法GBT 14927120081范围GBT 14927的本部分规定了对近交系小鼠、大鼠生化标记进行检测的醋酸纤维膜(板、硬膜)的电泳方法及判断标准。本部分适用于近交系小鼠和大鼠任何品系。2术语和定义下列术语和定义适用于6BT l 4927的本部分。21生化标记biochemical marker表明遗传特征并采用生化方法识别的记号。在小、大鼠中多为一些同工酶和异构蛋白。22生化遗传概貌biochemi
4、cal genetic profile各种近交系多个生化遗传标记表型资料的汇总，从一定程度上反应了各种品系的遗传特征。23纯合性homozygosity同源染色体的相对位置上具有相同基因的状态。近交系动物通过连续的近亲交配绝大部分的位点都具有纯合性。一个品系内任何个体问进行交配产生的后代也具有纯合性。24同基因性isogenicity一个近交品系中所有个体在遗传上是同源的。因此在同一品系内任何个体问进行皮肤和肿瘤移植不被当作异己而受到排斥。如列近交系动物的基因进行检测，一个品系内不同个体的基因型完全一致。25个体性individuality就整个近交系动物而言，每个品系在遗传卜都是独特的，表现
5、在相“广泛的特性上，如生化遗传概貌等。大多数近交品系可通过各自的生化遗传概貌相互区别。3方法原理在小鼠和大鼠体内存在着一峰同工酶和同种异构蛋白。町依据它们在特定电场内携带的电荷不同采用电泳的方法将它们区分，并根据电泳带型即蛋白质的表现型推断其基幽型，建立各种近交系的遗传概貌，定期对它们进行质量监测。4设备和材料41 常压电泳仪(0600 V)。42醋酸纤维素膜(板、硬膜)电泳槽。43电泳点样装置。44醋酸纤维素膜(7 C1119 CIll)。1GB1149271200845醋酸纤维素板(6 CFII8 cm)。46醋酸纤维素硬膜(7 CII9 cm)。47 4冰箱。48 20或40冰箱。49
6、4低温高速离心机。410振荡仅。411组织匀浆机(2mI。或5mI，)。412抗凝毛细管。413抗凝毛细管塞子。414毛细管离心机。415吸耳球。416小砂轮。417解剖板。418手术剪，手术镊。419竹镊子。420微波炉。421 37温箱。422玻璃器皿。423 6 Cnl8 Cm或7 cnl9 Cnl玻璃板。424普通滤纸。425分析天平。426 pH计。427紫外监测仪。428实验室常规用品。429化学试剂：见表1。表1化学试剂中文名称 英文名称(或简写) 分子式 规 格三羟甲基氮基甲烷 TrIs C。HllNO_f 分析纯或化学纯乙=胺四乙酸 ED，IA C】nHl 5N2()8 分析
7、纯或化学纯硼酸 boric acid H 3803 分析纯或化学纯廿氨酸 glycine C：H，Noz 分析纯或化学纯盐酸 hydrochtoric acid fICl 分析纯或化学纯双氧水 hydrogen peroxide 30solution H)2 分析纯或化学纯柠檬酸 cl”ate acid m()nohudrate (：6H8()7H 2() 分析纯或化学纯磷酸氧二：钠 sodium phosphate dibasic Na2HP041 2H 2() 分析纯或化学纯磷酸二氢钾 potassium dihydrogen phosphate KH 2P()4 分析纯或化学纯氢氧化钠
8、sodium hydroxide NaOH 分析纯或化学纯无水醋酸钠 odium acetae anhydrous NaC?H 30? 分析纯或化学纯琼脂粉 分析纯或化学纯醋酸镁 Mg(C?H2(J2)2 分析纯或化学纯表1(续)GBT 1492712008中文名称 英文名称(或简写) 分子式 规 格氯化锰 manganese chloride MnClz 分析纯丽春红一S C22H1。N4Na40S 分析纯三氯乙酸 trichloroacelic acid CC】，COOH 分析纯或化学纯磺基水杨酸 saIfosalicvlic acld C，H 60S2H 20 分析纯或化学纯巴比妥 ba
9、rbital CRH】2N2()H 分析纯或化学纯巴比妥钠 sodium barbital CRIt】2N2 Na 03 分析纯或化学纯氯化镁 magnesium chloride MgCI，6H 20 分析纯或化学纯乙二胺四乙酸二钠 Na，EDTA C1。H1 dN 2Na20 分析纯或化学纯三氯化铁 ferric chloride anhydrous FeCl3 分析纯或化学纯铁氰化钾 ferricyanntum kalium K、Fe(CN)。： 分析纯或化学纯氢氧化铵 ammonium hydroxide NH。()H 分析纯或化学纯醋酸 CH、COOH 分析纯或化学纯丙酮 CHI C
10、OCH 2 分析纯或化学纯葡萄糖一1一磷酸 glucose 1 phosphate CH1109PNa，胱胺盐酸盐 cystamine dlhvdrochlorlde C4H】4C12N2 S2二硫苏糖醇 1，4 dlthlohreltol(DTT) C；HO S4甲基散形乙酸盐 4methylumbellifery acetate C】【】ItsO_日乙酸萘酯 pnaphthyl acette C1 2 H1。()2口一磷酸萘酯钠盐 pnaphthyacid phosphate CHR()4PNa口一磷酸萘酚二钠盐 I?-naphthyl phosphate disodium salt C1
11、0H，()4PNa2n果糖6磷酸 1)fructose-6 phosphate disodium salt C6H【l()gNa2P溴化甲基噻唑蓝 thiazolyl blue tetrazoium bromide(MTT) Cl 8 Hl 6BrN8S辅酶1I pnieotinamide adenine dinucleotide(TPN) C2l H 2 7N7()】7P3甲硫吩嗪酸酯 N methyl phenazinium methyl sulfate(PMS) Cl HHl【N2CH3S04异柠檬酸三钠盐 DI。isoeitric acid t risodium salt C6H。()
12、7N砒葡萄糖l，6=磷酸 glucose 16 diphosphale C。H()1 2 P?葡萄糖6磷酸 I)_glucose 6 phosphate C6Hl 3()9PNa2葡萄糖6磷酸脱氧酶 glucose 6 phosphate dehyd r。genase苹果酸 DI。mallc acid H()2CCH2(OH)C02 H坚固蓝RR盐 fast blue RR sah Cl。Hl 4 N03+12ZnCl4I。白氨酰替I。丙氨酸 I。leuevl 1-alanine C9H】8N2()3过氧化物酶邻二甲氧基联苯胺盐酸盐 。一dianisidine dlhvdrochl()rlde
13、 c。H。(OCH。)NH。?p磷酸萘酚 口naphthyl acid phosphate C1 011BOP Na。硫酸镁 magnesium sulfate MgSO一7H，O 分析纯或化学纯3GBT 14927120085生化标记检测方法总则51电泳样品的制备511血浆以抗凝毛细管行眼眶采血术，500g，离心5 min，分离血浆和血球，吸出血浆备用。512溶血素在去除血浆的富含红血球的试管内加入蒸馏水，红血球与蒸馏水的比例一般为1：4(VV)，振荡1 min，成为红色透明液体，即为溶血素。513组织匀浆上清液采用安死术处死动物，剖腹，小鼠取肾脏1只，肝脏1叶；大鼠取肾脏1只，小肠6 cm
14、8 CII，睾丸1只，并开胸取肺脏1叶。分别加入适量预冷蒸馏水，蒸馏水与组织的比例一般为2：1(Vm)。分别用组织匀浆器匀浆。匀浆液置4低温高速离心机中，2 000g，30 min。以吸管吸取上清液存Xd,iK管中备用。514样品保存上述制备样品均宜新鲜使用，在4普通冰箱中只能保存一天，在一20或一40低温冰箱中保存不超过一个月。52电泳步骤521浸膜将醋酸纤维素膜(板、硬膜)轻轻浸入相应的电泳缓冲液(参见附录A)中，浸入时应避免膜(板、硬膜)上出现气泡。522点样将浸透的膜(板、硬膜)，取出以滤纸吸干，纤维素膜(板、硬膜)面朝上，平置在点样板上，以点样器取预置在样品槽内的编号样品，在膜(板、
15、硬膜)上点样。一次点样量为03 pI。，为增加膜(板、硬膜)上的样品量，可重复点样，最适点样量不宜超过09zI，(三次)。523电泳以记号笔在膜(板、硬膜)上标明原点，泳动方向，迅速将膜(板、硬膜)搭在事先放人缓冲液的电泳槽纸桥上，盖上电泳槽，接通电源，电泳条件见相关条款。53染色531蛋白染色法电泳结束后取出膜(板、硬膜)置人02丽春红染液中，5 rain后以竹镊子取出换以57醋酸脱色直至电泳区带清晰可见。532酶显色板法适用于醋酸纤维素膜。5321 将酶显色液(参见附录B)新鲜混和。加入2热琼脂3 mI。4 mI。，迅速混匀，均匀倒置在7 C1129 cm的玻璃板上，制成酶显色板。5322
16、电泳结束后取出膜将点样面贴在酶显色板上，注意将膜与酶显色板间的气泡排尽，但不可移动膜的位置。5323将带膜显色板移至37温箱保温，直至酶区带清晰显现。5324取下已显色的膜浸入57醋酸中终止反应。533琼脂覆盖法适用于醋酸纤维素板(硬膜)。5 3 3 1 电泳结束后取出醋酸纤维素板(硬模)。5 3 3 2新鲜混和酶显色液迅建与2 mI3 m12蹦热琼脂混匀，均匀倒放在水平放置的醋酸纤维素板(硬模)上。5 3 3 3待琼脂冷却固定后将醋酸纤维索板(硬模)移人37温箱-茛至酶区带清晰疑现。5 3 3 4将醋酸纤维素板(硬模)放57醋酸中终止反应。6小鼠生化标记检测细则6 1碱性磷酸酶l(alkal
17、ine phosphatasc I，Akpl)Chr l6 I 1样品：肾匀浆，0 6，tI。62缓冲液rrisCilrate pH 8 3参虬附录A的第A 9章。63电泳支持物：醋酸纤维硬膜(板)。64电泳条件：u一200 Vf_40 rain移动方向由负极至正扳。65染色方法琼脂覆盖法。66染色液参见附录B的第B 11尊。6 j 7标准对照：Akp a C57816J 快带Akpl b CBAN 慢带6 1 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较6 1 9 Akpl 电泳结果及模式图，见图1。l唰-_-_-_-+A B B A A B A B A B Phenmypc A B
18、 B A A B A B A Bn hb bb bb bb GoUm ”bbb 图1 AkpI电津结果殛模式图谱6 2碳酸酐酶2(carbonic anhydrase 2Car2)Chr 36 2 1样品：溶血索0 3，t1。6 2 2缓冲液NaC：HO E1)FA pH 5 d参虬附录A的第A 1章。6 2 3电泳支持物：醋酸纤维索硬膜。6 2 4电泳条件：U=200 Vf=40 min移动方向由正极堑负橄。6 2 5染色方法蛋白染色法。6 2 6染色液参见附录B的第B 6章。6 2 7标准对照：a C57BI。6Jb BALBcJ慢带快带6 2 8判断方法参j!i J述对照动物读出带型后与
19、附录c作比较6 2 9(Tar2电泳鲇粜及模式图”网2。GB1 14927 12008 l一m。f-一-一一：一-一-二】二】二】二】二1二】二】rH 13 I B A AB B A A A phcnO口” B B B B A AB 11 A A Abbbb bb bbn hbww bb bh bh bb aa ab bba aa圈2 Car2电泳结果及模式图谱6 3肾过氧化氢酶一2(kidney catelase，Ce2)Cbr 76 3 1样品：肾匀浆以蒸馏水1：3稀释，0 3 pL。6 3 2缓冲液：T ris Citrale pH 7 6参见附录A的第A 3章6 9 9电泳支持物：醋酸
20、纤维索膜。6 3 4电沐条件：U一200 Vt=25 min移动方向负极生。饭。6 3 5染色方法：酶显色板法。6 9 6染色液参见附录B的第B 8章。6 3 7标准对照：Ce2 a BAI，Bcd 快带Cc2 b CBAN 慢带6 3 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附求C作比较。6 3 9 Ce2电泳结果及模式图，见圈3。A A A A A B A A A A Phenotv A A A A A H A A A Aaa bbaaGIyoc a aaaa bba图9 Ce2电泳结果及模式图谱6 4酯酶1(este牡I，Es J)Chr 86 4 1样鼬血清，0 3“L。6 4 2缓冲
21、液phosphate buffer pH 7 0参见附录A的第A 2章。6 4 9电泳支持物：酣酸纤维膜。6 4 4电泳条件：U=1 40 V，t一30 min移动方向由m极至正极。6 4 5染色方往：酶显色板法。6 4 6染色液：参见附录B的第B1章。6 4 7标准对照：EH J a C57BI6J 带EsJ b CBAN 慢带66 4 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录c作比较6 4 9 Esl电泳结果及模式图，见图4。“二二一=一_IA A B AB B B B Phenoqpe A A A A B AB B B B abbb Oenoqpe ab bb bb图4 EsI电泳结
22、果殛模式图谱6 5酯酶3(esterase_3，Es3)Chr 116 5 1样品：肾匀浆。6 5 2缓冲液：Tris Glycine pH 8 9参见附录A的第A 7章。6 5 3电泳支持物：醋酸纤维硬膜。6 5 4电泳条件：U一280 V，t=28 min，移动方向由负极至正极。6 5 5染色方法琼脂覆盖法。6 5 6染色液：参见附录B的第B l章。6 5 7标准对照Es3 a BAl，BcJ 慢带Es3 b Tw 快带Es3 c CBAN 最慢带6 5 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录c作比较。6 5 9 Es3电泳结果及模式图，见图5。麟 一-_脚_-_=-= I I I
23、I I I IB B C AC A A C AC phenotyp8 B B c AC A A C ACbb bbac(mlyp2 bbacw K图5 ES3电泳结果殛模式图谱6 6酯酶10(eNterase 10，Es】0)chr 146 61样品：肾、肝匀浆。6 6 2缓冲液：Tris Glycine pH 8 9参见附录A的第A 7章。6 6 3电泳支持物：醋酸纤维素板(硬膜)。6 6 4电泳条件：u=280 V，忙28 min，移动方向由负极至正极。6 6 5染色方法琼脂覆盖法。6 6 6染色液：参见附录B的第B 2章。6 6 7标准对照Esj0 a BALBd 慢带Esl0 h CB
24、AN 快带Esj0 c TW 最慢带6 6 8判断方法：参照L述对照动物读出带型后与附录C作比较6 6 9 EslO电津结果及模式躅，见圈6。：=i=i=习-_-I- _B B A B A A phenolype EslO B B A B A AMaa Oenotypel：slO bhC C A C A A phenolype nJ C C A C A Aaa(h04口Es3图6 EslO电泳结果殛模式图谱6 7葡萄糖6磷酸脱氢酶-1(glucose 6 phosphate dehydrogse_1，G州I)Chr 46 7 1样品新鲜肝或肾匀浆，0 9 pL。6 7 2缓冲液：Tri s_G
25、lycine pH 8 9参见附录A的第A 7章。6 7 3电泳支持物：醋酸纤维紊板(硬膜)。6 7 4电泳条件U一200 V，f_45 min，移动方向由负极至正极。6 7 5染色方法琼脂覆盖法。6 7 6染色液：参见附录B的第B 7章。6 7 7标准对照Gpdl a C57BI。6J 慢带Gpdl h BAIBd 快带Gpdl c rw 最慢带6 7 8判断方法：参照上述对照动物读出带剐后与附录C作比较。6 7 9 Gpdi电泳结果及模式图见图7。一。二【】二【】【】=B B A B B A B Phenmype B B A B B A Bbb bbbb bbbb Genoqpe bbbb
26、 t,b aa bb图7 Gpdf电泳结果及模式圈谱6 8葡萄糖磷酸异构酶1(一ucoseI)h08phatc isomerase 1，Opil)Chr 76 8 1样品：溶血素，0 3 FL。86 8 2 缓冲液：TGlyeme pH 8 5参见附录A的第A 6帝。6 8 3电泳支持物：醋酸纤维素硬膜。6 8 4 电泳条件：U=900 Vf-30 min，移动方向由正极至负极。6 8 5染色方法琼脂覆盖法。6 8 6染色液参见附录B的第8 3章。6 8 7标准对照(，j a BAI。BeJ 幔带(；1 b C52816J 快带6 8 8判断方法：参照上述对照动物凄出带型后与附录C作比较6 8
27、 9 GpJ电泳结果及模式图见图8。l。，。一nmmm二二-一am二二二B B B B A AB b A A A P口olv B B B A AB T3 Abb bb bh bhb aacnbb bb bbn图8 Gpll电泳结果殛模式图谱6 9血Ii蛋白B链(hemoglobinp chain，Hbb)Chr 76 9 1样晶溶血豪内加入14体积的烷化剂参见附录B的第B 9章，0 3 pL。6 9 2缓冲液：1-mGlycine pH 8 5参见附录A的第A 6章。6 9 3电泳支持物醋酸纤维素膜。6 9 4电泳条件：U一200 V，=30 min，移动斤向南负极至正乜l。6 9 5染色方法
28、：蛋白染色法。6 9 6染色瘦参见附录B的第B 6章。6 9 7标准对照：Hbb s C5 7BI叫 快带Hbb d BALBcJ 慢带6 9 8判断方法：罄照h述对li动物读出带型后与附录(1作比较。6 9 9 Hbh电淋结果及模式图，见图9。小加烷化剂处理的电泳结果及模式圈见图10。 眵-盗墓。：jS S s D SD p D I)D PhcnoH口 S S s D SD P D D I)川sddd dd dd 0e-Inyp “sd ”“dd“图9 Hbb电渌结果及模式图谱Is S s D SD P D D D Phenetype s S s D SD P I)D f)$ddPP dd
29、dd dd dd“ ad dddd图10 Hbb电泳结果殛模式图谱(未烷化)6 10异柠檬酸脱氢酶一I和苹果酸酶一1(啪cltrate dehyd。gena se_1，malic en2yrilel+Idh J和ModlChrl96 10 1样品：肾匀浆0 3 pL。6 10 2缓冲液：Tris Citrate pH 7 6参见附录A的第A 3章。6 10 3电泳支持物：醋酸纤维素硬膜。6 10 4电泳条件：U-200 V，t-35 min移动方向由负极至正极。6 10 5染色方法：琼脂覆盖法。6 10 6染色液参见附录B的第B 4章。6 10 7标准对照Idhl 8 BALBc 慢带Idhl
30、 b CBAN 快带Mod a BALBe 快带Modl b CBAN 慢带6 10 8判断法参照卜述对照动物读出带型后与附录C作比较。6 10 9 I曲I和Modl电泳纬果及模式图，见囝11，胁，-_A B B A B A A Phenoqpe A A B B A B A AM bb bbbb aaGcnotypeaa bb bbbb n围11|dhl和M0df电泳结果殛模式图肽酶3(peptidase_3，Pep3)Chr 1样品肾匀浆，0 6 pI。缓冲液：Tris Glycine pH 8 5参见附录A的第A 6章。电泳支持物醋酸纤维硬膜。电泳条件：U一200 V，t=30min，移动
31、方向由负极至正极。染邑方法琼脂覆盖法。I，6 11 6染色液参见附录B的第1=i I 2章。6 11 7标准对照：Pep3 a C57BI。6J 悭带Pep3 b CBAN 带Pep3 c FAlTM 最快6 11 8削断方法：参照上述对照动物读出带型后与附硅C作比较6 11 9 Pep3电泳结果及模式圈，见图1 2。k蔫确嘲GBT 14927 12008皿二工口工 ”：- -B C A B C B A Ph即啊 B C A e C B Abb bb cc bh oenolv bb c bb m图12 Pep3电泳结果殛模式图6 12磷酸葡萄糖转位酶l(phosphoglcomulase 1瞻
32、m 7)Chr 56 12 j样品：肾匀浆，0 6 pL。6 12 2缓冲赦：Tris Glycinc PH 8 5参见附录A的第A 6章。6 12 3 电泳支持物醋酸纤维索硬膜。6 12 4 电泳条件U=900 V卢4 0 mln，移动方向由负极争正槭。6 12 5染色南法琼脂覆盖法。6 12 6染色液参见附录B的第B 5章。6 12 7标准对照：Pgml a C57BL6J 快带Pgm b CBAN 慢带6 12 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附采(1作比较。6 12 9 Pgnl J电泳结柴及模式罔，见网1 3。_-_*，一。-。一。-。A B A B A R B A B B
33、Pbcnotyp。 A B A B A B b A B Bhhn bb bbbb bb Genotypebbbbb bbbb图13 Pgmf电泳结果殛模式图I6 13转铁蛋白(transferrinTrf)Chr 96 13 1样品：血清t0 3L。6 13 2缓冲渡：TrisGlyeine pH 8 5参见附录A的第A 6章。6 13 3电泳支持物：醋酸纤维素膜。6 13 4电泳条件：U=200 Vt一25 min移动方向由负极至正极。6 13 5染色方法：蛋白染色法。6 13 6染色液参见附录B的第B 6章。6 13 7标准对照：7rf a CBAN 恢带nf b C57BL6J 慢带6
34、13 8判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录C作比较6 13 9 n，电泳结果及模式图，见图14。_-_。-【I】口B B B B A B B B Phcn嘶 B RMb6bb6 GenoWpebb7夫鼠生化标记桓测细则国14 Trt电泳结果殛模式图7 1碱性磷酸酶1(alkaline phosphatase 1Akpl)Chr 97 1 1样品：肾匀浆t0 3 pL。7 1 2缓冲液：Trls EDTA_Bora：eMgCI，PH 7 6参见附录A的第A 8章7 l 3屯泳支持物：醋酸纤维素硬膜。7 1 4电泳条件：U=200 V，t一40 rain，移动方向由负极至正极。7 1 5染色
35、方法琼脂覆盖法。7 1 6染色液：参见附录B的第B 10章。7 1 7标准对照：Akpl a F334N 一条带Akp 7 b WKY 缺失一条带7 1 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较。7 1 9 Akpl电泳结果及模式图，见图1 5。2”f-GBT 14927 12008【I IA A A B B B B A Phenotypc A A B B B B A bb bb日 C,tnotype nbb M bb bb M图15 Akpl电泳结果殛模式圈7 2 血清碱性磷酸酶“plasma alkaline phophata3e一1-Alpl)Chr 97 2 1样品：血清，
36、0 3”L。7 2 2缓冲液；Tris EDTABorate pH 8 4参见附录A的第A 5章。7 2 3电泳支持物醋酸纤维硬膜。7 2 4电泳条件U=200 V，t=30mint移动方向由负极至正极。7 2 5染色方法：琼脂覆盖法。7 2 6染色禳：参见附录B的第B13章。7 2 7标准对照：Alp a SHR 快带AJ“ b BN 慢带7 2 8判断方法：参jll上述对照动物读出带型后与附录D作比较。7 2 9 Alp电泳结果及模式图，见图16。o|_B B B B A A B B B B Pn岍 B B B B A A 8 B 日8bb bbbb ubb bb bb Oc7】oly*
37、bb bb bb bbbb bb图16 A岫l电泳结幂殛檀式田7 3过氧化氢酶一1(Catalase一1CH)Chr 27 3 1样品溶血索，o 6 p1J。7 3 2缓冲液：TrisEDTABorate pH 8 4参见附录A的第A 5章，7 3 3电泳支持物：醋酸纤维素膜。7 3 4电泳条件：U=200 V，t=30 min移动方向由负极至正极。7 3 5染色方法：酶显色板祛。7 36染色液：参见附录B的第B 8章。7 3 7标准对照：Cs J a F334N 快带csj b WKY 慢带7 3 8判断方法参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较7 3 9 Csl电泳结果及模式图，见图17
38、。-B B A B B A A B Phetype b B A B B A A Bhb bhGebb bb aE bb bbaabb图17凸7电泳结果及模式围酯酶l和酯酶3(eserase l，estsc-3，砾j和E娟)Chr 1 9，111样品小肠组织匀浆，0 3 pI，。2缓冲液：Tri s_EDTA Borate pH 8 4参见附录A的第A 5章。3电泳支持物：醋酸纤维紊硬膜。7 4 4电泳条件：u=200 Vf=35 min移动方向由负极至正极7 4 5染色方法：琼脂覆盖法。7 4 6染色液：参见附录B的第B 1章。7 4 7标准对照：Es a F334N 一条带E“ b AC 缺
39、失带F334NSHR快带最慢带慢带判断方法参照上述对照动物读出带型后与附泶D作比较Esl和Es3电泳结果及模式罔，见图18。A B A AaahA A三A童A D B D D：B十 一n，_Photyp8 A A A A B A AG枷type aabb图18 b1和ES3电泳结果及模式图lIo一I+EEE8944777 5酯酶一4(e sler8sP4tEs4)Chr 197 5 1样品：肾匀浆0 3txL。752缓冲涟：TrisEDTABorale pH 8 4参见附录A的第A5章7 5 3电泳支持物：醋酸纤维索硬膜。7 5 4电泳条件：u一200 V卢35 min。移动方向由负极至正极。
40、7 5 5染色方法：琼脂覆盖法，7 5 6染色液：参见附录B的第R1章。7 5 7标准对照：Ea4 a SHR 三条快带Es4 b WKY 三条慢带7 5 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与跗录D作比较。7 5 9 Es4电诛结果及模式图，见图19。GBT 14927 12008“：g-_-it=-i= - -B B A B B A A B B phenotype B B A A B B A A B Bn bb bb”bb Gcllom bb bbbbMbb bb图19 ES4电泳结果及模式圉7 6酯酶-6，8，9(estera冲6，8，9，Es689)Chr 8，19-1 97 6 1
41、样品皋丸匀浆，0 6ttL。7 6 2缓冲液zTris-EDTABorale pH 84参见附录A的第A 5章7 6 3电泳支持物：醋酸纤维索板硬膜)。7 6 4电泳条件：U=200 V，卢35 rain移动方向由负极至正投。7 6 5染色方法：琼脂覆盖法。7 6 6染色灌：参见附录B的第B 1章。7 6 7标准对照Es6Es6Es8Es8Es9F344NBNBNF344N快带慢带快带慢带快带a F344N 慢带7 6 8判断疗法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较7 6 9 Es6，89电泳结果及模式圈见图20。trI 暑L E$6-_-_-：-_9哮 - -_=I【1IIAA A A
42、 B A B B6 Phcnotype A A A A A B A B BMbb脚Gcmq口bb n bb bbB B B B B A B A A8 Phemtypc B B B B B A B A Abbbb自8 Ccnocbb bb bbbb nA A A A A C A C C B9 pbcmtypc A A A A A C A C Ccc n cc cc脚。即0lypMcc“鲴20 Es6，89电泳结果爰模式图7 7酯酶10(esterase 10，EslO)Chr 197 71样品：肺匀浆，06“L。7 72缓冲液：TrisEDTA-Borate pH 8 4参见附录A的第A 5章。
43、电泳支持物：醋酸纤维素硬膜。电泳条件U-200 V，卢35 min移动方向由负极至正极染色方法：琼脂覆盖法。染色液：参见附录B的第B 1章。标准对照zE5lO a F344N 三条慢带Esl0 b BN 三条快带77 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较7 7 9 Esl0电泳结果及模式图，见图21。-A A A B A B B B B e110目m A A A B A B B B Baabbbb bb Ccnotype m口bbbb bbbb圈21 ESf0电泳结果殛模式圉78血红蛋白一口链(hemoglobinchain，Hbb)Chr17 8 1样品：溶血紊，0 6 pL
44、(溶血素：6moIL尿素=I，3)。7 8 2缓冲液：Tris-EDTA-Borate pH 8 4参见附录A的第A 5章。7 8 3电泳支持物：醋酸纤维硬膜。7 8 4电泳条件：U-200 V，户35min，移动方向由负极至正板。785染色方法：蛋白染色法。7 8 6染色液：参见附录B的第B 6章。1 6I-_-_口-_-Jh，、【叫一+7 8 7标准对照：Hbb a F334N 两条带Hbb b I，EWM 缺失一条带7 8 8判断方法：参照上述对照动物读出带型后与附录D作比较7 8 9 Hbb电泳结果及模式图t见图22。l 11m之A A A A B B A A A A phen0目 A
45、 A A A B B A A A An nbb口n Genotype aab,b aa n n团22 Hbb电泳结果殛模式囱8近交系太、小鼠常规遗传监测判断标准近交系动物具有纯合性，同基因性和个体性，因此送楦动物每个生化标记的袁型都应为纯合型f每个品系内个体间生化标记表型都应一致；经检测获得的生化遗传概貌应与原品系的生化遗传概貌相符。依据近交系小鼠太鼠生化检测标记细则，完成检测并符合上速标准的近交系可揽为经常规遗传监测未发现遗传变异的合格品系。如果某些品系检测结果与上述标准不相符，应依据以下原则做出分析和处理(见表2裹2遗传检耐雏果的分析与处理原则m类 目符类女 日能发生女#的原目音女；f十疵
46、点 m期&遗传8肇 淘、重新引种一十位 m期遗传g 再次送检发遗传女壹B经目定再次送检时动物应根据监测机构的要求选送。再次检测时如未发现带杂台型位点的动物，该品系可被视为合格的近交系品系，但应注明突变基用的名称，必要时参照宴验动物遗传标准对品系的名称加以修订。如再次检测时仍发现带有杂台型位点的动物该品系应予以淘汰，重新引种。GBT 1 49271_一2008A1 AcetateEDTANaC2H302EDTAdistilled water up toA2 phosphate bufferNa2 HP()412H20KH2P04distilled water up toA3、Tris CitrateTrisdistilled water10Citrate aciddistilled water up toA4 Tris HClTrisdistilled waterHCl 01 molLdistilled water up toA5 Tris EDTA BorateTrisEDTAboric aciddistilled water up toA6 Tris GlycineTrisglyc
