1、ICS 07.100.30 C 53 每昌中华人民共和国国家标准G/T 19915. 1-2005 猪链球菌2型平板和试管凝集试验操作规程Procedure of plate and tube agglutination for Stre ptococcus suis type 2 2005-09-27发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员人2005-11-01实施GB/T 19915.1-2005 前猪链球菌2型是链球菌属的成员，其致病菌株可致猪链球菌病，引起猪败血症、脑膜炎等。人可通过伤口感染该菌，并导致发病和死亡。为了通过检测猪血清中猪链球菌2型的抗体，进行猪链
2、球菌2型病的检测和监测，特制定本标准。本标准由国家标准化管理委员会提出。本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。本标准由中华人民共和国江苏出入境检验检疫局和中国检验检疫科学院负责起草。本标准主要起草人z陈国强、张敬友、张常印、唐泰山、姜巍、王凯民、林祥梅、韩雪清、吴绍强、刘建、贾广乐、梅琳。本标准为首次发布。I 1 范围猪链球菌2型平板和试管凝集试验操作规程本标准规定了猪链球菌2型平板和试管凝集试验的操作技术要求。本标准适用于猪及其他各种家畜猪篮主苦子哩主革的检测。2 规范性引用文件下列文件中的条款、的修改单(不包括勘误是否可使用这些文千3. 1. 1 3. 1. 2 3. 1.3 3. 1
3、. 4 G/T 19915.1-2005 摇匀。摇匀。3.2.1 3.2.2 3.2.3 3.2. 4 ，月E于填写血清号。运送和保存用冷藏方法运送血4 操作方法溶血，无腐败气味。内不能送到实验室，可l的被检血清25L。- 均匀混合，形成直径约2cm的液区。轻微摇动，室温下于4min内观察结果。4. 1. 4 每次操作以不超过20份血清样品为宜，以免样品干燥而不易观察结果。4.2 试管凝集试验4.2. 1 稀释被检血清4.2. 1. 1 每份被检血清用6支试管，标记检验编号后各管加入0.5mL稀释液。4.2.1.2 取被检血清0.5mL，加入第1管，充分混匀，从第1管中吸取0.5mL加入到第2
4、管，混合均匀后，再从第2管吸取0.5mL至第3管，如此倍比稀释至第6管，从第6管弃去0.5mL，稀释完毕。4.2. 1. 3 从第1至第6管的血清稀释度分别为1: 2、1: 4、1: 8、1: 16、1: 32、1: 64。GB/T 19915.1一20054.2.2 加抗原将0.5mL抗原加入已稀释好的各血清管中，并振摇均匀，血清稀释度则依次变为1: 4、1: 8、1 : 16、1: 32、1: 64、1: 128。各反应管反应总量为1mL。4.2.3 设立对照每次试验都应设立下列对照。4.2.3.1 阴性血清对照阴性血清的稀释和加抗原的方法与被检血清同。4.2.3.2 阳性血清对照阳性血清
5、的最高稀释度应超过其效价滴度，加抗原的方法与被检血清同。4.2.3.3 抗原对照在0.5mL稀释液中，加0.5mL抗原。4.2.4 配制比浊曹每次试验均须配制比浊管，作为判定凝集反应程度的依据，先将抗原用等量稀释液作一倍稀释，然后按下表配制比浊管。表1比浊曹的配制试管号1 2 3 4 5 抗原稀释液1. 00 o. 75 0.50 0.25 。0.5%石炭酸生理盐水。_ 0.25 0.50 0.75 1. 00 清亮度IC%)。25 50 75 100 凝集度标记+ + + + 注:+十+表示完全凝集，菌体100%下沉，上层液体100%清亮p十十+表示几乎完全凝集，上层液体75%清亮;+表示凝
6、集很显著，液体50%清亮，十表示有沉淀，液体25%清亮p一表示元沉淀，液体不清亮。4.2.5 感伟所有试验管充分振荡后，置370C温箱感作20h。5 判定5. 1 平极凝集试验结果判定当阴性血清对照不出现凝集(一)，阳性血清对照出现凝集+)时，则试验成立，可以判定。否则应重做。在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性+)，不出现凝集者判为阴性(一)。出现阳性反应的样品，可经试管凝集试验定量测定其效价。5.2 试管凝集试验结果判定5.2.1 试验成立条件当阴性血清对照和抗原对照不出现凝集(一)，阳性血清的凝集价达到其标准效价士1个滴度，则证明试验成立，可以判定。否则，试验应重做。5.2.2 确
7、定每份被检血清效价2 比照比浊管判读，出现+以上凝集现象的最高血清稀释度为血清凝集价。待检血清最终稀释度1: 4并出现+以上的凝集现象时，判为阳性反应。mOON-.mF白白FH阁。华人民共和国家标准猪链球菌2型平板和试管凝集试验操作规程GB/丁19915.1-2005国由晤中国标准出版社出版发行北京复兴门外三里河北街16号邮政编码:100045网址电话:6852394668517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷各地新华书店经销* 印张O.5 字数5千字2005年12月第一次印刷开本880X12301/16 2005年12月第一版定价8.00元如有印装差错由本社发行中心调换版权专有侵权必究举报电话:(010)685335339峰书号:155066 1-26771 GB/T 19915.1-2005
